Способ определения диеновых конъюгатов

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИЕНОВЫХ КОНЪЮГАТОВ путем обработки биологического материала системой гептан - изопропиловый спирт с последующим определением оптической плотности экстрагированных липидов, отличающийся тем, что, с целью повьапения точности и чувствительности определения, оптическую плотность определяют в изопропиловой среде, предварительно обработанной хлористым натрием в концентрации 0,15-0,40 г/мл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTGPCHGMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3675352/28-13 (22) 19. 12. 83 (46) 15, 10.85. Бюл. У 38

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЪ|ТИИ (72) В.А. Костюк, А. И. Потапович и Е.Ф. Лунец (71) Белорусский ордена Трудового

Красного Знамени государственный университет им. В.И. Ленина (53) 661.729(088.8) (56) Placer Z., Kuzela Ь., Acta biol.

med. germ. 1968, V. 21, р. 121-124.

„„Я0„„1185242 А (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИЕНОBblX K0HЪЮГАТОВ путем обработки биологического материала системой гептан — изопропиловый спирт с последующим определением оптической плотности экстрагированных липидов, отличающийся тем, что, с целью повыпения точности и чувствительности определения, оптическую плотность определяют в изопропиловой среде, предварительно обработанной хлористым натрием в концентрации

0,15-0,40 г/мл.

1185242

2О

Коэффициент распределения ДК в системе изопропанол/

/гептан

Количество

ДК, HM/MI липидов

Экстрагирующая фаза

Изопропанол

5,06+0,6

24,8+0,8

4,9+0,4

2оо ЕРК„

Гептан

Составитель Н.Гуляева

Редактор К.Волощук Техред R.Êàñòåëåâè÷ Корректор Л. Пилипенко

Заказ 6357/40

Тираж 896 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4. Изобретение относится к биологии, преимущественно биохимии, и может быть использовано при определении продуктов перекисного окисления липидов — диеновых конъюгатов в тканях человека и животных в норме и при различных патологических состояниях.

Цель изобретения — повышение точности и чувствительности опреде- 10 ления.

Пример. Определение диеновых конъюгатов в микросомах печени.

Контрольные микросомы крыс и 15 ми<рос;;II,, полвергнутые ферментатнвному п рекисному окислению, гомогенизировали в 10 мл смеси изопропанол/гептан (1: 1). Полученная суспензия центрифугировалась при 1000 10 мин, к насадочной жидкости добавляли 1 5 мл воды для разделения фаз. Гептановый слой аккуратно отбирался и спектрофотл.;етрировался против аналогич- 25 ного .лоя из холостой пробы, не содержащей биологического материала.

К нижнему водно-спиртовому слою добавляли избыток ИаС1 (1,5 г) и интенсивно встряхивали. После 30 отделения воды, содержащей различные водорастворимые соединения, отбирали верхний спиртовой слой и спектрофотометрировали против холостой пробы.

Для расчета количества диеновых конbK)FBHTQB (ДК), образующихся при перекисном окислении липидов микросом печени использовали следующее уравнение:; где С вЂ” количество ДК, нм на мг липидов;

ЬЗ вЂ” разность между оптической плотностью липидов из опытных и контрольных микросом при 233 нм;

E — коэффициент молярной экстинкции ДК при 233 нм, равный 28000 M "см "; толщина кюветы, см;

К„ - количество липидов в пробе, взятой для экстракции, мг, 200 — коэффициент, учитывающий объем экстрагирующей системы.

ДК, имеющие максимум поглощения. в области 233-234 нм, регистрируются как в гептановой, так и в спиртовой фазе, однако в последней их содержание значительно выше.

Количественные результаты, характеризующие расгределение ДК, экстрагируемых из микросом печени, в системе гептан/изопропанол, приведены в таблице и свидетельствуют, что при экстракции этой системой содержание ДК в спиртовой фазе в 5 раз превьш ает их содержание в гептане.