Способ обнаружения эндотоксина грамотрицательных бактерий

 

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике эндотоксемий, оценке токсичности вакцинных и ,сывороточных препаратов, а такжеинъекционных лекарственных форм. Цель изобретения - повышение чувствительности способа. Мьшам внутрибрюшинно вводят раствор трипанового синего. Через 24 ч тем же животным внутрибрюшинно вводят раствор актиномицина Д. Контрольным живбтным вводят актиномицин Д и пирогенал. В опытной группе гибель животных отмечается в период 6-24 ч после введения пирогенала, в контрольной группе срок наблюдения составляет 72 ч. 1 табл. (Л

СОЮЗ СО8ЕТСНИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ

РЕа1УбЛИН

„.80„„1284997 А1 (51) 4 С 12 И 1/00 С 12 1/02

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОбРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ЭНДОТОКСИНА

ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫК БАКТЕРИЙ (57) Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике эндотоксемий, оценке токсичности вакцинных и тсывороточных препаратов, а также-иньекционных лекарственных форм. Цель изобретения — повышение чувствительности способа. Мышам внутрибрюшинно вводят раствор трипанового синего. Через 24 ч тем же животным внутрибрюшинно вводят раствор актиномицина Д. Контрольным животным вводят актиномицин Д и пирогенал.

В опытной группе гибель животных отмечается в период 6-24 ч после введения пирогенала, в контрольной групле срок каблвдеки» составляет 72 ч. в » табл. (21) 3793860/28-14 (22) 25.09.84 (46) 23.01.87. Бюл. ¹ 3 (71) Центральный научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (72) А.Л.Табачник, А.Н.Мац, А.IO.Маятников, А.Ф.Иванов и Б.В.Киркин (53) 576.8.093.1(088.8) (56) Mong К.N., Miller С.Е., Feely J.Ñ., Chan J.Ê. Determination

of endotoxicity in bacterial vaccine. - Appl. Microbiology, 1973,.25, р. 403-407.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1284997

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике эндотоксемий, оценке токсичности вакцинных и сывороточных препаратов, а также 5 инъекционных лекарственных форм, как экспресс-тест на выявление эндотоксемий, Целью изобретения является повьппение чувствительности способа за счет внутрибрюшинного введения мышам красителя трипанового синего за сутки до введения мьппам актиномицина Д.

Пример 1. Готовят асептически инъекционный раствор трипанового синего на коммерческом ампуллированном стерильном и апирогенном физиологическом растворе.

Мышам линии NFR/n обоего пола весом 16-18 г внутрибрюшинно вводят раствор трипанового синего из расчета 2,0 мг красителя на мышь. Через

24 ч тем же животным внутрибрюшинно вводят раствор актиномицина Д из расчета 20 мкг на мышь и разведения пи25 рогенала. Препарат пирогенал является эндотоксином, экстрагированным из грамотрицательных бактерий. Контрольным животным вводят актиномицин Д и пирогенал. В опытной группе гибель животных отмечается в период 6-24 ч после введения пирогенала. E последующие сроки гибели нет. В контрольной группе срок наблюдения составляет

72 ч (известный способ). 35

Гибель мьппей линии NFR/n от внутрибрюшинного введения пирогенала отражена в таблице ° !

Доза пирогенала мкг на

Пример 4. Мышам линии NFR/n обоего пола весом 16-18 r внутрибрюшинно вводят водный раствор трипанового синего из расчета 2,0 мг на мышь. Через 24 ч тем же животным вводят внутрибрюшинно актнномицин Д из расчета 20 мкг на мышь и сразу после этого 1,0 мл сыворотки больного.

В группу для испытания сыворотки одного больного берут по 3 мыши. Позитивным считают образец сыворотки, приводящей к гибели не менее двух мы55 шей за 24 ч.

Течение неспецифического язвенного колита в тяжелой форме сопровождается выраженной эндотоксемией, что может быть подтверждено предлагаемым

10 15

2 15

0,4 15

0,08 15

0,016 15

0,0032 15 тд мкг на мьппь

12

1

2.

15 - 15

15 15

15 l4

15 8

15 5

15 0

1,31 . 0,08

Учет гибели животных для способа звестного предлагаемого

Взято Погиб Взято Погибло в опыт ло в опыт

Из представленных в таблице данных следует, что предлагаемый способ по сравнению с известным по чувствительности примерно в 15-20 раз превышает известный и сокращает срок исследования с 72 до 24 ч.

Пример 2. Мышам линии NFR/n обоего пола весом 16-18 r внутрибрюшинно вводят раствор трипанового синего из расчета 0,5 мг красителя на мышь. Через сутки тем же животным внутрибрюшинно вводят раствор актино-, мицина Д из расчета 20 мкг на мышь и аналогичные примеру 1 разведения пирогенала. В опытной группе гибель животных фиксируют в период 24 ч с момента введения пирогенала, гибель контрольных животних, получивших актиномицин Д и пирогенал, учитывают на протяжении 72 ч.

Пример 3. Мьппам линии NPR/n обоего пола весом 16-18 r внутрибрюшинно вводят раСтвор трипанового синего из расчета 5,0 мг красителя на мьппь. Через 24 ч тем же животным внутрибрюшинно вводят раствор актиномицина Д из расчета 20 мкг на мышь и аналогичные примеру 1 разведения пирогенала. В опытной группе гибель животных фиксируют в период 24 ч с момента введения пирогенала, гибель контрольных животных, получивших актиномицин Д и пирогенал, учитывают на протяжении 72 ч.

Доза красителя 5 0 мг на мышь в сочетании с актнномицином Д повышает чувствительность животных к эндотоксину, однако эта доза трипанового си- него сама вызывает гибель примерно

5Х обработанных животных, т.е. является максимально допустимой.

1284997 способом обнаружения эндотоксина.

Синдром раздраженной толстой кишки эндотоксемией не сопровождается.

Способ обнаружения эндотоксина грамотрицательных бактерий путем введения исследуемого материала мышам, Составитель М.Серова

Редактор Н.Гунько Техред М.Ходаиич Корректор А.Зимокосов

Заказ 7600/27 Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4 предварительно сенсибилизированным актиномицином Д, с последующим учетом времени гибели животных, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью

Ф о р м у л а и э о б р е т е н и я 5 повышения чувствительности способа, мышам внутрибрюшинно вводят трипановый синий в количестве 0,5-5,0 мг на мьпць за сутки до введения актиномицина Д.