Способ получения зимозана

 

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения зимозана из дрожжей. Цель изобретения - увеличение выхода зимозана и ускорение процесса получения. Водную суспензию дрожжей инкубируют при температуре от 35 до 55°С в течение 1-7 сут. После инкубации суспензию пропускают через колонку с сульфокатионитом, центрифугируют. Полученный осадок обезвоживают спиртом и вакуумной сушкой. Выход зимозана составляет 34% в пересчете на сухие дрожжи. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ.

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4 С 12 P 19/04 всксш

Пй ЛТ!,. : ТсГ

L БАЛИС

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4225992/28-13 (22) 07.04.87 (46) 30.06.89. Бюл. У 24 (71) Научно-производственное гидролиэное объединение Гидролиэпром" и Всесоюзный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов (72) Д.И.Островский, А.Н.Клюквин, И.В.Кручина-Богданов, A.Á.Âîðîíêoâ, С.И.Ржепницкий, М.Л.Суханов, С.В.Малярчук, О.И.Киселев, И.M.Ãoëóáков,А.М.Ищенко и С.В.Андреев (53) 663. 18 (088.8) (5e) Авторское свидетельство СССР

У 138334, кл. С 12 P 19/04, 1960.

Авторское свидетельство СССР

У 141990, кл. С 12 P 19/04, 1960.

Изобретение относится к биот хнологии, а именно к способу получения зимоэана, который находит применение в иммунологии и медицине для определения уровня пропердина в сыворотке крови.

Цель изобретения — увеличение выхода и повышение активности зимоэана.

Способ осуществляют следующим образом.

Дрожжи в виде водной суспензии о инкубируют при 35-55 С в течение

1-7 сут. В этих условиях происходит процесс лиэиса клеток с помощью их ферментативных систем с накоплением в осадке эимоэана. При времени инкубации, большем или меньшем указанного интервала, и температуре ниже

2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗИМОЗАНА (57) Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения эимоэана из дрожжей, Цель изобретения — увеличение выхода эимоэана и ускорение процесса получения.

Водную суспенэию дрожжей инкубируют о при температуре от 35 до 55 С в течение 1-7 сут. После инкубации суспенэию пропускают через колонку с сульфокатионитом, центрифугируют. Полученный осадок обеэвоживают спиртом и вакуумной сушкой. Выход зимозана составляет 34Х в пересчете на сухие дрожжи. 2 табл.

35 С выход зимозана снижается. /величение температуры инкубации приводит к дезактивации ферментативных систем, и зимоэан не образуется.

Длительность процесса более 7 сут нецелесообразна, так как не приводит к дальнейшему увеличению выхода и активности зимоэана. По окончании инкубации суспензию подкисляют до рН 3 и фильтруют через сульфокатионит. Зависимость выхода эимозана от режима инкубирования представлена в табл.1.

После пропускания через сульфокатионит суспензию центрифугируют, осадок обезвоживают спиртом и вакуумной сушкой.

Для испытания эимозана в качестве иммунологического агента образцы, 1490156

30 л и ц а 1

Выход зимо зана, г/кг пресс.дрожжей

Темперас тура, С

Время инкубиронания, сут

3,5

83

5 полученные по предлагаемому способу, фирмы Сигма (США) и Реахим Г.Олайне (СССР) подвергаются кипячению на водяной бане в течение 1 ч и 6-8кратному центрифугированию при

10000 g н забуференном физиологическом растворе.

Полученный реагент добавляют к сыворотке крови человека до концентрации 2 мг/мл. Смесь инкубируют 1 ч о при 37 С, после чего реагент удаляют центрифугированием 20 мин при 5000 д.

0 степени активации пропердинового комплемента судят по его остаточной активности и путем определения иммунохимическим методом образовавшегося белка С За. Результаты испытаний в сравнении с имеющимися коммерческими препаратами представлены в табл.2.

Пример 1. В промытый и простерилизованный аппарат заливают

250 мл дистиллированной воды, sarpyжают 1 кг свежих прессованных пекаро ских дрожжей, инкубируют при 35 С в течение 7,0 сут при непрерывном перемешивании.

По окончании времени инкубации водную суспенэию подкисляют до рН 3 и пропускают снизу нверх через колонку с катионитом КУ 2х8 в Н -форме

+ (1,9х10,5 см) со скоростью 75 мл/ч.

Нерастворимый эимоэан, прошедший через копонку, отделяют от элюата центрифугированием в течение 10 мин при 10000 об.мин. Препарат промывают

5 pas 96X-ным этиловым спиртом (2л), экстрагируют в экстракторе Соксклета

8 ч абсолютным спиртом, сушат на накуумсушилке.

Иэ 1 кг прессованных дрожжей полУ- 45 чают 83 г зимозана, что составляет

ЗЗ,ЗХ в пересчете на сухие дрожжи.

Т а б

Пример 2. Способ осуществляют согласно примеру 1, но инкубацию ведут при 55 С в течение 1 сут, Выход эимоэана 68 г, что составляет 27,27. в пересчете на сухие дрожжи.

Пример 3. В промытый аппарат заливают 60 мл дистиллированной воды, загружают 250 r прессованных некондиционных пекарских дрожжей, содержащих 65i. дрожжей Candida micoderma о

Э и инкубируют 36 ч при 48 С и непрерывном перемешивании ° Последующую обработку проводят согласно примеру 1.

Получают 21 г эимоэана, что составляет ЗЗЕ в пересчете на сухие дрожжи.

Пример 4. Способ осущестнляют согласно примеру 1, но инкубацию ведут в течение 1,5 сут при 50 С, а в качестве сульфокатионита используют Амберлит ИР-120.

Выход зимоэана 85 г, что состанляет 34Х в пересчете на сухие дрожжи.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет более чем в 10 раз увеличить выход зимозана и более чем в

2 раза сократить время получения.

Активность полученного препарата на

5-1ОЕ выше известных коммерческих препаратов.

Формула изобретения

Способ получения эимозана, предусматривающий лиэис дрожжевых клеток с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода эимозана и ускорения процесса, лиэис дрожжевых клеток осуществляют путем инкубации водной суспенэии дрожжей при температуре 35-55 С в течение

1-7 сут, а выделение целевого продукта проводят фильтрацией суспензии через сульфокатионит.

1490l 56

Прадо;!жение табл. 1

91

3 5

1,5

1,0

24,3

0,5

Т а б л и ц а 2

Количество

С За, 7

Активность абсолютноПрепарат го комплемента, 7

100

31

36 предлагаемому способу 41

Составитель Т.Мелентьева

Техред Л.Олийнык Корректор M ° Ñàìáîðñêàÿ

Редактор M.Ïåòðoâà

Заказ 3651/29 Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035,:! сква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент", r.Óæãoðîä, ул. Гагарина,101

Сыворотка крови

Зимоэан

"Реахим"

Зимозан

"Сигма"

Зимозан по

58