Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов

 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для определения иммунного статуса человека. .Цель изобретения - повышение точности и упрощение способа . Способ определения фагоцитоза дрожжей заключается в том, что цельную кровь центрифугируют, отделяют плазму и к оставшимся клеткам добавляют суспензию убитой 0,6%-ной культуры пекарских дрожжей (производственная раса 7, Томская), инкубируют 15 мин при комнатной температуре , добавляют гемолитическую жидкость, готовят мазки, их фиксируют , окрашивают и фагоцитирующие клетки подсчитьшают. Гемолитическая жидкость имеет следующий состав: водный раствор 0,083%-ного хлорида аммония и о , 004%-ной 2-замещен-1 ной натриевой соли этилендиаминтётрауксусной кислоты (трилон Б) с доведением рН до 7,2-7,4. Предложенный способ позволяет увеличить число обследований, прост и может быть использован в полевых условиях, i табл. с W

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (5и 4 0 О1 М 33/53

ГХ

OCV3APCTBEHHblA КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3920931/28-14 (22} 27.06.85 (46) 07.02.89. Бюл.. ¹ 5 (71) Институт иммунологии (72) О,@.Еремина и Н.M.Ãîëóáåâà (53) 615.375(088.8) (56) ЖМЭИ. 1983, № 9, с. 99-105. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАГОЦИТАРНОЙ

АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ (57) Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для определения иммунного статуса человека. Цель изобретенияповышение точности и упрощение способа. Способ определения фагоцитоза дрожжей заключается в том, что цельную кровь центрифугируют, отделяют плазму и к оставшимся клеткам

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клини-. ческой иммунологии для определения иммунного статуса организма при первичном иммунологическом исследовании больших контингентов.

Цель изобретения — повышение точности, упрощение и ускорение способа.

Способ осуществлчется следующим образом.

Цельную кровь центрифугируют, отделяют плазму, а к оставшимся клеткам добавляют суспензию равного количества убитой 0,6%-ной культуры пекарских дрожжей производственной расы 7, Томская, инкубируют 15 мин при комнатной температуре, добавляют ге

„,ЯО„„И56895 И добавляют суспензию убитой 0,6%-ной культуры пекарских дрожжей (производственная раса 7, Томская), инкубируют 15 мин при комнатной температуре, добавляют гемолитическую жидкость, готовят мазки, их фиксируют, окрашивают и фагоцитирующие клетки подсчитывают. Гемолитическая жидкость имеет следующий состав: водный раствор 0,083%-ного хлорида аммония и 0,004%-ной 2-замещен- ной натриевой соли этилендиамййтетрауксусной кислоты (трилон Б) с доведением рН до 7,2-7,4. Предложенный способ позволяет увеличить число обследований, прост и может быть использован s полевых условиях.

1 табл. молитическую жидкость следующего сос-, тава: водный раствор 0,083%-ного хлорида аммония и 0,004%-ной 2-замещенной натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (трилона Б) с доведением рН до 7,2-7,4, центрифугируют, готовят мазки, которые фиксируют, окрашивают и фагоцитирующие клетки под-. считывают известным способом.

Пример 1. Для анализа берут 0,3 мл гепаринизованной крови (20 ед. гепарина на 1 мл крови), центрифугируют при 200@ в течение

5 мин, получившуюся плазму осторожно . отбрасывают в чистую пробирку для дальнейшего использования (например, для определения содержания иммуноглобулина) ° Оставшийся осадок осторож1 з 145 но, тщательно взбалтывают, часть клеток удаляют, чтобы в пробирке осталось 0,1 мл клеточной взвеси. К оставшейся клеточной взвеси добавляют

0,1 мл дрожжевых частиц в концентрации 0,6 % и выдерживают при комнатной температуре в течение 15 мин. По истечении срока инкубации клеток с дрожжами добавляют гемолитическую жидкость в объеме 5,0 мл с целью лизирования эритроцитов. После наступления лизиса добавляют равный объем среды 199, центрифугируют при 200@ надосадочную жидкость сливают, а из осадка готовят мазки, которые высушивают, фиксируют метиловым спиртом и окрашивают метиловым зеленым, пиронином. В мазках подсчитывается процент фагоцитирующих нейтрофилов.

Общее время постановки реакции 1 ч.

Пример 2. Донор В, 31 лет.

Диагноз . практически здоров. Гепариуиэированную кровь в количестве 0,2 мл разделяют на 2 равные части, к каждой из которых добавляют равное количество (0,1 мл) пекарских дрожжей в концентрации 0,6 X. Контакт при комнатной температуре, продолжительность которого для 1-й пробирки равнялась 3 мин, для 2-й пробирки продолжительность .контакта была 15 мин.

Фагоцитоз в первом случае был равен

31 %, a во втором - 72 X.

Пример 3. Донор Д, 36 лет.

Диагноз: практически здоров ..Гепаринизированную кровь, взятую в том же объеме, смешали с равным объемом дрожжей в концентрации 0,6 X. Контакт на столе при комнатной температуре для 1-й пробирки равнялся

30 мин, для 2-й 2-!5 мин. Количество фагоцитирующих клеток для 1-й пробирки равнялось 100 %, а во второй—

69 %.

Сравнение результатов определения фагоцитарной активности нейтрофилов по предложенному и известному способам представлено в таблице.

Как видно из таблицы, % фагоцитиру" ющих нейтрофилов в обоих случаях

4 почти одинаковый. Однако время, затФормула изобретения

Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов, включающий добавление к клеткам цельной кройк равного количества убитой нагреванием культуры пекарских дрожжей, инкубирование, приготовление мазков, их фиксацию, окраску и последующий подсчет фагоцитирующих клеток, о т40 л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа, цельную кровь центрифугируют, отделяют плазму,а к оставшимся клеткам добавляют йекарские дрожки производственной расы 7, Томская, а инкубирование проводят в течение

4-29 мин при комнатной температуре, далее проводят лизис эритроцитов с доведением рН смеси до 7 ° 2-7,4.

50 раченное для постановки реакции, сократилось в 2 раза.

Предложенный способ определения

5 фагоцитоэа дрожжей по сравнению с известными позволяет быстро, без потери клеток исследовать фагоцитарную активность нейтрофилов. Сохране10 ние количества клеток в первоначальном объеме дает возможность уменьшить исходный объем крови до 0,3 мл.

Это позволяет использовать для анализа капиллярную кровь иэ пальца, что

15 значительно облегчает и упрощает забор крови для исследования и дает возможность применить этот способ в детской практике. Кроме того, предлагаемый способ обеспечивает получе20 ние плазмы, которая может быть в дальнейшем использована для других тестов первичного иммунологического обследования (определения иммуногло- . булинов). Небольшой объем крови, не25 обходимый для исследования, быстрота и простота выполнения предложенного способа позволяет применять еГо в целях проведения первичного иммунологического исследования в широком

З0 масштабе.

1456895

КоличеПроцент фагоцнтарной активности нейтрофилов (в скобках даны минимальные и максиСпособ ремя остаство наблюдений овки еакции, Ц мальные значения в группах) 56(12-74) 50

Известный

Предла ra емый

53(16-68) 50

Составитель П. Бонарцев

Техред Л.Олийнык Корректор В. Гирняк

Редактор В. Данко

Производственно=полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Заказ 7548/44 Тираж 788 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5