Способ количественного определения белка
Изобретение относится к микробиологии и может найти применение при количественном определении белка в растворах и экстрактах из различных биологических объектов. Целью изобретения является сокращение времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности метода. Щелочной экстракт белка из растертых листьев и клубеньков сои помещают в пробирку и добавляют медно-карбонатный реактив, содержащий 2% , 0,02% трехзамещенного лимонно-кислого Na и 0,01% . ЗН,0. Пробирку помещают в водяную баню с температурой 98°С на 10-15 с с последующим введением 0,5 мл 1 н. фенольного реагента Фолина-Чиокалтеу и вьщержкой в водян сй бане при 98 с в течение 30-40 с. Пробу охлаждают в воде и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов на спектрофотометре при длине волны 750 нм. Количественное определение белка осуществляют в зависимости от измеренных значений оптической плотности. 3 табл. S (Л
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
А1
„„SU„„1383201 (51) 4 G 01 N 33/02
Г
Е
Ъ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3811276/28-13
) (22) 31. 10. 84 (46) 23.03.88. Бюл. В 11 (75) H.Ã.Òåðìõèòàðîâà и А.В.Шульга (53) 641.12(088.8) (56) Peterson С.L. Analit. Biochem., 1979, v. 100, 201.
Мосолов В.В. и др. Прикладная био-: химия и микробиология, 1965, т. I вып. 2, с. 233-237. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА (57) Изобретение относится к микробиологии и может найти применение при количественном определении белка в
\ растворах и экстрактах из различных биологических объектов. Целью изобретения является сокращение времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности метода. Щелочной экстракт белка из растертых листьев и клубеньков сои помещают в пробирку и добавляют медно-карбонатный реактив, содержащий 2% Na 0,02% трехзамещенного лимонно-кислого Na и 0,01% CuSO<.5H<0. Пробирку помещают в водяную баню с температурой 98 С на 10-15 с с последующим введением 0,5 мл 1 н. фенольного реагента Фолина-Чиокалтеу и выдержкой в водяной бане при 98 0 в течение 30-40 с. Пробу охлаждают в воде и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов на спектрофотометре при длине волны 750 нм. Количественное определение белка осуществляют в зависимости от измеренных значений оптической плотности. 3 табл. 1383201 Изобретение относится к микробиологии, биотехнологии, биохимии и касается определения белка в растворах и экстрактах из различных биологических объектов. Цель изобретения — сокращение времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности метода. Оптическая плотность не изменяется 10 в течение 1 ч и более длительного времени и воспроизводится при повторных анализах вследствие того, что достигается плато" оптической. плотности. В табл. 1 — 3 приведены средние данные из трех определений содержания белка, полученные согласно предлагаемому способу, и контрольные данные согласно известному способу. 20 Пример 1. В пробирку помещают 1 мл щелочного экстракта (0,5 í. NaOH) белка концентрацией 5-80 мкг/мл из растертых листьев и клубеньков сои и добавляют 5,0 мл медно-карбонатного реактива содержащего %: ИадСОЗ трехзамещенный лимонно-кислый Na 0,02; CuSOy 5Н О 0,01. Пробирки ставят в водяную баню температурой 98 С на 15 с, затем быстро добавляют 0,5 мл 1 н. фенольного реагента Фолина-Чиокалтеу, энергично встряхивают и снова помещают в водяную баню температурой 98 С на 30 с. Пробы охлаждают в воде и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов на спектрофотометре при длине волны 750 нм. ! Контроль. Аликвоты щелочного экстракта белка согласно известному спо- 40 собу после добавления 5 мл медно-карбонатного реактива выдерживают при комнатной температуре 15 мин, а затем после добавления (используют исключительно короткие интервалы време- 5 ни и высокие температуры для проведения реакций образования медно-протеинового комплекса при взаимодействии анализируемого белка с медно-щелочным реактивом — 1-я реакция) и последую50 щего восстановления реактива ФолинаЧиокалтеу образовавшимся медно-протеиновым комплексом (2-я реакция) создаются условия, когда достигается максимальная величина оптической плотности, что обеспечивает достаточную чувствительность метода (5 мкг/ /мл), 0 5 мл 1 н. раствора ФолинаЧиокалтеу выдерживают в термостате при 37 С 30 мин. Пример 2. Осуществляют так же, как в примере 1, за исключением того, что в качестве проб берут щелочные экстракты из дрожжей Candida valida u Candida didensii, время проведения 1-й реакции 10 с 2-й реакции 35 с. Температура водяной бани 100 С, Пример 3. Осуществляют так, же, как в примере 1, за исключением того, что в качестве проб берут щелочной экстракт из биомассы Penicillium sizovae время проведения 1-й реакции 10 с, 2-й реакции 40 с. Температура .водяной бани 99 С. Таким образом, предлагаемый способ позволяет проводить количественное определение содержания белка в пробах в течение не более двух минут, что в 7,5 раза быстрее известного ускоренного метода определения белка, причем полученные данные практически не отличаются от результатов, полученных известными методами. Формула изобретения Способ количественного определе" ния белка, предусматривающий отбор пробы, смешивание с медно-карбонатным реагентом, выдерживание, последующее нагревание с реактивом, ФолинаЧиокалтеу и измерение оптической плотности окрашенного раствора, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью сокращения времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности ме тода, выдерживание пробы, смешанной с медно-карбонатным реагентом, и последующее нагревание с реактивом Фолина-Чиокалтеу проводят в кипящей водяной бане в течение 10-15 и 30-40 с соответственно. 1383201 Таблица 1 Образец Содержание белка, мкг/мл, по способу известному предлагаемому 57,0 54,0 68,5 68,5 60,0 59,2 35 3 36,4 Т а б л и ц а 2 Содержание белка, мкг/мл, по способу Образец известному предлагаемому 38,0 39,0 45,7 46,2 36;5 35,5 49,6 50,1 50,1 51,3 50,2 49,7 45,0 46,0 52,4 53,6 45,7 45,9 Т а б л и ц а 3 Образец Содержание белка, мкг/мл, по способу известному предлагаемому 48,5 50 0 41,1 42,0 33,6 31,9 50 3 49 9 43,2 43,1 57 0 55,0
