Способ получения лейкопитарного бета @ -гликопротеида

 

Изобретение относится к медицинской биохимии, может быть применено при получении биологически активного белкового продукта - лейкоцитарного бета -гликопротеида для получения моноспецифических антисывороток, определения этого белка, а также для тестирования его биологической активности . Цель изобретения - увеличение чистоты целевого продукта путем фрак (56) № 7, ционирования женского молока. Для этого женское молоко смешивают с двуокисью алюминия, инкубируют 20 мин, трижды отмывают двуокись алюминия дистиллированной водой, всякий раз отделяя сорбент центрифугированием. К отмытой двуокиси алюминия добавляют 50-60%-ньй насьщенный раствор серно-кислого аммония, оставляя на сутки при 4°С, центрифугируют, надосадок, удаляют, а осадок диализуют против дистиллированной воды при 4°С. Затем фракцию смешивают с влажным SP-ce- фадексом G-50, инкубируют, центрифугируют , надосадок удаляют, а сефадекс с сорбированными белками трижды отмывают в литре дистиллированной воды , всякий раз удаляя воду центрифугированием . Далее к отмытому сефадексу добавляют 8-12%-ный раствор NaCl, инкубируют, осадок отделяют центрифугированием . Надосадочную жидкость диализуют против дистиллированной воды и лиофилизуют. Таким образом получают препарат лейкоцитарного бета , -гликопротеида. 1 табл. (Л to 00 о СП 4 о

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (59 4 С 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

lpga 1 б, и

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3818694/28-14 (22) 30.11.84 (46) 30.12.86. Бюл. Ф 48 (71) 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н.И.Пирогова и Научно-исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов (72) Д.Д.Петрунин, О.П.Шевченко, Ю.А.Петрунина, A.À.Äìèòðèåâ и С.К.Туменова (53) 615.34 (088.8) (56) Бюлл. экспер. биологии, 1983, N - 7, с. 81 84. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТАРНОГО

БЕТА -ГЛИКОПРОТЕИДА

f (57) Изобретение относится к медицинской биохимии, может быть применено при получении биологически активного белкового продукта — лейкоцитарного бета -гликопротеида для получения

1 моноспецифических антисывороток, определения этого белка, а также для тестирования его биологической активности. Цель изобретения — увеличение чистоты целевого продукта путем фрак„Я0„„128О546 A1 ционирования женского молока. Для этого женское молоко смешивают с двуокисью алюминия, инкубируют 20 мин, трижды отмывают двуокись алюминия дистиллированной водой; всякий раз отделяя сорбент центрифугированием.

К отмытой двуокиси алюминия добавляют 50-607-ный насыценный раствор серно-кислого аммония, оставляя на сутки при 4 С, центрифугируют, надосадок удаляют, а осадок диализуют против дистиллированной воды при 4 С. Затем фракцию смешивают с влажным SP-сефадексом G-50, инкубируют, центрифугируют, надосадок удаляют, а сефадекс с сорбированными белками трижды отмываюг в литре дистиллированной во- ды, всякий раэ удаляя воду центрифу- VJ гированием. Далее к отмытому сефадексу добавляют 8-12Х-ный раствор NaC1, инкубируют, осадок отделяют центрифугированием. Надосадочную жидкость диализуют против дистиллированной воды и лиофилизуют. Таким образом р получают препарат лейкоцитарного бета,-гликопротеида. 1 табл.

1280546 .

Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к препаративности технологической биохимии,.и касается получения биологически активного белкового продукта — лейкоци- 5 тарного бета -гликопротеида, необходимого для получения моноспецифических антисывороток, и определения этого белка, а также для тестирования его биологической активности.

Целью изобретения является увеличение чистоты целевого продукта.

Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. 500 мл женского мо15 лока смешивают с 500 мл влажной двуокиси алюминия, инкубируют 20 мин на магнитной мешалке, после чего трижды ,отмывают двуокись алюминия 1 л дис" тиллированной воды, постоянно отделяя сорбент при помощи центрифугирования.

К отмытой двуокиси алюминия добавляют

400 мл (50% насыщения) насьпценного раствора сернокислого аммония, остав-25 ляют на 24 ч при 4 С, центрифугируют при 8000 и в течение 30 мин, надосадок удаляют, а осадок растворяют в

40 мл дистиллированной воды и диалиэуют против дистиллированной воды при 4 С.

Полученную после диализа фракцию смешивают с 20 мл влажного SP-сефадекса С-50 (приготовленного путем предварительного замачивания дистиллированной водой), инкубируют в тече- З5 ние 20 мин при постоянном помешива- нии, центрифугируют, надосадок удаля" ют, а сефадекс с сорбированными бел» ками трижды отмывают 1 л дистиллированной воды, удаляя воду при помощи центрифугирования. К отмытому сефадексу добавляют 20 мл 8Х-ного раствора хлористого натрия, инкубируют при перемешивании 20 мин, осадок отделяют центрифугированием, а надоса- 45 дочную жидкость диализуют против дистиллированной воды и лиофилиэируют..

Таким образом получают препарат лейкоцитарного бета,-гликопротеида с чистотой выхода 80%, выход белка составляет 30%.

Пример 2.- 500 мл женского молока смешивают с 500 мл влажной двуокиси алюминия, дальнейшую обработку проводят как описано в примере 1. К отмытой двуокиси алюминия добавляют

400 мл насьпценного раствора гидрофосфата натрия, в дальнейшем проводят обработку, как в примере 1, к полученному надосадку добавляют 480 мл (60%) насьпценного раствора сернокислого аммония, обработка в дальнейшем проводится как в примере 1. Элюацию сефадекса проводят 12Х-ным раствором хлористого натрия с дальнейшей обработкой, как в примере 1. Таким образом, получают препарат лейкоцитарного бета„-гликопротеида с чистотой выхода препарата 75%, выходом белка 35%.

Применение адсорбционной хроматографии с двуокисью алюминия в качестве сорбента приводит к меньшему количеству примесей и большей чистоте препарата по сравнению с аналогом (15-20Х и 80% соответственно).

Выбранные параметры представлены таблицей.

Таким образом, приведенная таблица свидетельствует, что выбранные параметры являются оптимальными, повышают чистоту и выход препарата по сравнению с прототипом.

Формула изобретения

Способ получения лейкоцитарного бета, -гликопротеида путем фракционирования женского молока, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью увеличения чистоты целевого продукта, фракционирование осуществляют путем адсорбционной хроматографии на двуокиси алюминия, элюции насьпценным раствором двузамещенного гидрофосфата натрия, центрифугирования, осаждения надосадка сернокислым аммонием при 50-60Х насыщения с последукпцей ионообменной хроматографией раствореннога осадка на катионитном сильно основном сефадексе зернистости и элюцией 8-12Х-ным растворомповаренной соли.

1280546

Сернокислый аммоний, Х

Хлорис тый натрий, X

Выход Чистота Х

8-12

15 75

35 80

55 60

20 70

35 80

40 55

50-60

8-12

8-12

50-60

50-60

50-60

8-12

Составитель П.Бонарцев

Техред B.Kàäàð Корректор Е.Рошко

Редактор А.Долинич.Заказ 7062/50 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4