Сорбент для связывания тироксина

 

Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения - создание нового сорбента, специфически связывающего тироксин. В качестве исходного сырья используют сыворотку ретроплацентарной крови человека. Растворяют 1 мг тироксинсвязывающего белка в 10 мл раствора NaHCO₃ и охлаждают до 4 - 6С. На пористом стеклянном фильтре промывают двумя порциями охлажденной соляной кислоты 10 мл геля активированной матрицы. Матрицу переносят в раствор белка и перемешивают в течение 2 ч. Полученный сорбент промывают раствором NaHCO₃. Непрореагировавшие активные группы блокируют перемешиванием сорбента с трис-HCl буфером.

Изобретение относится к области медицины, в частности клинической биохимии. Цель изобретения - создание нового сорбента, специфически связывающего тироксин, на основе тироксинсвязывающего белка человека. Поставленная цель достигается синтезом сорбента, представляющего собойтироксинсвязывающий белок, присоединенный через остаток аминокислоты и остаток эпихлоргидрина к полисахаридному носителю. В качестве исходного сырья используется недорогая и доступная сыворотка ретроплацентарной крови человека. Биоспецифический сорбент имеет следующую общую формулу: П-O-CH₂--CH₂-NH-(CH₂)_n--NH-белок где П - остаток агарозы, целлюлозы или сефадекса, n = 2 или 3. Биоспецифический сорбент получают по схеме: П-OH П-O-CH₂-CH П-O-CH₂--CH₂-NH-(CH₂)_n--OH П-O-CH₂--CH₂-NH-(CH₂)_n--O-N Полученный по этой схеме аффинный сорбент содержит от 0,01 до 1 мг белка в 1 мл сорбента в зависимости от количества белка, взятого в реакцию, имеет емкость связывания тироксина до 90% от емкости нативного (неиммобилизованного) белка и характеризуется высокой устойчивостью при хранении. В проводимых ниже примерах аффинный сорбент характеризуется весовым количеством иммобилизованного белка и величиной максимального связывания В_макс, характеризующей емкость сорбента по отношению к тироксину. П р и м е р 1. Растворяют 1 мг тироксинсвязывающего белка в 10 мл 0,1 М раствора NaHCO₃ и охлаждают до 4 - 6^оС. На пористом стеклянном фильтре промывают двумя порциями охлажденной до 4 - 6^оС 0,001 М соляной кислоты (по 30 мл) 10 мл геля активированной матрицы, приготовленной на основе сефарозы 4В с применением γ -амино- масляной кислоты (содержание активных групп: 7,2 мкмоль в 1 мл сорбента). Матрицу переносят в раствор белка и перемешивают в течение 2 ч при 4-6^оС. Полученный сорбент промывают 50 мл 0,1 М раствора NaHCO₃. Непрореагировавшие активные группы блокируют перемешиванием сорбента при комнатной температуре с 0,1 М трис-HCl буфером рН 8,0 в течение 1 ч. Определено: 1 мл сорбента содержит 0,078 мг тироксинсвязывающего белка. В_макс = 14,0 мкг тироксина на 1 мг иммобилизованного белка, что составляет 90% В_макс нативного белка в растворе. П р и м е р 2. Иммобилизацию белка проводят, как описано в примере 1, но в качестве активированной матрицы используют сорбент, приготовленный на основе целлюлозы (содержание активных групп: 3,1 мкмоль в 1 мл сорбента). Определено: 1 мл сорбента содержит 0,040 мг белка. В_макс = 12,4 мкг тироксина на 1 мг иммобилизованного белка, что составляет 80% от В_макс нативного белка в растворе. П р и м е р 3. Иммобилизацию белка проводят, как описано в примере 1, но в качестве активной матрицы используют сорбент, приготовленный на основе сефадекса G-200 и β -аланина (содержание активных групп: 2,8 мкмоль в 1 мл сорбента). Определено: 1 мл сорбента содержит 0,065 мг белка, В_макс = 13,2 мкг тироксина на 1 мг иммобилизованного белка, что составляет 86% от В_макс нативного белка. (56) Рекламный проспект медицинских радиодиагностических наборов типа "Immophase" фирмы "Corning Medical" США. Издатель: Corning Glass Works, Medfield, Mass. 02052, USA.

Формула изобретения

Сорбент формулы П-O-CH₂--CH₂-NH-(CH₂)_n--NH-Б
где П - остаток агарозы, целлюлозы или сефадекса;
Б - тироксинсвязывающий белок;
n = 2 или 3,
для связывания тироксина.