Способ получения аубазидана

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения полисахарида аубазидана , который может, быть использован в фармакологии как стабилизатор суспензий и эмульсий при приготовлении лекарственных форм. Целью изобретения является увеличение выхода аубазидана и снижение его себестоимости. Способ заключается в выращивании гриба Aureobasidium pullulans штамм 8 на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода деминерализованный на катионите отход производства декстрана - маточный,раствор, полученньш после осаждения натнвного декстрана, который вводят в среду в концентрации 4-5% из расчета на редуцирующие вещества. 3 табл. 00 оо ( N5 СО

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4 С 12 Р 19/04

13

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4017785/28-13 (22) 22. 01. 86 (46) 23.09.87. Бюл. 35 (71) Ленинградский химико-фармацевтический институт (72) Н,П.Елинов,Н.В.Глазова,С.Б.Кравченко, Т.С.Потехина и Н.A. Силуянова (53) 663.15 (088.8) (56) Патент СНА N - 514560, кл. С 12 P 19/04, 1985.

Авторское свидетельство СССР

Р 877939, кл. С 12 Р 19/04, 1980. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АУБАЗИДАНА (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения полисахарида аубаэида„„SU„„1339129 A1 на, который может быть использован в фармакологии как стабилизатор суспензий и эмульсий при приготовлении лекарственных форм. Целью изобретения является увеличение выхода аубаэидана и снижение его себестоимости. Способ заключается в выращивании гриба

Aureobasidium pullulans штамм 8 на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода деминералиэованный на катионите отход производства декстрана — маточный, раствор, полученный после осаждения нативного декстрана, который вводят в среду в концентрации 4-5Х из расчета на редуцирующие вещества. 3 табл.

1 1339129 2

Изобретение относится к микрс биологической промышленности и кас ается получения полисахарида аубазидана, который может быть использован в фар5 маколо гни как стабилизатор суспензий и эмульсий при приготовлении лекарственных форм.

Пель изобретения — увеличение выхода аубазидана и снижение егn < ебе- 1р стоимо сти.

Способ заключается в следующем.

Дрожжеподобный гриб Aureobasidium

pullulans штамм 8 выращивают на питательной среде, содержа»»»ей минераль- 15 ные компоненты и источник углерода, в качестве которого используют деминерализованный на катионите отход производства декстрана — маточный раствор, полученный после осаждения 2р нативного декстрана. Применение отхо— да производства декстрана в качестве источника углерода значительно удешевляет процесс получения аубаэидана.

Водно-спиртовой маточник, полученный 25 после осаждения нативного декстрана, содержит цо 3,0-4,57. фруктозы, небольшое количество низкомолекулярного декстрана, остатки питательной среды для культивирования Ее»»сопозСое Зр

mesentегоides и продукты метаболизма этой культуры. Фруктоза и низкомолекулярньп» декстран легко улитизируются Aureobasidium pullulans штамм 8 с образованием аубазидана. При этом продукты метаболизма Leuconostoe mesentегоides и остатки питательной среды (белки, органические кислоты, витамины) являются ценными источниками питания для продуцента и благотвор-4р но влияют на его жизнедеятельность.

Витамины способствуют быстрому росту и размножению клеток Aureobasidium

pullulans штамм 8. Продукты метаболизма — органические кислоты и амино- 45 кислоты являются дополнительным источником углеродного и азотного питания для клеток продуцента, что также способствует ускорению процесса образования аубазидана. Удачное сочета- 5ð ние органических веществ в отходе производ< тва декстрана приближает его к естественным субстратам и является причиной повышения выхода аубазидана в данном способе.

Как видно из табл.1, при увеличении концентрации PB в среде выход нативного аубазидана (вместе с клетками продуцента ) повьш»ается. В то же время при 7,07 РВ в среде резко увеличивается содержание клеточной биомассы, что ведет к ухудшению условий очистки целевого продукта от клеток продуцента на стадии сепарирования.

Кроме того, снижается выход полисахарида в расчете на содержащий в среде источник углерода. Снижение концентрации PB в среде до 37 приводит к резкому снижению выхода нативного и чистого аубазидана. Таким образом, оптимальной является концентрация PB

4-57.

Использование в качестве источника углерода деминерализованного на катионите отхода производства декстрана не приводит к ухудшении свойств и потребительских характеристик аубазидана. Результаты влияния состава среды на качество аубазидана приведены в табл.2.

Получение аубазидана по предлагаемому способу начинают с приготовления питательной среды для выращивания дрожжеподобного гриба Aureobasidium pullulans штамм 8.

Иаточн»»к после отгонки спирта при

60-65 С и остаточном давлении (7,0— 8,0) ° 10 Па при содержании редуци рующих веществ (PB) 8,5-107. охлаждао ют до 20-25 С и деминерализуют на катионите. Операция деминерализации необходима, так как присутствующие в маточнике ионы NH оказывают нега4 тивное влияние на синтез аубазидана.

В результате очистки из раствора удаляются ионы NH, а также К, Na+, У

Fe и др. Полученный раствор разбавляют обессоленной водой до 57-ной концентрации РВ, и вводят соли, являющиеся минеральной основой среды

Чапека-Докса. Составленную среду подвергают стерилизации. Готовую питательную среду засевают (57. от объема) посевным материалом. Ферментацию проводят при 24-25 С в течение 84-94 ч.

После охлаждения ферментационной массы до 18 С осаждают нативный аубазидан. Затем отделяют клетки продуцента от целевого продукта. Очищенный аубазидан обезвоживают в токе азота и отжимают на валках. Окончательно осадок высушивают горячим азотом.

Данные влияния концентрации РВ в среде на выход нативного и чистого аубазидана приведены в табл.l.

20 вают.

Отделенные декантацией осадки растворяют при 700С в обессоленной воде. Клетки продуцента отделяют от це- Вр левого продукта двукратным сепарированием при 60 С. Отделенный от клеток раствор аубазидана упаривают в три раза при 70 С и остаточном вакууПример. Из маточника, полученного после осаждения нативного декстрана, отгоняют этиловый спирт при 63 С и остаточном давлении 8 10Ла до содержания PB 8,57. Упаренный о раствор охлаждают до 25 С и деминерализуют на колонне с катионитом в Н форме со скоростью подачи очищаемоro раствора 6 мл/см мин. Полученный !р раствор разбавляют обессоленной водой до содержания РВ, 57 с добавлением минеральных солей из расчета, г/л:

NaNO> 3; К НРО4 1; Мр80, H О 0,5;

КС1 0,5; FeSO 7Н О 0,01. !5

Затем устанавливают 2 н. раствором NaHO рН питательной среды 6,5 и стерилизируют ее 30 мин при 105 С.

200 мл приготовленной таким образом среды заливают в колбу емкостью

750 мл. Во вторую колбу помещают

200 мл питательной среды, приготовленной по описанному способу, но с чой разницей, что не проводят ионообменную очистку отхода производства 26 декстрана. В третью и четвертую колбы заливают питательные среды, приготовленные соответственно на сахарозе и фруктозе с концентрацией источника углеродного питания в растворе 57.. Зр

Приготовленные среды засевают посевным материалом в количестве 57 (объемн. ), выращенным на среде, со— держащей в качестве источника углеродного питания сахарозу. Ферментацию З

Aureobasidium pullulans штамм 8 проводят при 24 С на качалке. Продолжительность ферментации 94 ч. После охлаждения культуральной жидкости до

18 С нативный аубазидан в каждой из 4р колб осаждают этиловым спиртом при рН 6,6 в два приема: О, 05 л этанола на 0,1 л культуральной жидкости, после 15-минутного перемешивания,цополнительно загружают 0,1 л этанола на 45

0,1 л исходной массы, снова перемешиме 8 10- IIa. Затем проводит повторное осаждение аубазидана этиловым спиртом в присутствии 17-ного хлорис— того натрия при рН 6,6. К полученным осадкам после декантации добавляют равный объем спирта и проводят обезвоживание осадков перемешиванием сжатым азотом. Затем маточники сифонирунт. Осадки отжимают на валках, уст— роенных по типу фрикционной передачи, и высушивают в кипящем слое в токе горячего азота температурой 45 С в течение 10 мин. Затем их взвешивают и определяют выход аубазидана с 1 л культуральной жидкости. Результаты влияния состава источника углерода на биосинтез аубазидана приведены в табл.3.

Как видно из табл.3, предлагаемый способ получения аубазидана позволяет увеличить выход целевого продукта в 1,2 раза. При этом вместо сахара в качестве источника углерода для приготовления питательной среды используется содержащий фруктозу отход производства декстрана. В результате этого обеспечивается удешевление процесса получения аубазидана, экономится значительное количество ценноro пищевого продукта — сахара.

Формула изобретения

Способ получения ауб а зидана, предусматривающий выращивание гриба Aureobasidium pullulans штамм 8 в условиях аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, до максимального накопления целевого продукта с последующим его выделением, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью увеличения выхода аубазидана и снижения его себестоимости, в качестве источника углерода используют деминерализованный на катионите отход производства декстрана, полученный после осаждения нативного декстрана иэ культуральной жидкости Еецсопозйое

mesentегоides, который вводят в среду в концентрации 4-57. из расчета на редуцирующие вещества.

13391?9

Т а блица ) Содержание биоВыход чистого аубазидана, Х, по отношению к

Выход чистого аубазидана, г/л массы, г/л нативно- источнику му ауба- углерода в зидану среде

3,0

4,8

8,8

4,0

54,5

16,0

4,0

6,0

6,2

12,2

50,8

15,5

5,0

15,6

7,8

7,8

50,0

15,6

l1,4

7,0

17,5

9,5

8,0

45,7 (ТаблИца2 рН 0,1Хного

Относительная

Питательная среда

СульфатСодержание влаги, Х ная зола, водного раствора вязкость

О, 1Х-ного водного раствора, сП

Предлагаемая

2,2

10,5

3,1

6,5

Известная (среда

Чапека-Докса с сахарозой) 3,5

11,0

3,2

7,0

Требование временной фармакопейной статьи

Не более Не более Не менее 5,5-7,5

6012520

Таблица 3

Источник углерода в питательной среде

Концентрация PB в питательной среде, Х

Отход производства декстрана: деминерализованный на КУ-2-8 неочищенный на катионите КУ-2-8

7,8

2,1

6,4

Чистая фруктоэа

Сахароза

6,5

Концентрация PB в среде, Х

Выход нативного аубазидана, г/л

Выход аубазидана, г/л