Способ оценки биологической активности препарата тимуса
Изобретение относится к медицине. У лимфоцитов тимуса морской свинки трипсином разрушают рецепторы к эритроцитам кролика. Готовят контрольную и опытную суспензии лимфоцитов. Вносят в опытную суспензию препарат тимуса и при повышении числа розеткообразующих клеток в опыте по сравнению с контролем не менее чем на 50
10% препарат тимуса считают биологически активным. Способ позволяет провести оценку активности препарата тимуса в течение 15 мин.
Изобретение относится к медицинской промышленности и может быть использовано для оценки биологической активности препарата тимуса "Тималин". Цель изобретения - сокращение сроков выполнения способа и повышение его специфичности. Цель достигается за счет использования раствор трипсина для разрушения рецепторов тимоцитов морской свинки. Способ поясняется следующим примером. У морских свинок-самцов массой 150-250 г под эфирным наркозом удаляют тимус. Ткань помещают в среду 199 и тщательно гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе. Суспензию фильтруют через 4 слоя мари и центрифугируют 10 мин при 400 g. Надосадочную жидкость удаляют и к осадку добавляют 1 мл среды 199. После подсчета концентрации клеток в камере Горяева суспензию разбавляют до 20х106 клеток/мл. Для постановки теста в сухую центрифужную пробирку вносят суспензию тимоцитов в концентрации 20х106 клеток/мл и добавляют 0,5%-ный раствор трипсина ("Реахим" Олайнский завод) в соотношении 6:1. Раствор трипсина готовят непосредственно перед употреблением. После добавления раствора трипсина образующийся сгусток удаляют отсасыванием пипеткой. Суспензию клеток центрифугируют 10 мин при 400 g. Надосадочную жидкость аккуратно сливают, прибавляют 3 мл среды 199 и осадок тщательно ресуспендируют. Отмывание тимоцитов от трипсина повторяют. После отмывания тимоциты повторяют. После отмывания тимоциты разбавляют до концентрации 2х106 клеток/мл. Для проведения реакции в первую центрифужную пробирку вносят 0,1 мл интактной суспензии тимоцитов (норма) в концентрации 2х106 клеток/мл, во вторую и третью центрифужные пробирки - по 0,1 мл контрольной суспензии тимоцитов, обработанных трипсином, в той же концентрации. В третью пробирку добавляют 0,02 мл 0,01%-ного раствора тималина в среде 199, приготовленного перед опытом. Затем во все пробирки вносят по 0,1 мл 1%-ной суспензии свежих отмытых раствором натрия хлорида изотонического 0,9% эритроцитов кролика, разведенных в среде 199. Взвесь клеток перемешивают и центрифугируют 5 мин при 200 g. После центрифугирования клетки осторожно ресуспендируют и в камере Горяева подсчитывают процентное содержание розеткообразующих клеток (РОК) в каждой пробирке. За РОК принимают тимоцит, присоединивший к себе 3 и более эритроцитов. Для каждой партии препарата определяют средние арифметические показатели процентного содержания РОК у 5 животных. Тималин считают биологически активным, если при снижении среднеарифметического числа РОК в контроле по сравнению с нормой препарат восстанавливает количество РОК в опыте по сравнению с контролем не менее чем на 50 10%. Влияние тималина на трипсинизированные тимоциты морской свинки следующее: норма 59,4 3,5; контроль 19,7 2,8 (статистически достоверно (Р <0,05) по сравнению с нормой); опыт 41,9 2,6 (статистически достоверно (Р <0,05) по сравнению с контролем). Как видно из представленных данных, при статистически достоверном снижении числа РОК в контроле по сравнению с нормой тималин восстанавливает процентное содержание РОК в опыте по сравнению с контролем более чем на 50% и, следовательно, считается биологически активным. Вся процедура методики занимает всего 15 мин по сравнению с 23 ч в известном способе. Для подтверждения строгой специфичности предложенного способа на предлагаемой модели исследованы полипептидные препараты из других органов и такие стимуляторы неспецифической резистентности, как зимозан и продигиозан. Во всех этих случаях достоверного повышения РОК не отмечалось. Таким образом, предложенный способ высоко специфичен и позволяет провести оценку активности препарата тимуса "Тималин" в краткие сроки.
Формула изобретения
Способ оценки биологической активности препарата тимуса путем выделения тимоцитов морской свинки, разрушения у них рецепторов к эритроцитам кролика, обработки клеток препаратом тимуса и подсчета количества розеткообразующих клеток, отличающийся тем, что, с целью сокращения сроков выполнения способа и повышения его специфичности, для разрушения рецепторов используют раствор трипсина.MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 14.08.2003
Извещение опубликовано: 10.07.2008 БИ: 19/2008
