Способ дифференцирования специфических маркеров иммунокомпетентных лимфоцитов

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н Д BTOPCHGMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3741248/28-13 (22) 03.02.84 (46) 07.0!.86. Бки. ¹ 1 (71 ) Узбекски и и аучно- иссл едовательски и институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных заболеваний (72) P. А. Рашидова и Л. 7. Сольская (53) Л616.07 (088.8) (56) Гришина Т. И., Мюллер С. Одновременное выявление Т-,В-,3,-,0-лимфоцитов и нулевых клеток человека. НИИ гигиены труда и проф. заболеваний АМН СССР и

11 Моск. мед. ин-т, БЗБМ, 1978, № 4, 504-506.

„„Я0„„12О3433 А (59 4 С Ol U 33 48, А 61 В 10, 00 (54) (57) СГ10СОБ ДИФФЕРЕНЦИРОВАНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ

ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ ЛИМФОЦИТОВ пггем .добавления к к1льт рс лимфоцптов эритроцитов барана и зимозана, приготовления мазка и окрашивания. отличаюи1иися тем, что, с целью повыше}ièÿ точности способа, окрашнвание проводят гематоксилин-эозином и дифференциацнк Т-,В-, 3,— и О-л им фоци тон Ii poBo )ят Ilo с посоо пост и эрнтроцитов ок1)апп1ваться в розовый, и чаев тиц зимозана в I олубой цвета.

1203 133 (0c I

Tevpe;l И. Верес Корректор Е Рококо тираж 89(1 11о. писное

ВНИИПИ Рос) (apcгвснного комитета (ССР по делам изобретений и 0! Kpb!THH

113035, Москва, Ж- 35, Рау!нская наб., а. 4, 5

Филиал ППП «Па-e!.T», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор В. Иванова

Заказ 8410147

Изобретение относится к области мс..ицины, в частности им муHo;Iol HH, и мо кст быть использовано в диагностике разли IHIIX заболеваний, где необходимо опрс.(елспис иммунологического статуса.

Целью изобретения является повышение точности дифференцирования 1-,Б-,Д вЂ”,0лимфоцитов.

При 5(ер. Из гспаринизированной крови человека лимфоциты выделяют на фиколл, верографин, отмывают трехкратным цснтрифугированием при 1000 об/мин средой 199.

Эритроциты барана, взятые в раствор Олсвера, трижды отмывают средой 199 цептрифугированием (1500 об/мин — - 1О мип !.

Зимозан конък)гируют с комплементом. (,!5! этого смсшивак)т равные об ьемы О,! g, взвеси зимозана и комплемента, разведенного физиологическим раствором 1:5, смесь инкубируют 30 мин при 37 С, затем дваждь! отмывают центр ифугирова нисм при 1000 об/мHп Iiо 10 мин, из осадка готовят

0,17", о-нук) извесь. К 0,1 мл взвеси лимфоцитов (2 млн, клеток в 1 мл) добавляк)т

0,1 мл 0,5о%-ной взвеси эритроцитов бараны и 0,1 мл 0,17 г„ -ной взвеси зимозан-комплемент, выдерживают при 37 С, центрифугирук)т при 1500 об/мин --- 10 мин и вновь инкубиру)от 1 ч при 4--8 С. Затем IOÎBI3ляют 0,1 мл 0,6%)-ного глк)тарового альдсI иды, смесь вы.(ерживык)т 20 I5IIIH. доводят

Об ьс vl;IHcTH„"..IHðîâBIIHîé водой до края IlpOбирки, 01 мывык)т цснтрифугированием при ! 500 об, мин — 10 IHII, падоса,)очнук) iKH(5 суlilBT на воздухе, фиксирук)т мсTI!ловым с;!иртом, промывают дистиллированной водой, высушивак)т и окрашивают гсматокси.!гин-эозином. Дифференцирование и подсчет производят под микроскопом с иммерсией (20X 90) . Г1ри этом эритроциты барана окраи!И вы к)тся в розовый IIB(. т, частицы зимозаllB f3 голубой Ядро г(их(фоцHT08 окрышиватсм!.о-ф au.i! товыЙ НВсТ. 3В Т-.IHI!фоцит принимался лимфоцит с прилипшими тремя и более эритроцilTBмп бараны, за

В-лимфоци.г-с прилипшими тремя и оолсс частицами зпмозапы, за Д-лимфоцит — С трсv .5! и более прилипшими эритроцитами баран(! H тремя li бо (((. (IpH 5ипп)ими частицами .(Имозыны, за! 0-.1имфоцит —. акОЙ, к коg0 торому прилипа10»5сньц5с трех эритроцитов бараиа ИЛИ cIBCTHII ЗИМОЗапа.

Так, у боль)гого М выявлено Т-51ог

В 13%, Д 2%, Π— 34% лимфоцитов, тогда как по известному спосооу 59, 6, 2,5 и

22,5% соответственно.

Таким образом, предлагаемое техническое решение позволяет повысить точность с5юсоба в 2,4- — 3,9 раза.