Способ получения электрофореграмм белковых веществ

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭЛЕКТРОФО№ГРАММ БЕЛКОВЫХ ВЕЩЕСТВ путем нанесения образца на поверхность, покрытую полиакриламидню гелем, . с последунэдим помещением ее в электрическое поле окрашиванием ификсацией , отличающийся тем, что, с целью повышения воспроизводимости и расширения возможности различного окрашивания образцов, на поверхности выполнены перпендикулярные пересекакяциеся борозды, SL после фиксации фореграммы подвергают высушиванию при температуре 50-55 С.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) Ш) (5D4 G 0l N 3

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР (21) 3663771/28-14 (22): !5.11.83

- (46) 07.12.85. Бюл. В 45 (71) Одесский научно-исследователь.ский институт курортологии (72) Г.С. Попик и А.А. Мардашко (53) 616.07 (088.8) (56) Остерман Л.А. Методы исследо- ° вания белков и нуклеиновых кислот..

И.1 Наука, 1981, с.. 32-36

{54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭЛЕКТРОФОРЕГРАММ БЕЛКОВЫХ ВЕЩЕСТВ путем на-. несения образца на поверхность, покрытую полиакриламидныа гелем, . с последующим помещением ее в электрическое поле, окрашиванием и фиксацией, отличающийся тем, что, с целью повышения воспроизводимости и расширения возможности различного окрашивания образцов, на поверхности выполнены перпендикуляр- ные пересекающиеся борозды, а после фиксации фореграммы подвергают высушиванию при температуре 50-55 С.

1196771 2

После окончания проведения электрофореза выключают источник

Составитель Л. Соловьев е

Редактдр А. Шишкина Техред Л.Мартяшова Корректор В. Синицкая

Заказ 7559/43 Тираж 896 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к медицинской технике, а именно к лабораторной технике, и предназначено для. разделения в полиакриламидном геле высокомолекулярных соединений (белг ков, нуклеиновых кислот и других1, подвижных в электрическом поле, и " может использоваться при проведении исследований в клинической практике, биологии, медицине и других областях

Цель изобретения ",повышение воспроизводимости и расширение возможности различного окрашивания образцов.

Способ осуществляют следующим образом.

В полость толщиной 1,5-2,0 мм, стенками которой является кювета для .электрофореза, на внутренней поверхности которой выполнены перпендикулярные пересекающиеся гребешки, заливают компоненты полиакриламидного геля. После заливки происхо. дит полимеризация, которая завершается через 30 мин. По окончании полимеризацин верхнюю крышку кюветы снимают и на полученной пленке полиакриламидного геля перпендикулярно пересекающимися с бороздками делают лунки, в которые наносят образцы. Гелевый блок помещают в аппарат для электрофореза и соединяют с ваннами, содержащими буферный раствор, при помощи бумажных мостиков. В качестве электродов используют графитовые стержни. Подключают источник питания и проводят электрофореэ в течение 2,0-2,5 ч.

За это время исследуемые, например, белки и ферменты успевают прой. ти в электрическом поле полиакриламидного геля 5,0-;5,5 см. питания и извлекают из аппарата плен ку с образцами электрофореза образца и затем производят ее окрашивание в зависимости от целей исследования.

После окрашивания разрезают гелевый блок по бороздкам. извлекают гелевые ленточки, располагают их на пронумерованных соответственно образцам предметных стеклах. Затем полоски полиакриламидного геля высушивают на предметных стеклах в сушильном шкафу при 55-56 С в течение 2,0-2,5 ч.

По окончании высушивания образует ся тонкая пленка полиакриламидного геля с разделенными фракциями, которая прочно соединена с предметным стеклом и может подвергаться денситометрии.

Применение предлагаемого способа имеет то преимущество, что разделение в полиакриламидном геле образцов белков или ферментов и их окраска происходит в той же пластине, где проходила формирование геля. Полученные подобным способом блоки полиакриламидного геля могут. быть зафиксированы на предметных стеклах, которые хранятся неограниченно долго,-не требуя специальных условий, 30 выполняемых при хранении других .видов электрофореграмм.

Использование предлагаемого способа снижает трудоемкость процесса, сокращает в-10-12 раз время для его проведения, ликвидирует полностью брак, значительно снижает расход дорогостоящих реактивов (в 4-5 раз).

Кроме того, маркировка предметных стекол с гелевыми пластинами исключает возможность ошибки.

Таким образом, исключение механического повреждения фореграммы, равномерное прокрашивание гелевой пленки по всей площади и на глубину предотвращает искажение результатов при ценситометрии.

Способ получения электрофореграмм белковых веществ

Способ диагностики острого инфаркта миокарда // 1195981

Способ диагностики хронического панкреатита // 1195979

Гемокоагулограф // 1195975

Способ оценки функционального состояния печени у детей, больных хроническим гепатитом // 1195249

Способ определения рибофлавина в цветочной пыльце // 1195248

Устройство для перемешивания биологических жидкостей // 1195247

Способ определения степени повреждения клеток // 1195246

Способ стимуляции полиморфоядерных лейкоцитов // 1195245

Способ диагностики дисфункций менструального цикла, связанных с нарушением эстрогенной активности яичников // 1195218

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750