Способ исследования энергообмена сердечной мышцы

 

Изобретение относится к биохимии . Цель изобретения - повышение степени ингибирования. Препарат вводят животным в дозе 10-100 мг/кг и определяют активность пируватдегидрогеназы. Использование тетрагидроокситиаминтрифосфата позволяет на 87% ингибировать активность пируватдегидрогеназы сердца, не изменяя при , этом активности транскетсшазы. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК сЮ 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОбРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И О 1НРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4186800/28-14 (22) 26.01.87 (46) 07. 03.89. Бюл. N- 9 (71) Институт биохимии АН БССР (72) Ю.М. Островский, С.В. Забродская и Д.А. Опарин (53) 6 12.015(088.8) (56) Биохимия, 1983, т. 48, вып. 6, с. 928-931. (54) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ ЭНЕРГООБМЕНА

СЕРДЕЧНОЙ МЫШЦЫ

Изобретение относится к биохимии, в частности к экспериментальной витаминологии и кардиологии, и может быть использовано для ингибирования активности пируватдегидрогеназы сердца лабораторных животных при изучении роли различных энергодающих механизмов, обеспечивающих работу сердца °

Цель изобретения — повышение степени ингибирования активности пируватдегидрогеназы сердца животных за счет использования тетрагидроокситиаминтрифосфата.

Пример 1. Тетрагидроокситиамин. Раствор 5 г (0,02 моль) тетрагидротиамина в 50 мл 207-ной НС1 кипятят в течение 6 ч, По охлаждении раствор упаривают под уменьшенным давлением (10-20 мм рт. ст., 50 60 С), остаток высушивают в вакуумэксикаторе над PzÎ и дважды кристаллизуют из этанола. Выделяют

5,6 r (98X) хлоргидрата тетрагидроокситиамина (С,zH 8 N Oz S ° НС1) в виде бесцветных кристаллов с т. пл. 182-

ÄÄSUÄÄ 1464081 А1 (57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения — повышение степени ингибирования. Препарат вводят животным в дозе 10-100 мг/кг и определяют активность пируватдегидрогеназы. Использование тетрагидроокситиаминтрифосфата позволяет на 87Х ингибировать активность пируватдегидрогеназы сердца, не изменяя при этом активности транскетолазы.

1 табл.

183 С и Rf 0,48 (н-бутанол:этанол: .вода 2:1:1), бумага FN5). Полученную соль растворяют в 15 мп воды и нейтрализуют 2 н. раствором едкого натра (9.мл). Выпавший в осадок тетра,гидроокситиамин — основание отфильтровывают и перекристаллизовывают из горячей воды. Выход 4,2 г (85X), т. пл. 215-217 С и Rf 0,74 (н-бутанол:этанол:вода 2: 1: 1, бумага FN5) .

Тетрагидроокситиаминтрифосфат.

К однородной массе, содержащей 4 г (4 1 ммоль), обезвоженной при 125 С

Н РО4 и 4 r (28 ммоль) Р О, прибавМй ляют 2 r (7,5 ммоль) тетрагидрокситиамина. Реакционную смесь перемешивают в течение 15 мин при 110 С, охлаждают до

: 40 С и прибавляют 10 г измельченного ф льда. Полученный раствор выливают в

200 мл охлажденного до (-5) — (10) С без-. водного ацетона. Через 1 сут маслообразный осадок отделяют, растворяют в

5 мп воды, нейтрализуют 257-ным ра.створом NH OH до рН 5-6, наносят . на колонку (1,5 х 4,0 мм) с Dowex 50

1464081

Активность пируватдегидрогеназы (в мкмоль K(Fe(CN)q)/г белка за 20мин) и транскетолазы (в мкмоль седогептулозо-7-фосфата/г ткани за 1 ч) в сердце белых мышей после однократного подкожного введения тетрагидроокситиаминтрифосфата и тиохромтрифосфата приведена в табл.

Анализ экспериментальных данных (таблица) показывает, что введение тетрагидроокситиаминтрифосфата в предлагаемом способе и тиохромтрифосфата в известном способе в дозе 10 мг/кг вызывает практически одинаковый ингибирующий эффект в отношении пируватдегидрогеназы сердца, снижая ее,активность на 43 и 38X соответственно.,Увеличение вводимой дозы препарата в известном способе до 200 мг/кг позволяет увеличить ингибирующий эффект лишь до

577, в предлагаемом способе в два раза меньшая доза тетрагидроокситиаминтрифосфата (100 мг/кг) позволяет практически полностью заингибировать активность пируватдегидрогеназы сердца (на 877), не изменяя при этом активности транскетолазы.

Формула и з о б р е т ения

Способ исследования энергообмена сердечной мьппцы путем ингибирования пируватдегидрогеназы сердца животных парентеральным введением антагониста тиамина, о т л-и ч а ю шийся тем, что, .с целью повьппения степени ингибирования, в качестве антагониста тиамина вводят тетрагидроокситиаминтрифосфат в дозе 10-100 мг на кг массы.Активность пируватдегидрогеназы при введении дозы, мг/кг I

200

Контро

200

Конт- 100 роль

Тетрагидроокситиаминтрифосфат

Рк

Тиохромтрифосфат

Р

19+1 1812

РС,5

134+34 31 14 э0,2. с 0,001

235+ 25

18 11

17t1

) 0,05. 134+5

C. 0,001

216 8

"(22И6) (95t4) 0,001 (Н -форма) и элюируют водой. Фракцию с Rf 0,25 (н-пропанол:К Na -фосфатный буфер рН 5:вода 7:2 „ 1, бумага

УИ5) упаривают .под уменьшенным давлением (8-10 мм рт. ст.,„20-30 С), остаток дважды обрабатывают безводным ацетоном. Получают 0,3 r (BX) целевого продукта в виде аморфного бесцветного гигроскопичного порошка, 10 нерастворимого в уГлеводородах, эфире и аце оне. УФ-спектр (рН 7,4), Лмвкс q HN (18Е):227 (3„66), 270 (3,54); ИК-спектр (суспензия в вазелиновом масле), 4, см ": 3460- 15 3270(0Hacc) ъ 2740 2620 (P OH cd)»

1633, 1540(С-С, C=N) 1373(С-N)

1250(Р=0), 1080, 893{P-О-С) .

Пример 2. Используют 5 групп ! (no 6 животных в каждой) белых мышей-20 самок массой 18-20 г. Препарат вводят животным в виде водного раствора объемом 0,2 мл однократно подкожно в дозах 10 мг/кг (1 группа).и .100 мг/кг (2 группьд .. В качестве контроля используют интактных живот- . ( ных (2 группы). Забой животных (декапитацией) проводят одновременно в опытной и контрольной группах через

3 ч и 3 сут после инъекций, т.е. в 30 сроки максимального падения активности соответственно пируватдегидрогенаэы и транскетолазы при применении различных. известных антагонистов тиа«..; мина. 35

Активность пируватдегидрог енаэы определяют по методу Гублера транске-. толаэы по методу Брунса, à содержание белка - по Лоури.

Экспериментальные данные обраба- 40 тывают статически с применением tкритерия Стьюдента.

Активность транскетолаэы при введении дозы, мг/кг