Способ получения диабетогенного фактора

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4 А 61 К 35 14 (21) 3747660/28-14 (22) 31.05.84 (46) 23.02.86. Бюл. № 7 (71) МГУ им. М. В. Ломоносова (72) Б. А. Кудряшов, Л. А. Ляпина и А. М. Ульянов (53) 615.361.018.51 (088.8) (56) Кудряшов Б. А. и др. Вопросы медицинской химии. 1973, 19, 3, с. 269 — 274. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАБЕТОГЕННОГО ФАКТОРА путем обработки

„„SU„„1212430 крови антикоагулянтом (цитратом или оксалатом натрия) с последующей очисткой, отличающийся тем, что, с целью повышения активности, кровь обрабатывают насыщенным охлажденным раствором серно-кислого аммония, к супернатанту добавляют порошок серно-кислого аммония до насыщения, осадок растворяют в физиологическом растворе, проводят диализ, диализат подвергают ультрацентрифугированию в градиенте плотности сахарозы.

1212430

Составитель Е. Колчина

Техред И. Верес Корректор Т. Колб

Тираж 659 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор В. Иванова

Заказ 664/5

Изобретение относится к способам получения биологически активного фактора и может найти применение при изучении этиологии и патогенеза сахарного диабета, в экспериментальной фармакологии, биохимии физиологии и патофизиологии.

Целью изобретения является повышение активности.

Пример 3.- Берухм10 Йл плазмы крови от крыс с,развившимся ал 1оксановым диабетом, добавляют равныфебьем (10 мл) насыщенного охлажденцогофас вора сернокислого 4щония, выдерживакф 15 — 30 ° мин на хоАо3у, центрифугирфют в 1ечение 15 мин при 1800 об/мин. Осадок," содержащий глобулины, отбрась1вают, а к центрифугату добавляют тонко измельченный порошок серно-кислого аммония до полного насыщения.

Через 15 — 30 мин стояния проб на холоду их центрифугируют в течение 10 — 15 мин при 1800 об/мин. Осадок, альбумины, растворяют в 3,3 мл физиологического раствора NaC1 и ставят на диализ против физиологического раствора NaCl на 16 — 18 ч для освобождения от ионов аммония. Диализат подвергают ультрацентрифугированию в градиенте плотности сахарозы в течение

1,5 — 2 ч при 105 — 107 тыс. g на ультрацентрифуге при +2,5 — 3 С с использованием

4Я сахарозы.

Фракции, выделенные над 4Я сахарозой, подвергают электрофоре", пческому анализу на чистоту препаратов и на диабетогенность. Фракция над 4Я сахарозой при SDSэлектрофорезе в геле полиакриламида была гомогенна (содержала одну полосу) с молекулярной массой 60 тыс. При проверке фракции на диабетогенность установлено повышение уровня сахара крови уже через

7 дней после начала опыта на 40 — 50 мгЯ.

Это повышение сохранялось до 30 дней опыта.

Пример 2. Берут 10 мл плазмы крови от больных сахарным диабетом людей и

10 мл контрольной донорской, плазмы от здоровых людей. Дальнейшие операции проводят согласно примеру 1.

Получают фракции над 5Я сахарозой, 10 их проверяют на чистоту, определяют молекулярную массу с помощью SDS-электрофореза в геле полиакриламида. Установлена гомогенность фактора над 5Я сахарозой от больных людей. Этот фактор имел молекулярную массу 60 тыс. дальтон. В контрольной фракции над 5о сахарозой от здоровых людей установлено 3 полосы — с молекулярными массами 15 тыс, 40 тыс и 68 тыс.

Выделенные фракции над 5g сахарозой подвергают анализу на диабетогенность, для чего крысам-самцам ежедневно через каждые 24 ч вводят внутривенно по 1 мл фракции на 200 г массы тела в течение трех дней. Через 7, 14 и 30 дней после введения у крыс в крови определяют уровень сахара. Фракция больного человека над

5Я сахарозой вызывает стойкое повышение уровня сахара крови — от 109 мгЯ (фон) до 142 мгЯ (через 7 дней), 180 мгЯ (через 14 дней), 172 мго (через 30 дней).

В то же время фракция над 5Я сахарозой контрольной плазмы крови от здоровых людей никакого изменения в уровне сахара не вызывает — 111 мгЯ (фон), 106 мгЯ (через 7 дней), 108 мгЯ (через 14 дней), 102 мгЯ (через 30 дней).