Питательная среда для выделения лактобацилл

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при проведении количественных исследований на лактобациллы объектов окружающей среды. Цель изобретения - повышение селективных свойств среды. Для приготовления среды берут навески (г/л) глюкозы 15-25

триптического перевара казеина 8-15

дрожжевого экстракта 4-6, мясного экстракта 8-15

ацетата натрия 25-40

цитрата аммония 1-3

дигидрофосфата калия 3-6

сульфата магния 0,4-0,6

хлорида марганца 0,1-0,3

сульфата железа 0,004-0,3

твина = 80 0,8-1,5

оксикобаламина 0,0025-0,001

тиамина бромида 0,025-0,075

рибофлавина 0,0005-0,0015

пиридоксина гидрохлорида 0,025-0,075

никотиновой кислоты 0,005-0,015, аскорбиновой кислоты 0,025-0,075, биотина 0,0005-0,0015

пантотената кальция 0,0005-0,0015

трис-солянокислого буфера PH 5,85-5,9 12,1- 48,4, КАРбОНАТА КАдМия 0,008-0,002

жЕлчи 0,008-0,012

фузидиНА НАТРия 0,0001-0,0009

АМфОТЕРициНА В 0,1-0,3 или натриевой соли леворина 0,25-0,46

агар-агара 12-20

вода остальное. При этом витамины, карбонат кадмия и антибиотики вносят в среду стерильно после ее автоклавирования. На среде вырастают преимущественно лактобациллы и в небольшом количестве энтерококки. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

SU 147951

А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4305351/28 13 (22) 14.09,87 (46) 15.05,89. Бюл, У 18 (71) Всесоюзный научно-исследова-. тельский институт антибиотиков (72) М,В,Тюрин и Б,А .Шендеров (53) 576.8 .093 .1(088 .8) (56) Rogosa M., Mitchell J,A,, Wiseman R.F. А Selective Medium

for the Isolation and Enumeration

of oral and fecal Lactobacilli. J. Bacteriol, 1951, 62, 132-133. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЬ!ДЕЛЕНИЯ ЛАКТОБАЦИЛЛ (57) Изобретение относится к медицин ской микробиологии и может быть использовано при проведении качественных исследований на лактобациллы объектов окружающей среды. Цель изобретения — повышение селективных своиств среды, Для приготовления среды берут навески, г/л: глюкоза 15-25; триптический перевар казеина 8-15; дрожжевой экстракт 4-6; мясной экст1

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при проведении количественного учета лактобацилл в объектах окружающей среды.

Цель изобретения - повышение селективных свойств среды.

Использование среды иллюстрируется следующими примерами.

II р и м е р 1, В 0,6 л дистилли рованной воды растворяют 20 r трисоснования и доводят рН раствора конyg 4 С 12 Q 1/04//(С 1 Q 1/04, С 12 R 1:225) рак т 8-1 5; а це та т натрия 25-40; цитрат аммония 1-3 дигидрофосфат калия 3-6; сульфат магния 0,4-0,6 хлорид марганца 0,1-0,3; сульфат железа 0,004-0,3; твин-80 0,8-1,5; оксккобаламин 0,0025-0,001 тиамина бромид 0,025-0,075; рибофлавин 0,00050,0015; пиридоксина гидрохлорид 0,0250,075; никотиновая кислота 0,0050,015; аскорбиновая кислота 0,0250,075; биотин 0,0005-0,0015; пантотенат кальция 0,0005-0,0015; триссолянокислый буфер рН 5,85-5,9 12,148,4; карбонат кадмия 0,008-0,02 ; желчь 0,008-0,012; фузидин натрия

0,0001-0,0009; ;амфотерицин В 0,1-0,3 или на триевая соль лев орина О, 25-0 46;, агар-агара 12-20; вода остальное.

При этом витамины, карбонат кадмия и антибиотики вносят в среду стерильно после ее автоклавирования, На среде вырастают преимущественно лактобациллы и в небольшом количестве энтерококки. 1 з.п.ф-лы. 1 табл, центрированной соляной кислотой плотности 1,18 г/см до 5,9-6 0, Навески ингредиентов, кроме мясного экстракта, витаминов, карбоната кадмия, амфотерицина В, фузидина натрия и агар-агара, тщательно перемешивают в сухой колбе, Затем к полученной смеси .добавляют приготовленный трис-солянокислый буфер и вносят в полученный раствор навеску мясного экстракта.

Полученную смесь тщательно перемешивают. Доводят до рН 5,85-5,9 соляной

1 47951 7

50 кислотой той же плотности, В отдельной колбе 6бъемом 2 л в 0,3 л дистиллированной воды кипячением растворяют 15 r агар-агара. После этого к рас5 плавленному агар-агару добавляют приготовленный ранее раствор ингредиентов и тщательно перемешивают. Доводят общий объем до 0,992 л дистиллированной водой и автоклавируют среду при

l il2 С в течение 30 мин. После автоклавирования среда должна быть несколько темнее цвета пива.

К неостывшей (60 С) среде асептически добавляют, г: оксикобаламин

0,0005, тиамина бромид 0,05, пиридоксина гидрохлорид 0,05, никотиновую кислоту 0,01, аскорбиновую кислоту

0,05, рибофлавин 0,0001, биотин

0,0001, пантотенат кальция 0,001 (ви- 2р тамины используют в виде растворов в

0,01 н, НС1 при их концентрации .,0,1 г/мл каждого - в количестве 10мл/л среды), растворы амфотерицина В в L стерильной дистиллированной воде 25 мл концентрацией 200 мг/мл и фузщт ° дина натрия в стерильной дистиллированной воде 1 мл концентрацией

0,5 мг/мл, карбонат кадмия 10 мг. Навеску карбоната кадмия растворяют в 30

0,2 н, соляной кислоте и доводят рН до б,О едким натром н, концентрации, затем общий объем раствора доводят дистиллированной водой до концентрации карбоната кадмия 10 мг/мл, стерилизуют фильтрованием, Полученную среду тщательно перемешивают и разливают по чашкам Петри таким образом, чтобы толщина слоя среды была не менее 0,5 см, 40

Полученная селективная среда имеет следующий состав, г/л:

Глюкоза 20,0

Триптический перевар казеина 10,0 45

Дрожжевой экстракт 5,0

Мясной экстракт 10,0

Ацетат натрия 30,0

Цитрат аммония 2,0

Диг идрофо сфа т к алия 3,5

Сульфат магния 0 5

Хлорид марганца 0,2

Сульфат железа 0,015

Твин-80 1,0

Оксикобаламин 0 0005

Тиамина бромид 0105

Рибофлавин О, 001

Пиридоксина гидрохлорид 0 05

Ник о тино в а я к ислота 0,01

Аскорбиновая кислотаа 0,05

Био тин 0,001

Пантотенат кальция 0,001

Трис-соляно-кислый буфер 20,0

Карбонат кадмия 0,1

Желчь 091

Фузидин натрия 0 0005

Амфотерицин В 0 2

Arap-агар 15,0

Дистиллированная вода Остальное, На полученную среду производят высевы взвесей 24-48-часовых агаровых культур референс-штаммой лактобацилл в цистеин-рингеровском растворе при посевной дозе 1000 клеток в 0,025 мл раствора, музейных штаммов микроорганизмов других видов и некоторых изолятов из испражнений человека при посевной дозе 10 клеток в 0,025 мл

В цистеин"рингеровского раствора, Поо севы инкубируют аэробно при 37 С в течение 48 ч, . Селективная среда обеспечивает рост всех использованных штаммов лактобацилл, в то же время рост: всех других микроорганизмов за исключением энтерококков не наблюдается, Из испражнений 23 здоровых лиц вы-. делено 205 штаммов лактобацилл различных видов и 50 штаммов энтерококков.

II р и м е р 2. Готовят среду в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующем количестве, г/л:

Глюкоза 15,0

Триптический перевар казеина 8,0

Дрожжевой экс так т 4 0

Мясной экстракт 8,0

Ацетат натрия 2 5, О

11итра т аммония 1, О

Дигидрофо сфа т калия 3, О

Сульфат магния О, 4 Хлорид марганца О, 1

Сульфат железа О, 004

Твин -8 О О, 8

Оксикоб аламин О, 000 2 5

Тиамина б ромид О, 025

Риб офлав ин О, 0005

Пиридоксина гидро14795! 7

12,!

О, 008

О, 008

0,0001 хлорид 0,025

Никотиновая кислота 0,005

Аскорбиновая кисло та 01025

Био тин 0,0005

Пантотенат кальция 0,0005

Трис-соляно-кислый буфер

Карбонат кадмия

Желчь

Фузидин натрия

Натриевая соль ленорина 0,25

Агар-агар 12,0

Дистиллированная вода Остальное

На полученную среду производят высевы различных штаммов лактобацилл, псевдомонад, эшерихий, клебсиелл, бацилл, энтерококков, дрожжевых грибов и др, После 48 ч аэробного инкубирования наблюдают рост всех использованных штаммов лактобацилл (кроме

Lactobacillus fermentum 53163) и энтерококков. Рост других микроорганизмов отсутствует.

Пример 3. Аналогично примеру 1 готовят селективную среду следующего состава, г/л:

Глюкоза 25,0

Триптический перевар казеина !5,0

Дрожжевой экстракт 6,0

Мясной экстракт 15,0

Ацетат натрия 40,0

Цитрат аммония 3,0

Дигидрофосфат калия 6,0

Сульфат магния О, 6

Хлорид марганца 0 3

Сульфат железа 0,03

Твин-80 1,5

Оксикобаламин 0, 00!

Тиамина бромид 0,075

Рибофлавин 0,0015

Пиридоксина хлоРид 0,075

Никотиновая кислота 0,015

Аскорбиновая кислота О, 075

Био тин 0 0015

Пантотенат кальция 0,0015

Трис-соляно-кислый буфер 48,4

Карбонат кадмия 0,02

Желчь 0,012

Фуэидин натрия

Амфотерицин В

Агар-агар

Дистиллированная вода 0с тальное

На полученную селективную среду производят высевы штаммов, перечисленныу в примере 2. После 48 ч аэробо ного инкубирования при 37 С наблюдают рост IBTGMMoB лактобацилл (кроме

L.helveticus 15009) и энтерококков, Рост других микроорганизмов отсутствует (см. таблицу) .

Как видно иэ представленных в таблице данных, на известных средах во 2-6 разведениях материала вырастают бациллы, кандида, некоторые другие микроорганизмы. Вплоть до 7-9 разведения наблюдается рост. энтерококков ° На предлагаемой среде растут лишь лактобациллы и энтерококки, причем рост первых на два порядка в пятом и седьмом разведениях материала

25 превосходит таковой на известной среде. Рост энтерококков на предлагаемой среде хуже, чем на первых двух средах, Колонии лактобацилл, снятые с известных сред, при рассеве выявЗо ляют содержание кишечной палочки, пептострептококков, кандида и других микроорганизмов . Колонии лактобацилл, снятые с предлагаемой селективной среды, содержат монокультуру и не

З5 требуют дальнейшей очистки путем рассевов, 0,0009

0,3

20,0

Формула изоб ре тения

4р 1. Питательная среда для выделения лактобацилл, содержащая глюкозу

У триптический перевар казеина, дрожжевой экстракт, ацетат натрия, цитрат аммония, дигидрофосфа т калия, суль45 фат магния, соль марганца (I I) сульфат железа (II), твин-80, агар-агар и дистиллированную воду, о т л ич а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения селективных свойств среБО ды, она дополнительно содержит мясной экс трак т, оксикобаламин, тиамина бромид, рибофлавин, пиридоксина гидрохлорид, никотиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, биотин, пантоте55 нат кальция, О,!-0,4 M трис-солянокислый буфер с рН 5,85-5,9, карбонат кадмия, антибиотик,.сухую медицинскую желчь, фузидин натрия, в качестве сола марганца она содержит хлорид

1479517

Никотиновая КНс лота О, 005-0, 015

Аскорбиновая кислота

Биотин

Пантотенат

0,025-0, 075

О, 0005-0, 0015

0,0005-0,0015

Количество колоний

Среда разведения

Лактобациллы

1) )) 10 10 10 10 10

Сплош- 189 20 1 .ной

67 3

Сплош- .Единичные ко-. ной лонии бацилл, рост кандида и др.

Сплошной

Извес тная рост рос ч — Сплош- 100 3 ной

Колонии кандида, плес. невых грибов и др. микроорганизмов

Сплошной

Известная рост рост

Предлагаемая

3 О

2 Сплошной

322

Сплошной рост рост

П р и м е ч а н и е: Числа показывают количество выросших колоний, отсутствие роста, Составитель Г,Смирнова

Редактор М.Недолуженко Техред Л.Сердюкова КарректорС.Черни

Заказ 2505/26 Тираж 501 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 марганца при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Глюкоза 15,0-25,0

Триптический . перевар казенка 8,0-15 0

Дрожжевой экстракт 4,0-6,0

Мясной экстракт 8,0-15,0

Ацетат натрия 25,0-40,0

Цитрат аммония I 0-3,0

Дигидрофосфат калия 3,0-6 О

Сульфат магния 0,4-0,6

Хлорид марган- ца (II) 0,1-0,3

Сульфат железа (II) 0,004-0,3

Твин-80 0,8-1,5

Оксикобаламин 0,0025-0,001

Тиамина бромид 0,025-0,075

Рибофлавин 0,0005-0 0015

Пиридоксина гидрохлорид 0,025-0,075

1 кальция

0 1-0,4 М

10 трис-соляно- кислый буфер с рН 5,85-5 9 12,1-48,4

Карбонат кадмия О, 008-0, 02

15 Сухая медицинская желчь 0,008-0,012

Фузидин натрия О, 0001-0, 0009

Антибиотик О, 1-0,46

Агар-агар 12, 0-20, О

20 Дистиллированная вода Остальное, - 2, Питательная среда по п,i, о т— л и ч а ю щ а я с я тем, что в качестве антибиотика она содержит амфо25 терицин В в количестве 0,1-0,3 г/л среды или натриевую соль леворина в количестве 0,25-0,46 г/л среды.

Знтерококки . Другие микроорганизмы

1 ) 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10