Способ получения анорексогенного средства из сыворотки крови,обладающего эндогенным эффектом насыщения для регулирования потребления пищи через центральную нервную систему

 

Изобретение относится к медицине , а именно к препаративной биохимии , предназначено для получения средства, обладающего эндогенным эффектом насыщения для центрального регулирования потребления пищи, из сыворотки крови человека. Цель изобретения - вьщеление из сьшоротки крови человека вещества гликопедтидной природы - сатиетина, обладающего избирательным воздействием на сигнал насыщения и ингибирующим потребление пищи в опытах на крысах, не потребляющих пищи 96 ч. Дпя этого проводят ультрафильтрацию сыворотки человека через мембранный фильтр под давлением 3 атм с размерами пор, пропускающими вещество мол.м. 10000- 50000 дальтон. В результате сыворотка разделяется на 2 фракции: низкомолекулярных и высокомолекулярных веществ. Сатиетин - во фракции низкомолекулярных веществ. Затем проводят лиофилизацию, гель хр9матографию через гель с объемом пор, пропускающим вещество мол.м. 15000-50000 дальтон. далее элюцию ведут 0,1-0,9%-ным водным раствором NaCl, лиофилизируют, хроматографирутот через гель с объемом пор, пропускающим вещество мол.м. 2000-50000 дальтон, снова лиофилизируют . Получают вещество белого цвета , анализ показывает, что оно является гликопептидом. В результате его кислотного гидролиза получают аминокислоты и углеводы. § О) 00 о: сд СП о СП

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

<»SU „„13165

АЗ (ю 4 А 61 К 35/14. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 2829651/28-14 (22) 28.08.79 (31) RI-683 (32) 29.08.78 (33) HU (46) 07.06.87. Бюл, и 21 (71) Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр

РТ (HU) (72) Йожеф Кнолл, Хуба Калас, Берта Кнолл и Янош Надь (НП) (53) 615.361.0.18.51/55(088.8) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНОРЕКСОГЕННОГО СРЕДСТВА ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ, ОБЛАДАЮЩЕГО ЭНДОГЕННЫМ ЭФФЕКТОМ НАСЬПЦЕНИЯ ДЛЯ РЕГУЛИРОВАНИЯ ПОТРЕБЛЕНИЯ

ПИЩИ ЧЕРЕЗ ЦЕНТРАЛЬНУЮ НЕРВНУЮ СИСТЕМУ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к препаративной биохимии, предназначено для получения средства, обладающего эндогенным эффектом насыщения для центрального регулирования потребления пищи, из сыворотки крови человека. Цель изобретения — выделение из сыворотки крови человека вещества гликопептидной природы — сатиетина, обладающего избирательным воздействием на сигнал насыщения и ингибирующим потребление пищи в опытах на крысах, не потребляющих пищи 96 ч. Для этого проводят ультрафильтрацию сыворотки человека через мембранный фильтр под давлением 3 атм с размерами пор, пропускающими вещество мол.м. 1000050000 дальтон. В результате сыворотка разделяется на 2 фракции: "низкомолекулярных" и "высокомолекулярных" веществ. Сатиетин — во фракции низкомолекулярных веществ. Затем проводят лиофилизацию, гель-хроматографию через гель с объемом пор, пропускающим вещество мол.м. 15000-50000 дальтон. далее элюцию ведут О, 1-0,97.-ным водным раствором NaC1, лиофилизируют, хроматографируют через гель с объемом пор, пропускающим вещество мол.м.

2000-50000 дальтон, снова лиофилизируют. Получают вещество белого цвета, анализ показывает, что оно является гликопептидом. В результате его кислотного гидролиза получают аминокислоты и углеводы.

1316550

Изобретение относится к медицине, а именно к препаративной биохимии и касается способа получения средства, обладающего эндогенным эффектом насыщения для центрального регулирования потребления пищи из сыворотки крови человека.

Целью изобретения является выделение из сыворотки крови человека вещества гликопептидной природы—

М сатиетина,„ обладающего избирательным воздействием на сигнал насыщения и ингибирующим потребления пищи в опытах на крысаА, которые не потребляли пищи в течение 96 ч.

Укаэанная цель достигается путем ультрафильтрации сыворотки человека через мембранный фильтр с размерами пор, пропускающими вещество с мол.м. 10000-50000 дальтон, лиофилизации, гель-хроматографии через гель с объемом пор, пропускающими вещества 1500-50000 дальтон, элюации

О 1-0 9 -ным водным раствором хлоэ

25 ристого натрия, лиофилизации, гельхроматографии через гель с объемом пор 2000-50000 и лиофилизации.

Способ осуществляется следующим образом.

Сыворотку крови человека подвергают ультрафильтрации через мембранные фильтры, пропускающие вещества с мол.м. ниже 50000 дальтон, ультрафильтрацию проводят под давлением

3 атм.с постоянным перемешиванием. 35

В результате такой процедуры сыворотка разделяется на две фракции: низкомолекулярных и высокомолекулярных веществ. Сатиетин находится во фракции низкомолекулярных веществ. Несмотря на мол. м. 60000-100000 дальтон фильтрат высушивают и подвергают гель-хроматографии через гель сефадекса или биогеля с объемом пор

1500-50000, активный продукт выходит 45 в свободном обьеме колонки, при элюции раствором хлористого натрия при нейтральных значениях рН, фракции, содержащие активное вещество, собирают и лиофилизируют, а затем очи- 50 щают на колонке с биогелем р 2-р 30, элюируют дистиллированной водой, фракции, обладающие активностью, собирают и лиофилизируют.. Пример 1. 100 л сыворотки подвергают ультрафильтрации через мембрану Amicon ИМ-10, 700 мл ультрафильтрата лиофилизируют и затем растворяют в зоне дистиллированной воды и подвергают гель-хроматографии на колонке с сефадексом С-15 (диаметр колонки 5 см, высота 90 см), элюируют 0,9 .-ным раствором хлористого натрия при нейтральных значениях рН, собирают фракции по 10 мл. Фракции между полимерами 50 и 60 (между 500 и 600 мл элюирующего раствора) были найдены биологически активными. Биологически активные фракции собирают, лиофилизируют и растворяют в 10 мл дистиллированной воды, затем наносят на колонку с биогелем P-30 размер колонки 2,5х90 см и элюируют дистиллированной водой, собирают фракции по 10 мл, фракции между 10 и 15 были биологически активными, их объединяют и лиофилизируют, В зависимости от качества исходной сыворотки получают 200-240 мг сухого продукта, который был снежнобелым, сходным по структуре с хлопком и гомогенным веществом.

Пример 2. 900 мл сыворотки подвергают ультрафильтрации через мембрану ХМ-50 Amicon, 700 мл фильтрата лиофилизируют и растворяют в дистиллированной воде, затем наносят на колонку с сефадексом G-50 (5х90 см), элюируют О, 9 — ным раствором хлористого натрия и собирают фракции по 10 мл.

Биологически активные фракции от 500 до 600 мл объединяют, лиофилизируют, растворяют в 10 мл дистиллированной воды и очищают на колонке с биогелем

P-2 (2,5х90 см) с применением в качестве элюэнта дистиллированной воды, с колонки собирают фракции по 10 мл, биологически активной фракции между номерами 11 и 15 собирают и лиофилизируют. Получают 20-30 мг сухого продукта который был снежно-белым чистым веществом, Пример 3. Проводят процесс аналогично примеру 1, но вместо сефадекс G-15 используют крупнозернистый сефадекс G-25, а элюцию проводят

0,2 -ным водным раствором хлористого натрия.

П р и и е р 4. Проводят процесс аналогично примеру 1, но вместо сефадекса G-45 используют тонкодисперсный сефадекс С-25 и элюируют 0,1 -ным водным раствором хлористого натрия.

Гели с меньшими размерами пор, чем сефадекс G-10 не применяются, а при использовании гелей с большими разме1316550 витамины, в неограниченном количестве. Потребление пищи определяли через 1,5 и 24 ч после предоставления корма. Животные с введением сатиетина снижают потребление пищи примерно от 2 до 8 раз в различные сроки по сравнению с контролем и более высокой активностью по сравнению с амфетамином через 24 ч после воздействия. рами пор, сатиетин нельзя выделить, так как активное вещество проникает в гель и распределяется по всему объему геля.

В результате предложенного способа получено вещество белого цвета, сходное по виду с хлопком, химический анализ показывает, что оно является гликопептидом и после его кислотного гидролиза могут быть полу- 10 чены аминокислоты и углеводы: общее содержание аминокислот в продукте составляет 60,6, редицирующих веществ — 13X углеводов - 10 7Х, содержание воды в продукте составляет 15 10X, фактически в виде связанной воды, При электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия обнаружен компонент с мол.м. около 68000 дальтон, но существует компонент с мол.м. 18000 и два компонента с одинаковой мол.м.

28000, хорошо разделяемые.

Спектр поглощения в ультрафиолетовой области не показывает максиму- 25

ll мов поглощения, но появляется плато" примерно в области 275-280 нм, которое может быть характеристикой пептида белка.

Биологическая активность продукта 30 на потребление пищи была исследована на самках крыс СЩ весом 200240 г. Животные были лишены пищи, но воду давали неограниченно. В связи с агрессивностью вызванной голоданием, животных индивидуально помещали в различные клетки. Каждому животному вводили внутривенно дозу

10 мг/кг сатиетина внутривенно, растворенного в 0 5 мл физиологического ф) раствора. Животным контрольной группы вводили только 0,5 мл физиологического раствора. Через 1 ч животным давали корм: обычные пищевые таблетки, содержащие альбумин, жир, углевод и 45

Для проверки специфического и избирательного действия было проведено испытание препарата на тест подпрыгивания по сравнению с веществом, обладающим сходным воздействием, химическим продуктом амфетамином (Й,l —амфетамин гидрохлорид, хиноин, даже большие дозы сатиетина не оказывают никакого влияния на повьппение или снижение подвижности, также не оказывают влияния и на продольные мьппцы в изолированном состоянии по сравне нию с холецистокинином).

Формула и з о б р е т е н и я

Способ получения анорексогенного средства из сыворотки крови, обладающего эндогенным эффектом насьпцения для регулирования потребления пищи через центральную нервную систему путем ультрафильтрации сыворотки крови человека через мембранный фильтр с пределами пропускания веществ с мол.м. 10000-50000 дальтон, лиофилизации фильтрата, растворения его в воде, гель-хроматографии через гель с объемом пор 1500-50000 дальтон, элюции 0,1-0,9Х-ным водным раствором хлористого натрия, лиофилизации целевого продукта и повторной гель-хроматографии через гель с объемом пор

2000-50000, элюции водой и лиофилизации.

Составитель С. Мельникова

Техред В.Кадар Корректор В. Бутяга

Редактор Г. Волкова

Заказ 2374/58 Тираж 595

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4