Способ определения цистеина

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИСХЕИHA путем прямого титрования анализируемой пробы раствором сульфата меди в присутствии индикатора, о тличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и избирательности способа, в качестве индикатора используют 1

СОЮЗ ССВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (и)4 G 01 N 31/16

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ У СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

flQ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3640754/23-04 (22) 08.09.83 (46) 30.08.85. Бюл. № 32 (72) Т.В. Ковальчук и А.А. Медведовский (71) Киевский научно-исследовательский институт фармакологии и токсикологии (53) 543.54.45 (088.8) (56) Фармакопейная статья 42-104876. Цистеин.

Эшворт M.P.Ô. Титриметрические методы анализа органических соединений. M., "Химия", 1968, с. 553.

Авторское свидетельство СССР № 545354, кл. G 01 N 31/16, 1975. (}awargions J.À., dt aII, Microdetermination of o -Aminoacides

by direct Titraition with Coppen (II) SuIphate SoIution, Microchimica Acta, 1974, № 6, р. 1003-1008.

„„SU„„1176241 A (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИСТЕИНА путем прямого титрования анализируемой пробы раствором сульфата меди в присутствии индикатора, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повьппения чувствительности и избирательности способа, в качестве индикатора используют 1(2-пиридилазо)-нафтол-2 и титрование проводят в присутствии сульфата натрия и буферного раствора с рН 4,4-4,8. 1176241

Изобретение относится к области анализа органических лекарственных препаратов, а именно к способу количественного определения цистеина, используемому для контроля качества продукции, выпускаемой фармацевтической промышленностью и изготавливаемой аптеками.

Цистеин (2-амино-р-меркапто-пропионовая кислота) является незаменимой аминокислотой, существенно влияет на состояние обменных процессов в организме. В медицине применяется, главным образом, при глазных болезнях, а также как препарат антидотного действия, в качестве консерванта инъекционных растворов и др.

В глазчых каплях цистеин применяется в растворах самостоятельно, часто в сочетании с аскорбиновой кислотой, а также с другими препаратами.

Целью изобретения является повышение чувствительности и избирательности способа за счет устранения влияния анионов, образующих соединения с медью.

Способ количественного определения цистеина разработан в двух вариантах: полумикрометод (чувствительность 1,5 мг препарата) и микрометод (чувствительность

0,15 мг).

Пример 1. Полумикрометод титриметрического определения цистеина в препарате: около 0,03 г цистеина (точная навеска) растворяют в

10 мл воды. 1 мл полученного раствора или 1 мл О,ЗХ раствора цистеина (3 мг препарата) помещают в колбу, прибавляют 5 мл буферного раствора pH = 4, 6, две капли раствора индикатора ПАН и титруют медленно по каплям 0,02 м раствором сульфата меди до образования розовофиолетовой окраски, не исчезающей при взбалтывании в течение

1 мин, 1 мл 0,02 М раствора сульфата меди соответствует 0,004846 r цистеина. буферный раствор с рН 4,6: растворяют в воде в мерной колбе на

50 мл 0,7 r ацетата натрия, прибавляют 1 мл разведенной уксусной кислоты и доводят объем раствора водой до метки.

Индикатор ПАН представляет собой 0,1Х-ный спиртовый раствор

1-(2-пиридилазо)-нафтола-2.

0,02 И раствор сульфата меди; растворяют 0,4994 г CuSOy 5Н, О в воде в мерной колбе емкостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки. При необходимости титр полученного раствора устанавливают йодометрически.

0,002 М раствор сульфата меди готовят разбавлением 0,02 M раствора водой 1:10.

Результаты количественного определения цистеина (полумикрометод) представлены в табл.1.

Иикрометод титриметрического определения цистеина в препарате: около 0,03 r цистеина (точная навеска) растворяют в 100 мл воды.

1 мл полученного раствора или 1 мл

0,03% раствора цистеина (0,3 мг препарата) помещают в небольшую колбу или пробирку, прибавляют

0,5 мл буферного раствора рН = 4,6, одну каплю раствора индикатора ПАН и титруют медленно по каплям 0,002 M раствором сульфата меди до образования розово-фиолетовой окраски, не исчезающей при взбалтывании в течение более 1 мин.

1 мл 0,002 И раствора сульфата меди соответствует 0,0004846 r цистеина.

Результаты количественного определения цистеина.в препарате по известному способу приводятся в табл.3, результаты определения цистеина в препарате по известному способу (количество цистеина соответствует микрометоду) представлены в табл.4;

Пример 2. Определение цистеина в лекарственных формах.

Смесь ¹ 1, Раствор цистеина

1% — 5 мл (глазные капли).

Отбирают 0,3 мл испытуемого раствора и производят определение по описанной методике (полумикрометод).

Пример 2. Определение цистеина в лекарственных формах.

Смесь Ф 1. Раствор цистеина

1Х-5 мл (глазные капли). Отбирают

0,3 мл испытуемого раствора и проводят определение по описанной методике (полумикрометод).

1176241

Таблица 1

Израсходовано

0,02 М раствора сульфата меди, мл

Содержание цистеина в навеске, мг. мг

1,551 103,4

2,954 98,5

3,053 101 2

4,361 96,9

1,50

Х = 100,0

0,32

S = 2,4

3,00

0,61

Sr = 0.027

3,00

0,63

+St = + 7,6

4,50

0,90

Таблица 2

Найдено цистеина

Содержание цистеина в навеске, мг

Израсходовано

0,002 М раствора сульфата меди, мл

Метрологические характеристики мг

Х = 100,03

S - =3,34

Sr = 0,033

+St = +10„61

0 15

0,32

О, 155

0 305

0,299

0,431

103ь4

101,7

0,30

0,63

0,30

0,62

99,3

0,45

0,89

95,7

Смесь 2.

Раствор метилцеллюлозы 1 7. — 20 мл (глазные капли)

Количественное определение цисте- 10 ина. К 1 мл исследуемого раствора прибавляют 9 мл воды. К 1 мл полученного раствора прибавляют 0 5 мл буферного раствора рН 4,6, 2 мл насьпценного раствора сульфата нат- 15 рия, одну каплю раствора индикатора ПАН и титруют по каплям при взбалтывании 0,002 M раствором сульфата меди до устойчивого розовоI фиолетового окрашивания.

1 мл 0,002 M раствора сульфата меди соответствует 0,0004846 г цистеина.

Цистеин 0,06 г

Нипагин 0,02 r

Борная кислота 0,4 г

Аскорбиновая 5 кислота 0,04 г

В табл.5 даны результаты определения ингредиентов в лекарственных смесях с цистеином.

Результаты определения цистеина с использованием буферного раствора с различной величиной рН представлены в табл. 6 и 7 (соответственно полумикрометод и микрометод).

Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным обеспечивает более высокую чувствительность (чувствительность известного спасоба 1,25-7,50 мс) и избирательность, что дает возможность проведения анализа в присутствии ряда. других анионов и восстановителей (например глютаминовой, аденозинтрифосфорной, аскорбиновой кислот)., цистеина, продукта окисления цистеина, что имеет значение ввиду неустойчивости растворов цистеина.

Метод позволяет контролировать степень разложения препарата в растворе.

Найдено цистеина, Метрологические характеристики

1176241

Таблица 3

Израсходовано

0,02 M раствора сульфата меди, мл

Взято цистеина, мг (в виде 0,3%-ного раствора) Найдено цистеина, мг

1,62

0,33

1,50

3,15

0,65

3,00

0,63

3 05

3,00

0,94

4,55

4,50

Т а б л и ц а 4

Взято цистеина, мг (в виде 0,03%-ного раствора ) Израсходовано

0,002 M раствора сульфата меди, мл

Найдено цистеина, 0,45

0,15

0,22

0,30

0 81

0,39

0,30

0,83

0,40

0,45

1,17

0,57

П р и м е ч а н и е. При оттитровании на 120% окраска жидкости еще фиолетовая, затем постепенно переходит (через оранжевую) в желтую. В присутствии аскорбиновой кислоты титрование невозможно, перехода окраски индикатора нет.

Таблица 5

Наименование и количество связавшегося титСодержание препарата в навеске, мг

Найдено, Ингредиенты рованного раствора, мл мг

0,02 M раствор сульфата меди

Смесь В 1

Цистеин

103,4

99,5

0,32

1,50

0,62

3,00

4,50

0,91

97,1

0,002 M. раствор сульфата меди

Смесь В 2

1,551

2,994

4,410

106,6

105,0

101,7

101,2

146,6

130,8

134, 1

125,9

1176241

Продолжение табл.5

Наименование и количество связавшегося титСодержание преНайдено, парата в навеске, мг. Ингредиенты мг рованного раствора, мл

Цистеин

0,15

0,33

106,6

0,30

О, 60-.

97,0

0,45

0,89

95,7

Таблица 6

Найдено цистеина, Взято цистеина, мг (в виде 0,37-ного рН раствора) Израсходовано

0,02 М раствора сульфата меди, мл мг

4,6

100,0

3,00

0,62

3,00

3,00

4,3

2,90

97,0

0,60

4,3

2,86

95,3

3,00

0,59

0,64

3,00

4,9

3,10

4,9

0,64

3,10

3,00

0,61

3,00

4,4

2,95

101,8

4,8

0,63

3,05

3,00

Таблица 7

Взято цистеина, мг в виде 0,03%-ного рН раствора) Найдено цистеина, Израсходовано

0,002 M раствора сульфата меди, мл мг

4,6

0,63

101,8

0,30

98,3

4,3

0,61

0,30

4,3

0,30

0,60

97,0

0,65

4,9

105,0

0,30

105,0

0,65

4,9

0,30

0,160

0,291

0,431

П р и м е ч а н и е. При рН 4,3 и 4,9 переход окраски несколько растянут, но титрование возможно

0,305

0,295

0,290

0,315

0,315

103,3

103,3

98,3

1176241

Продолжение табл.7

Найдено цистеина, мг ) 7 рн

4,4

0,30

0,63

0,30

0,64

4,8

П р и м е ч а н и е. При рН 4,3 и 4,9 переход окраски индикатора несколько растянут, титрование возможно.

Составитель В. Шкилькова

Техред С.Мигунова Корректор С. Шекмар

Редактор С. Тю охина

Заказ 5353/44

Тираж 897 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. ужгород, ул. Проектная,4

Взято цистеина, мг в виде 0,037-ного ратсвора) Израсходовано

0,002 М раствора свльфата меди, мл

0,305

0,310

101,8

103,3