Способ определения противосудорожных препаратов в биологических жидкостях
Изобретение относится к медицине, может быть использовано для определения противосудорожных препаратов в биологических жидкостях. Цель - увеличение чувствительности способа определения. Плазму крови пациента наносят на колонку для жидкостной хроматографии и элюируют буфером с рН 7,1-7,4 в градиенте концентраций трис-гидроксиметиламинометана от 0 до 0,015 М. В качестве носителя используют кремнезем с размером частиц 11-15 мкм, содержащий привитый к внутренней поверхности пептид формулы глицин -L-лейцин. 1 ил.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЯИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
7 А1 (19) (1!) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К д ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР (21) 4248483/28-14 (22) 25.05.87 (46) 30.04.89. Бюл. ¹ 16 (71) МГУ им. М.В. Ломоносова (72) А.А. Сердан, А.Г. Ляшенко, Л. Б . Строганов, Г . В . Лисичкин и Ж.М. Минасян (53) 612.015(088.8) (56) Anal ° Chem., 1 985, v. 57, № 8, р. 1 757-1 763 . l (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОТИВОСУДОРОЖНЫХ ПРЕПАРАТОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ (57) Изобретение относится к медиИзобретение относится к биохимии, . в частности к определению противосудорожных препаратов методом жидкостной хроматографии при умеренном (до 50 бар) давлении, и может быть использовано для анализа плазмы крови, спинно-мозгового ликвора или слюны пациентов. Цель изобретения — увеличение чувствительности определения противосудорожных препаратов за счет использования кремнезема с размером частиц 11 -15 мкм, содержащего привитые к внутренней поверхности пептидные rруппы формулы глицин — L-лейцин,а в качестве элюента — водный буферный раствор с рН 7,1 -7,4. Пример 1. 10 г силикагеля Силасорб Si-300 с диаметром пор!0 нм и частицами 15 мкм обрабатывают гамцике, .может быть использовано для определения противосудорожных препаратов в биологических жидкостях. Цель изобретения — увеличение чувствительности способа определения. Плаз. му крови пациента наносят на колонку для жидкостной хроматографии и элю.— ируют буфером с рН 7,1 -7,4 в градиенте концентраций трис-гидроксиметиламинометана от 0 до 0,015 N. В качестве носителя используют кремнезем с размером частиц 11 -15 мкм, содержащий привитый к внутренней поверхности пептид формулы глицин-L-лейцин. 1 ил. ма-глицидоксипропилтриэтоксисиланом в натрий-ацетатном буферном растворе (рН 5,65) при нагревании на водяной бане и перемешивании. Продукт отмывают водой и кипятят 1 ч в 0,01 М НС1 для образования диольных групп . Далее сорбент отмывают водой, ацетоном и 200 мл абсолютированного диоксана для обработки раствором паратолуолсульфохлорида в абсолютированном диоксане, которую осуществляют при комнатной температуре в присутствии пиридина или триэтиламина.По1 лученную активированную гликофазу промывают на стеклянном фильтре 350 мл диоксана, сушат и промывают 0,1 М карбонатным буферным раствором с рН 8,5 0,6 r глицин-L-лейцина растворяют в 1 0 мл того же буферного раствора и добавляют туда акти1476377 тивосудорожных препаратов в плазме крови. Формула из об ре тения 0 7 Ч б В 8ремя, мин Составитель Л. Сабурова Техред Л.Олийнык Корректор N. Пожо Редактор М. Петрова Заказ 21 50/45 Подписное Тираж 790 ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 вированную гликофазу, которую выдерживают при комнатной температуре 2 ч, отмывают в стеклянном фильтре и обрабатывают 0,5 М трис-НС1 буферным раствором с рН 0,9. Сорбент 5, с привитым пептидом помещают в 10 мл раствора, содержащего 0,5 г цистеина и 0,1 г папаина и выдерживают 2 ч для удаления пептида с доступных для фермента мест. Сорбент промывают водой, ацетонитрилом и высушивают. Пример 2. 80 мкл крови па" циента смешивают в эппендорфе с 20 мкл цитратного буферного. раствора и центрифугируют 2 мин.при 5000 об/мин. Образовавшийся слой плазмы отбирают шприцем и 25 мкл пробы наносят на колонку для жидкостной хроматографии, после чего 2п элюируют 0,2 M фосфатным буферным раствором в градиенте концентрации . трис-(гидроксиметил)аминометана от 0 до 0,015 М. Продолжительность анализа 10 мин, рН 7,4. 25 На чертеже представлен профиль хроматографического разделения проСпособ определения противосудорожных препаратов в биологических жидкостях, включающий центрифугирова— ние анализируемой жидкости, пропускание полученного супернатанта в потоке элюента через колонку, заполненную сорбентом с диаметром пор 6-10 нм, с гидрофильной внешней поверхностью и внутренней поверхностью, модифицированной гидрофобным пептидом, с последующим детектированием белковых и низкомолекулярных фракций, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве сорбента используют кремнезем с размером частиц 11-15 мкм, содержащий привитый к внутренней поверхности пептид формулы глицин-L-лейцин, а в качестве элюента — водный буферный раствор с рН 7,1-7,4.
