Способ идентификации @ @

 

Изобретение относится к области медицинской и ветеринарной микологии, С целью повышения точности определения дрожжеподобных грибов рода Candida из суточных культур дрожжей и дрожжеподобных грибов, выращенных на среде Сабу.ро, готовят взвеси в физиологическом растворе концентрацией 1 млн клеток /мл.К 1мл человеческой сьшоротки, разведенной 1/10 физиологическим раствором, добавляют 0,1 мл приготовленной взвеси гриба, инкубируют 3 ч при 37 ±0,5° С и готовят микроскопические препараты, которые погружают на 1 мин в 0,1%-ный раствор метиленового синего , промьшают водой в течение 45 мин и высушивают. Наносят на мазки специфический конъюгат иммуноглобулина против Candida albicans, меченный фпюорохромизотиоцианатон, в рабочем разведении, выдерживают во влажной камере при 37 С в течение 15 мин и подвергают люминесцентному микроскопированию в сине-фиолетовых лучах. Candida albicans идентифицируют при наличии свечения клетки и его отсутствии у ростковой трубки. (Л со о со 05

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

15 А1 (19) (11) (51) 4 С 12 1/04 срp .,7 (И (Ф

7Э„

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АBTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3614960/28-14 (22) 18,05.83 (46) 15.04.87. Бюл. 1(14 (71) Ленинградский государственный институт усовершенствования врачей им ° С.M.Êèðoâà

- (72) В.Г.Кубась и О.П.Николаева (53) 576.8 (088.8) (56) Дудка И.А. и др. Методы экспериментальной мпкологии. Киев: Наукова думка, 1982, с.399. (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ CAND IDA

ALB I CANS (57) Изобретение относится к области медицинской и ветеринарной микологии.

С целью повышения точности определения дрожжеподобных грибов рода Candida из суточных культур дрожжей и дрожжеподобных грибов, выращенных на среде Сабуро, готовят взвеси в физиологическом растворе концентрацией 1 млн клеток /мл. К 1мл человеческой сыворотки, разведенной 1/10 физиологическим раствором, добавляют

0,1 мл приготовленной взвеси гриба, инкубируют 3 ч при 37 +0,5 С и готовят микроскопические препараты, которые погружают на 1 MHH в

0,1%-ный раствор метиленового синего, промывают водой в течение 45 мин и высушивают. Наносят на мазки специфический конъюгат иммуноглобулина против Candida albicans, меченный флюорохромизотиоцианатом, в рабочем разведении, выдерживают во влажной камере при 37 С в течение 15 мин и о подвергают люминесцентному микроскопированию в сине-фиолетовых лучах.

Candida albicans идентифицируют при наличии свечения клетки и его отсутствии у ростковой трубки.

130361

Составитель E,ßðíûõ

Техред Л.Олейник

Корректор С.Пекмар

Редактор М.Циткина

Заказ 1278/29

Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д,4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул,Проектная, 4

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микологии и может быть использовано в лабораториях, осуществляющих видовое определение дрожжеподобных грибов рода Candida.

Цель изобретения — повышение точности определения.

Способ осуществляется следующим образом.

Иэ суточных культур дрожжей .и дрожжеподобных грибов, выращенных на среде Сабуро, готовят взвеси в физиологическом растворе концентрацией

1 млн клеток/мл. К 1 мл человеческой сыворотки, разведенной 1/10 физиологическим раствором, добавляют 0,1 мл приготовленной взвеси гриба и инкубируют 3 ч при 37+0,5 C> после чего о клетки отделяют центрифугированием в течение 15 мин при 2000g. Осадок клеток затем однократно отмывают дистиллированной водой при том же режиме, Осадок взвешивают в минимальном объеме дистиллированной воды, взвесь

25 наносят на предметные стекла и фиксируют метанолом.

Для гашения аутофпюоресценции препараты погружают на 1 мин в 0,1 -ный раствор метиленового синего, после чего промывают проточной водопровод" ной водой в течение 45 мин. На высушенные мазки наносят специфический конъюгат иммуноглобулина против Candida albicans, меченный флюорохромизотиоцианатом, в рабочем разведении 35 и выдерживают во влажной камере при

37 С в течение 15 мин. Затем мазки промывают в проточной водопроводной водер высушивают и микроскопируют в сине-фиолетовых лучах при помощи люминесцентного микроскопа, 5 2

При иммунолюминесцентном исследовании дрожжевая клетка окрашивается (светится) специфически при отсутствии такого свечения ростковой трубки.

При окраске тем же специфическим конъюгатом иммуноглобулина против

Candida albicans других дрожжеподобных грибов рода Candida выявляется специфическое окрашивание (свечение) как тела клетки, так и образования, морфологически сходного с ростковой трубкой, Аналогичное исследование 24 видов дрожжечодобных грибов и 4 видов истинных дрожжей не выявило специфического окрашивания, Способ позволяет исключить ложноположительные результаты идентификации Candida albicans, а также позволяет определить вид другого гриба, например, Candida trophicalu на стадии чистой культуры, Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я

Способ идентификации Candida аlbicans путем проращивания чистой культуры в сыворотке крови при температуо ре 37+ 0,5 С в течение 3 ч с последующим приготовлением микроскопического препарата и его исследованием, отличающийся тем,что,с целью повышения точности, микроскопический препарат дополнительно окрашивают специфическим конъюгатом иммуноглобулина против Candida albicans, меченного флюорохромизотиоцианатом и идентифицируют СапдЫа а1Ь|cans при наличии свечения клетки и отсутствии свечения ростковой трубки,