Способ фиксации ткани миокарда

 

Изобретение относится к области медицины, а именно, к кардиологии , и может быть использовано для изучения ультраструктуры миокарда.и биохимических исследований. Цель изобретения - предотвращение артериального катаболизма макроэргических фосфатов в ткани миокарда. После введения животного в наркоз быстро вскрывают грудную клетку, в полость левого желудочка в области верхушки сердцаживотного через иглу с диаметром канала 1-3 мм, одетую на шприц, вводят охлажденный до (-2)0°С фиксирующий раствор в объеме 70-75% полного объема полости левого желудочка сердца в каждую секунду в течение 5-7 с до полной остановки сердца. Для морфологического исследования ультраструктуры кардиомиоцитов мелкие кусочки ткани дофиксируют в 1%-ном забуференном растворе с глютаральдегида, обезвоживают и заключают по общепринятой методике с АЛ последующим стереологическим анализом электроннограмм. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4 G 01 N 1/28 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР по делАм изОБРетений и ОткРытий (21) 3672764/28-14 (22) 12. 12. 83 (46) 15. 10..86. Бюл. ¹ 38 (71) Киевский научно-исследовательский институт кардиологии им. Н.Д. Стражеско (72) А.С. Гавриш, Г.С. Воронков .и Ю.В. Лукшин (53) 615.475 (088 ° 8) (56) Herzinsuffuzienz Pathologic

und Klinik Stuttgart, 1968, р. 19-40. (54) СПОСОБ ФИКСАЦИИ ТКАНИ ИИОКАРДА (57) Изобретение относится к облас-. ти медицины, а именно, к кардиологии, и может быть использовано для изучения ультраструктуры миокарда,и биохимических исследований. Цель изобретения — предотвращение артериального катаболизма макроэргических

„„SU,„, 126 037 А 1 фосфатов в ткани миокарда. После введения животного в наркоз быстро вскрывают грудную клетку, в полость левого желудочка в области верхушки сердца животного через иглу с диаметром канала 1-3 мм, одетую на шприц, вводят охлажденный до (-2)0 С фиксирующий раствор в объеме

70-75Х полного объема полости левого желудочка сердца в каждую секунду в течение 5-7 с до полной остановки сердца. Пля морфологического исследования ультраструктуры кардиомиоцитов мелкие кусочки ткани дофиксируют в 1Х-ном забуференном растворе глютаральдегида, обезвоживают и заключают по общепринятой методике с последукнцим стереологическим анализом электроннограмм. 2 табл.

1 264037

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и может быть использовано для изучения ультраструктуры миокарда и при проведении биохимических исследований.

Цель изобретения — предотвращение артефициального катаболизма макроэргических фосфатов в ткани миокарда путем перфузирования фиксирующего охлажденного раствора в полость левого желудочка в области верхушки сердца до полной его остановки.

Способ осуществляют следующим образом, После введения животного в наркоз быстро вскрывают грудную клетку. В полость левого желудочка в области верхушки сердца животного через иглу с диаметром канала 1-3 мм, одетую на шприц, вводят охлажденный до (-2)-О С, фиксирующий раствор в объеме 70-75Х полного объема полости

lлевого желудочка сердца в каждую се, кунду в течение 5-7 с до полной остановки сердца, Пример. Кролика весом 2,5 кг вводят в наркоз, быстро вскрывают грудную клетку по передней поверхности. Извлекают из холодильника шприц, содержащий 20 мл охлажденного до (-2)-О С 4Х-ного раствора пара— формальдегида на 0,1-0,2 M фосфатном буфере, содержащем 1-1,5Х сахарозы (рН 7,2-7,4), одевают на него иглу с диаметром канала 1,5 мм и вводят ее в полость левого желудочка в области верхушки сердца. Через эту иглу раствор охлажденного параформальдегида подается в полость левого желудочка в количестве 70-75Х его полного объема в секунду. Продолжительность такой перфузии сердца 5 с. Через 5 с сердце остановилось и перфузирование прекращают. Затем сердце извлекают из грудной клетки, ножницами расчленяют его на две части и выполняют комплекс манипуляций, требующихся для проведения соответствующих морфологических и биохимических исследований, пользуясь соответствующими методиками.

Для морфологического исследования ультраструктуры кардиомиоцитов мелкие кусочки ткани (2-1 мм ) дофиксируют в 1Х-ном забуференном растворе глютаральдегида, обезвоживают и sa- . ключают в эпон или аралдит по общепринятой методике с последующим сте1О

Использование способа предотвра50 щает артефициальный катаболизм и

55!

45 реологическиМ анализом электроннограмм, полученных при фотографировании ультратонких срезов в электронном микроскопе.

Для определения креатин-фосфата вторую часть сердца весом 300 мг замораживают в жидком азоте, затем растирают в металлической ступке в порошок и добавляют 1 мл 6Х-ной НС10 и 2 мл 5 мМ трис-НС1 буфера. Титруют 5 н. Н СО до нейтрального рН. с

Затем центрифугируют в течение

10-15 с чри 3-4 тыс. об/мин. Из супернатанта отбирают 0,1 мл, доводят бидистиллированной водой до 3 мл, добавляют 0,5 мл 0,05Х-ного диацетила и 1 мл раствора -нафтола. Через 30 мин смотрят на спектрофотометре при длине волны 525 нм свободный креатин.

Для определения общего креатина к 0,1 мл супернатанта добавляют 1мл

0,1 н. НС1 и помещают на 10 с в водяную баню при 70 С. Затем пробы охлаждают, добавляют 1 мл 0,1 н. Na0H, доводят объем до 3 мл водой, добавляют 0,5 мл диацетила и 1 мл А;нафтола. Получают общий креатин. Затем определяют креатин-фосфат по формуле: общий креатин — свободный креатинкреатин-фосфат.

Содержание креатин-фосфата в тка- . ни миокарда, фиксированной предлагаемым способом, определяют у кроликов . контрольной и опытной групп (внутривенно вводят вазопрессин в дозе

0,2 ед/кг для воспроизведения острой коронарной недостаточности, при которой резко снижается содержание креатин-фосфата).

Для сравнения в аналогичных гру пах определяют содержание креатннфосфата в ткани миокарда, фиксированной известным способом. В каждую из

4 групп входило о кроликов, идентичных по полу, возрасту и существенно не отличающихся по весу (2,5-3 кг) (табл. 1 и 2). возникновение дефектов, ограничивающих морфометрический анализ ультра структуры кардиомицитов, что позволяет проводить на одном органе качественные морфометрические и биохимические исследования с получением стабильных воспроизводимых результатов, более близких к истинным. значениям

1264 концентрации изучаемого соединения в ткани миокарда. ю

Таблица 1

Содержание креатин-фосфата в миокарде, ммоль/г, при фиксации ткани миокарда способом известным предлагаемым

Контрольные животные Опытные животные Контрольные животные Опытные животные

2,25

3,60

4,05

1,07

0,80

1,45

3,00

2,25

0,54

1,80

5,51

3,01

2,70

4,73

2,70

5,85

0,02

1,08

2,25

0,54

2,25

5,85

1,08

Таблица 2

Группа животных

Содержание креатин-фосфата в миокарде, ммоль/г, при фиксации ткани миокарда по способу предлагаемому известному

Контрольные кролики M+ ш

4,764.0,52

2,27+0,29 (0,01

Опытные кролики

0,66 0,11

2,25 0,07

<0,01

ВНИИПИ Заказ 5552/42 Ти аж 778 Подписное

Произв,-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формула изобретения5

Способ фиксации ткани миокарда путем перфузии в сердце охлажденного фиксирующего раствора 4Х-ного пара- 10 формальдегида в О, 1-0,2 М фосфатном

037 буфере, содержащем 17 сахаровы, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью предотвращения артефициального катаболизма макроэргических фосфатов в ткани миокарда, раствор охлажденного фиксатора вводят 5-7 с в полость левого желудочка в области вер-, хушки сердца до полной остановки сердца, при этом в каждую секунду вводят раствор в объеме 70-75Х полного объема левого желудочка сердца.