Способ определения фосфолипидов в биологическом материале

 

Изобретение относится к медицине . Для повышения чувствительности способа биологическую пробу экстрагируют органическими растворителями , упаривают досуха, добавляют хлороформ, обрабатывают ферротиоцианатом аммония, затем, аскорбиновой кислотой. Пробу нейтрализуют, обрабатьшают спиртовым раствором батофенантролеина, добавляют ацетон, центрифугируют и фотометрируют. СА G

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

20753 А1 (19) (11) g1) 4 G 0 1 N 3 3/ 48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ у г-;

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ":

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3953020/28-14 (22) 28. 06. 85 (46) 30. 06. 87. Бюл. №- 24 (71) Винницкий медицинский институт им. Н. И. Пирогова (72) А. А. Пен тюк, Н. Б. Луцюк, В. И. Гуцол, О.А. Яковлева (SU) ,и Аль Хадур Рамадан Хусейн (87) (53) 612.015(088.8) (56) Джуманиязова К.Р., Гафарова Н.А. — Лабораторное дело, 1980, № 4, с. 252.

Stewart J.Ch. Analytical Biochem, 1980, 104, № -1, р. 10-14. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФОЛИПИДОВ В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ . (57) Изобретение относится к медицине. Для повышения чувствительности способа биологическую пробу экстрагируют органическими растворителями, упаривают досуха, добавляют хлороформ, обрабатывают ферротиоцианатом аммония, затем аскорбиновой кислотой. Пробу нейтрализуют, обрабатывают спиртовым раствором батофенантролеина, добавляют ацетон, центрифугируют и фотометрируют.

Формула и з о б р е т е н и я

Составитель Н.Гуляева . Техред М. Ходанич

Корректор В. Бутяга

Редактор Е.Копча

Заказ 2655/49

Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4

1 132

Изобретение относится к оиохимии и может быть использовано в лабораторной практике и научных иссле- . дованиях для количественного определения фосфолипидов в биологическом материале, например в сыворотке, микросомах печени и других биологических объектах;

Цель изобретения †повышение чувствительности способа за счет определения с бато-фенантроленном железа в комплексе фосфолипид-ферротио.цианат.

Способ осуществляют следующим . образом.

Из биологической пробы экстрагируют фосфолипиды органическими растворителями (например, смесью хлороформа и метанола 1:1), упаривают досуха, вновь добавляют хлороформ, срабатывают ферротиоцианатом аммония, затем полученный комплекс обрабатывают аскорбиновой кислотой для восстановления железа. Пробы нейтрализуют, обрабатывают спиртовым раствором бато-фенантролеина, разбавляют пробу ацетоном, центрифугируют и фотометрируют образовавшийся комплекс при взаимодействии двухвалентного железа с бато-фенантролеином (интенсивное малиновое окрашивание) .

Пример 1. К 0,02 мл сыворотки крови прибавляют 0,5 мл смеси хлороформ — метанол (1:1) и упаривают досуха при 40-70 С.

К сухому остатку прибавляют 1 мл хлороформа, нагревают 30-60 с, затем прибавляют 1 мл раствора ферротиоцианата аммония и встряхивают в течение 1 мин или размешивают в миксере. Приготовление ферротиоцианата аммония: 27,03 г гексагидрата хлорного железа и 30,4 r тиоцианата ам0753 2 мония растворяют в 1 л воды. После расслоения фаз отбирают 0 5 мл хлороформенного слоя, переносят в новую пробирку и упаривают досуха.

К пробе добавляют 2 мл 0,5Х-ного раствора аскорбиновой кислоты на

0,05 M растворе НС1 и инкубируют 1ч при 37 С для перевода трехвалентного железа в двухвалентное. Затем в npof0 бы прибавляют 0,8 мл 0,1 М раствора едкого натрия, 0,5 мл 0,057.-ного спиртового раствора бато-фенантролеина и 2 мл ацетона, пробы размешивают и после центрифугирования прозрачный раствор фотометрируют в кювете с длиной оптического пути

1 см при зеленом светофильтре.

Определение ведут по калибровоч20 ной кривой зависимости оптической плотности от концентрации фосфолипндов. Для стандартного раствора лецитина оптические плотности составляют 0,125; 0,240; 0,550, 0,720

25 и 0,810 при концентрациях лецитина

1,2,5, 10 и 20 мкг соответственно.

30 Способ определения фосфолипидов в биологическом материале путем экстракции органическими растворителями, обраббтки пробы ферротиоцианатом аммония, экстракции образующего 5 ся комплекса органическим растворителем и последующего фотометрирования, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, комплекс фосфолипи40 дов с ферротиоцианатом дополнительно обрабатывают аскорбиновой кислотой, нейтрализуют и добавляют спиртовой раствор бато-фенантролеина и ацетон.