Способ определения количества биологически полноценных спермиев в замороженной дозе спермы

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

Ъ (д) 4 А 61 D 7/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3578100/30-15 (22) 08.04.83 (46) 23.05,86. Бюл. № 19 (71) Белорусский научно-исследовательский институт животноводства (72) М. Г. Ковалев, Т. В. Цеханович и Т. М. Дробышевская (53) 591.463.15 (088.8) (56) Методические рекомендации по селекции и воспроизводству крупного рогатого скота. — Киев, 1980, разд. 32, с. 185 †1. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА БИОЛОГИЧЕСКИ ПОЛНОЦЕННЫХ СПЕРМИЕВ В ЗАМОРОЖЕННОЙ

ДОЗЕ СПЕРМЫ, предусматривающий оттаивание дозы спермы в присутствии лимоннокислого натрия, оценку активности спермиев в баллах с последующим расчетом ко„„ЯЦ„„1232247 А1 личества биологически полноценных спермиев, отличающийся тем, что, с целью повыщения точности определения, дополнительно оттаивают дозу замороженной спермы в нативном состоянии, определение концентрации спермиев осуществляют в оттаянной дополнительной дозе, а расчет биологически полноценных спермиев осуществляют по формуле

П = с 100А, 5 где П вЂ” количество активных спермиев в дозе, млн;

С вЂ” концентрация спермиев в 1 мл нативной спермы, млрд/мл;

А — активность спермиев в дозе спермы, оттаянной в присутствии лимоннокислого натрия, баллы.

1232247 где П—

100

Таблица 1

Количест- Отношево образ- ние к цов спер-.общему мы+ !количест-! ву образ цов, 7.

gogo пп

3,6+0,15

3, 7+О, 19

3,3+0,17

7,1 — 9,6

9, 7-12,2

12, 3-1 4,6

36,7

12,3

30,6

3 15

Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, а именно к способам оценки качества замороженной спермы.

Цель изобретения — повышение точности определения.

Способ осуществляется следующим образом.

Подготавливают водяную баню с температурой воды 40 — 42 С. В чистый стерильный пенициллиновый флакон наливают 1 мл

2,8 — 3,0%-ного раствора лимоннокислого натрия. Флакон с раствором помещают в водяную баню на 2 — 3 мин с таким расчетом, чтобы раствор во флаконе нагрелся до 40 — 42 С. Во флакон переносят. гранулу замороженной спермы объемом 0,2 мл, оттаивают ее по общепринятому способу.

Оценивают активность (А) спермиев под микроскопом, выявляя процент активных спермиев. Берут вторую гранулу этой же партии спермы и оттаивают при комнатной температуре в пенициллиновом флаконе без лимоннокислого натрия. В грануле спермы, оттаянной без лимоннокислого натрия, определяют концентрацию (С) спермиев. Количество активных спермиев с прямолинейнопоступательным движением в дозе (грануле) для осеменения коров определяют по формуле

П= 100А, количество активных спермиев в дозе (грануле) для осеменения коровы, млн; концентрация спермиев в 1 мл разбавленной спермы, млрд/мл; активность спермиев в грануле оттаянной спермы, баллы; постоянное число > поскольку из

1 мл разбавленной спермы приготавливают 5 гранул замороженной спермы объемом по 0,02 мл (1:0,2= 5); постоянное число, необходимое для выражения значения П в миллионах.

Предлагаемым способом проводили определение количества биологически активных спермиев в замороженной дозе спермы для осеменения коров в отделе воспроизводства с/х животных.

Полученные экспериментальные данные п редст а вле н ы в та бл. 1.

Как видно из табл. 1, из 49 образцов исследованных доз спермы, предназначенной к использованию для осеменения коров и те10 лок в производственных условиях, установлены значительные отклонения по количеству активных спермиев в дозе. Судя по результатам оценки спермы известным способом (активность) определения пригодности спермы, все исследованные образцы можно применять для осеменения самок. Однако по количеству активных спермиев в грануле только 63,3% образцов спермы отвечают требованиям, предъявляемым действующей инструкцией.

В табл. 2 представлены сравнительные данные по определению количества биологически полноценных спермиев в замороженной дозе спермы предлагаемым и известным способами (в миллионах).

Как видно из табл. 2, известный спо25 соб в среднем показал количество активных спермиев в дозе замороженной спермы

14,79 млн, предлагаемый — 21,20 млн.

Таким образом, известный способ занижает количество активных спермиев в дозе в среднем на 30,3%, т.е. он является недостоверным. Причиной этому является тот факт, что в известном способе не учитывается степень разбавления спермы при ее оттаивании в 2,9%-ном растворе лимоннокислого натрия.

При этом в среднем на один анализ (табл. 2) известным способом уходит

7,16 мин, предлагаемым — 1,31 мин, т.е. в

5,5 раза затрачивается меньше времени. Кро40 ме того, при подсчете известный способ насчитывает 8 математических операций, предлагаемый — 4.

Количество Средняя! активных !активность

I спермиев спермиев, в дозе, баллы млн

1232247

Продолжение табл. 1

ОтношеСредняя активность

Количество активных опт- Количестпп во образние к общему количеству образцов, 7 спермиев в дозе, млн цов спермы спермиев, баллы

14,9-17,4

17,5-20,0

3,4+О, 18

3, 1+О, 17

14,3

6,1

Таблица 2

Предлагаемый способ

Известный способ

ОбраКоличество математиВремя на

Количество математиВремя на одно определение, мин

Количество активных спермиев в

Количество активных спермиев в зец одно оп ределение, мин ческих операций для одного подсчета ческих операций для одного подсчета дозе, млн озе, млн

1,70

15,00

7,00

1,05

4,80

4,31

1,40

7,00

1,50

9,12

1,23

8,51

1,05

7,11

1,30

7,07

В среднем 14,79.

1,31

21,20

7,16

1 7,60

2 2,05

3 7,60

4 30,80

5 26,0

6 20,49

7 9,02

4ь

Всего использовано 49 образцов спермы.

15,20

34,40

29,00

30,00

20,00

Составитель Т. Полянская

Редактор Е. Папп Техред И. Верес Корректор T. Колб

Заказ 2492/5 Тираж 660 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и оз крытий

113035, Москва, )K — 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент>, г. Ужгород, ул. Проектная, 4