Способ определения бластных клеток в смешанных клеточных популяциях на гистологическом препарате

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЛАСТНЫХ КЛЕТОК В СМЕШАННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЯХ НА ГИСТОЛОгаЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ путем их окрашивания и анализа состояния ядрышек в клетка :, отличающийся тем, что, с целью повьш1ения точности способа, в популяции определяют количество клеток с усиленно аргентофильными ядрышками и их соотношение с общим числом клеток , при этом препарат перед окрашиванием обрабатывают в 2н, растворе муравьиной кислоты в течение 10-20 мин, а в качестве красителя используют 50 %-ньш раствор азотно-кислого серебра . (Л с §. гЗ (N9

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

С: (21) 3453036/28-14 (22) 15.07.82 (46) 30,12.85. Бюл. Ф 48 (71) 1-й Ленинградский ордена Трудового Красного Знамени медицинский институт им. акад.И,П, Павлова и

Институт цитологии (72) Н.Н, Мамаев, С.Е. Мамаева и Т.B. Козлова (53) 615.475(088.8) (56) Попеску Э.Р., Лейкемии. Бухарест, 1965, с. 355.

Петрова А.С. и др. Использование цитологического метода в определении степени дифференцировки плоскоклеточного рака полости рта. — Лабораторное дело, 1982, 2, 79.

„.Я0„„1201720 A (д) 4 G 01 N 1/28; А 61 В 10/00 (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЛАСТНЬР

КЛЕТОК В СМЕШАННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЯХ НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ путем их окрашивания и анализа состояния ядрышек в клетках, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, в популяции определяют количество клеток с усиленно аргентофнльными ядрышками и их соотношение с общим числом клеток, при этом препарат перед окрашиванием обрабатывают в 2н,растворе муравьиной кислоты в течение 10-20 мин, а в качестве красителя используют

50 7.-ный раствор азотно-кислого серебра.

1 1

Изобретение относится к гематологии и онкологии и может быть использовано для быстрого обнаружения в смешанных клеточных популяциях незрелых лейкозных и опухолевых клеток, / для одновременной оценки их функцио-нальной активности, в том числе на фоне цитостатической терапии, а также в. экспериментальной гематологии, онкологии и цитологии при изучении разных аспектов роста, дифференцировки и созревания лейкозных и опу" холевых элементов.

Целью изобретения является повышейие точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Препараты клеток крови, костного мозга и лимфатических узлов готовят стандартным способом во время взятия крови, стериальной пункции или пункции лимфатического узла.

В то же время для получения клеток из плевральной и асцитической жидкости последние предварительно центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 — 15 мин. Затем надосадок удаляют, а из осадка делают,мазки. Все препараты высушивают на воздухе, а затем в течение 15 мин фиксируют в смеси метиловый спирт— уксусная кислота, приготовленной в соотношении 3:1. После повторного высушивания на воздухе их, в зависимости от толщины мазка, помещают на

10-20 мин в 2 н. раствор муравьиной кислоты. По окончании инкубации стекла ополаскивают дистиллированной водой и после высушивания окрашивают

50%-ным раствором азотно-кислого серебра согласно стандартной методике.

После скрашивания серебром препараты тщательно ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и в течение 10 — 20 с подкрашивают 1Х-ным раствором Гимзы, приготовленным на фосфатном буфере с рН 6,8.

В приготовленных препаратах в анализируемых клетках под иммерсионным объективом оценивают количество, величину и форму яцрышек, а также содержание в последних аргентофильнык гранул, принимая во внимание, что одним из важнейших признаков незрелости клеток является наличие в них гипертрофированных ядрышек с активным синтезом рибосомной

201 720 2 PHK () 10-15 гранул на ядрышко) и/или увеличение общего количества

- ядрышек в клетке. Окончательную идентификацию клеток осуществляют

5 с учетом величины и формы ядра, соотношения ядра и цитоплазмы, а также характера окрашивания хроматина.

Пример . Больной П.Н., 48 лет, поступил в клинику 22 янва10 ря 1982 года, Направлен с диагнозом цирроза печени с явлениями гиперспленизма. Поводом для госпитализации послужила нарастающая слабость, связанная с анемизацией. Из анамне15 за было известно, что ранее больной страдал болезнью Крона и оперирован по поводу ректального свища. В

1979 году перенес гепатит. Изменения в крови выявлены в конце декабря, 20 когда содержание эритроцитов равнялось 2,4 х 10 /л, гемоглобина . г

85 г/л, тромбоцитов 4 х 10 /л, î ретикулоцитов 0,2%, лейкоцитов

3,4 х 10 /л, базофилов i% метамиелоцитов 2%, п/я нейтрофилов 6%, с/я нейтрофилов 6%, лимфоцитов 81% и моноцитов 4%. В миелограмме от

16.ХП-82 г. содержание бластных элементов. не увеличено (3%), промиело30 цитов 1,4%, миелоцитов 19%, метамиелоцитов 5,8Х, п/я нейтрофилов 29,2%, с/я нейтрофилов 23%, базофилов 1,6Х, лимфоцитов 10,4%, моноцитов 3,2%, эритроидных элементов 3%, митозов

0,4%, Мегакариоциты не встретились.

При осмотре в клинике состояние относительно удовлетворительное, бледность кожных покровов и слизис,тых. Явлений геморрагического диатеза, увеличения лимфоузлов, печени и селезенки не обнаружено.В анализах крови и костного мозга помимо стойкой анемии, тромбоцитопении и гранулоцитопении повторно регистриро45 валось увеличение бластных элементов до 9 — 20%, что поставило лечащих врачей перед необходимостью проведения дифференциального диагноза между гипопластической анемией с

50 избытком бластов и острым лейкозом.

Избирательное окрашивание клеток крови с помощью азотно-кислого серебра показало, что в этом наблюдении содержание бластных элементов достигало 32%, что позволило остановиться на диагнозе малопроцентной формы острого лейкоза и ограничиться в клинике назначением симптоматичес1201720 4 тов 5,3 х 10 /л, бластов 49, промиелоцитов 2Х, миелоцитов 1Х, метамиелоцитов 1Х, п/я нейтрофилов 7Х, с/я нейтрофилов 11Х, лимфоцитов 22Х, моноцитов 7Х. Наблюдение sa больным продолжается. кой терапии и гемотрасфузиями. Больной находится под наблюдением гематологического диспансера. В последнем анализе крови эритроцитов

1,9 х 10 /л, гемоглобина 60 г/л, . тромбоцитов 15 х 10 /л, лейкоииСоставитель М. Позняк . Техред М.Пароцай Корректор М. Максимишинец

Редактор Л. Повхан

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Заказ 7997/44 Тираж 896 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5