Способ разделения популяций клеток

 

СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ПОПУЛЯЦИИ КЛЕТОК, включающий присоединение к исследуемым клеткам маркирующих антител, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения выхода клеток, специфические антитела связьшают с липосомами , содержащими монокристаллы ферромагнитного материала, а разделение осуществляют в неоднородном магнитном поле, при этом создают дрейф градиента в направлении, в котором производят выделение данного типа клеток.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (51)4 А 61 В 10/.00

/ :с, /. у

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНЙЯ :К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

00 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3442452/28-1 3 (22) 21.05.82 (46) 30.07,85. Бюл. У 28 (72) В.А.Намиот, Л.Б.Марголис и Л.М.Клюкин (71) МГУ им. М.В.Ломоносова (53) 635.375(088.8) (56) G. Reiffemsthul и др. Arch.

Gynak, 1971, т.211, вып. 4, 595-616. (54) (57) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ПОПУЛЯЦИИ

КЛЕТОК, включающий присоединение

„„Я0„„1169615 A к исследуемым клеткам маркирующих антител, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения выхода клеток, специфические антитела связывают с липосомами, содержащими монокристаллы ферромагнитного материала, а разделение осуществляют в неоднородном магнитном поле, при этом создают дрейф градиента в направлении, в котором производят выделение данного типа клеток.

1169615

Составитель Г.Крюкова

Техред О,Неце Корректор О.Тигор

Редактор А.Ревин

Заказ 4643/4 Тираж 722 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул, Проектная, 4

Изобретение относится к биофизике и может быть использовано для создания высокопроизводительных и се- лективных приборов, сепарирующих клеточные популяции. 5

Цель изобретения — ускорение и повышение выхода клеток, Способ осуществляют следующим образом.

Используют монослой L-клеток, предварительно инкубированный в среде с конканавалином А. Используют также магнитолипосомы с антителами против конканавалина А. Магнитолипосомы получают из дистероилфосфа- 15 тидилхолина. В круглодонную колбу помещают раствор липида в хлороформметаноле (2:1) и добавляют ферромагнитные частицы (диаметром 50 нм)

15 мг липида в 3 мл растворителя 20 смешивают с 2 мг частиц и содержимое. колбы выпаривают при вращении на роторном испарителе. К образовавшейся пленке приливают 1 мл буферного солевого раствора или раствораХэнкса 25 и колбу интенсивно встряхивают. Полученную эмульсию подвергают ультразвуковой обработке в течение 30 с при 55 С на приборе УЗДН-2, В среду перед озвучиванием добавляют антитела против конканавалина А. От несвязавшихся антител липосомы отделяют

4 кратным центрифугированием (2000, 5 мин). Магнитолипосомы инкубируют с клетками в течение

20 мин. Полученные клетки смешивают с L-клетками, не имеющими на себе молекул конканавалина. Образовавшуюся смесь пропускают через устройство, представляющее собой трубку, внутри которой действует стационарное магнитное поле с периодически меняющимся вдоль этой трубки градиентом напряженности. После этого измеряют концентрацию полученных конканавалином клеток до и после разделения. Выделенная фракция налипала на стенки трубки вблизи полюсов поля, Обогащение этой фракции клетками, имеющими на себе конканавалин А, по сравнению с первоначальной смесью составляло 4,7 + 0,2, Эффективное speмя составляло 3-5 мин. За это время разделяли порядка 1 млн клеток, так как эффективная скорость разделения составляла несколько сот тысяч клеток в мин, что более чем на порядок выше, чем у известного способа.