Штамм бактерий bacillus suвтilis как тест-культура для испытания алюминиевых сплавов на биостойкость

 

Изобретение касается биотехнологии, а именно нового штамма бактерий, который может быть использован для определения бактериальной стойкости алюминиевых сплавов. Целью изобретения является новый штамм бактерий BAC SUBTILIS ВКМ В=1647D (27 Б), обладающий более высокой коррозионной активностью. Штамм выделен из продуктов коррозии алюминевого сплава Д=16Т и способен в течение 60 сут при 22-24°С осуществлять на 50% деструкцию материала. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ÄÄSUÄÄ 1479508

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АатОРСНОм свидКТКЛьСтву

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21 4314902/28 — 13 (22 ) 08. 10. 87 (46) 15,05.89. Бюл. Ф 18 (72) В.Г.Борисова, H.Ë.Íåì÷åíêî и А.Н. Заблоцкий (53) 663. 15(088.8) (56) Паньков И.M. и др. Влияние микроорганизмов, выделенных из мест обрастаний водорослевого культиватора, на коррозию металлов. Изв.Сиб.отд.

АН СССР, 1973, N 5, 1, с. 80-86.

Лучина M.À. Участие железомарганцевых микроорганизмов в коррозии стальных конструкций гидроэлектро- станций. — В кн.: Обрастание и биокоррозия в водной среде. M.: Наука, 1981, с. 142-147.

Изобретение относится к биотехнологии и касается нового штамма бактерий, который может быть использован для определения бактериальной стойкости металлических материалов, а именно алюминиевых сплавов.

Цель изобретения — новый штамм бактерий, обладающий более высокой коррозионной активностью.

Штамм выделен из продуктов коррозии алюминиевого сплава Д-16Т, отобранных с силового элемента конструкции техники, эксплуатировавшейся в тропическом районе.

Полученный штамм В.subtilis ВКМВ1647Д (27Б) имеет следующие характеристики.

Морфолого-культуральные признаки.

После 24 ч инкубации на мясо-пептонном arape (МПА) при 30 С вегетатив(50 4 С 12 N 1/20, С 12 О 1/18//

//(С 12 N 1/20, С 12 R 1:125) (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ BAC ILL 1Б S UBTIT,ТБ КАК ТЕСТ-КУЛЬТУРА ДЛЯ ИСПЫТАНИЯ

АЛЮМИНИЕВЫХ СПЛАВОВ НА БИОСТОЙКОСТЬ (57) Изобретение касается биотехнологии, а именно нового штамма бактерий, который может быть использован для определения бактериальной стойкости алюминиевых сплавов. Целью изобретения является новый штамм бактерий Вас. subtilis BIQI В-1647D (27 Б), обладающий более высокой коррозионной активностью. Штамм выделен из продуктов коррозии алюминиевого сплава Д-16Т и способен в течение 60 сут при 22-24 С осуществлять . на 50Х деструкцию материала. 1 табл. Я ные клетки имеют форму прямых ровных палочек с тупыми концами, на соединенных в цепи. Размеры 0,7 — 0,8 х 2—

3 rm . Клетки грамположительные, под- 3 вижные. ЯР

В клетках, выращенных на МПА+27. Ql глюко з ы, в нутрикле точные гра нулы, не- (. окрашиваемые фуксином, не обнаружены. QQ

Капсулы у клеток на обнаружены.

Образуют эллипсовидные споры, по одной в клетке, занимающие центрально — терминальное положение (среда

МПА, 30 С, возраст культуры 7 сут) .

Спорангий не раздут. Размеры спор

0,8 — 0,9 х 2,1 — 2,3 мкм.

Ъ

При нагревании до 80 С в течение

10 мин споры сохраняют способность к прорастанию.

На МГА (48 ч. инкубации при 30 С) культура образует плоские колонии, 14 79508 кругль1е ипи неир 1BHпьной формы, грязно-белого цвета, непрозрачные. Край колоний нечеткий, поверхность матовая, структура в центре зернистая, 5 консистенция мягкая. Диаметр колоний

8 — 12 мм. Обратная сторона колоний также грязно-белого цвета. Флуоресценция не обнаружена, пигментов в среду не выделяют. 1р

На картофельном агаре через 48 ч инкубации при .30 С поверхность колоний становится складчатой, коричневатого цвета °

При росте в мясо-пептонном бульо не МПБ (30 С, инкубация 48 ч) на поверхности образуют толстую складчатую пленку грязно-белого цвета, вызывают помутнение среды и изменение рН от 7,0 до 6,0. Выпадения осадка 2р и роста по стенке пробирки не наблюдалось.

Физиолого-биохимические признаки.

Гетеротрофы, аэробы, Температурный оптимум 30 — 35 С, минимум 5 С, мак- 2S симум 55 С. Активно растут при рН

5,5 — 8,5 (оптимум 7,0).

В MIIH с 7Х-ной NaC1 вызывают помутнение раствора, Усваивают глюкозу и ксилоэу с образованием кислоты, а 3р газ не образуют. Маннит и арабиноэу усваивают очень слабо. Активно используют цитрат, в меньшей степени пропинат.

Нитраты восстанавливают до нитритов. Каталаэо-положительны. Реакция

Вогес-Проскауэра положительная. На среде с триптофаном индол не образуют.

Крахмал и каэеин гидролизуют. Желатину разжижают (мекковидное разжижение). Тирозин не разлагают. Уреазная активность выражена слабо. Фенилаланиндезаминазу не образуют. Лецитиназной активностью не обладают.

Вызывают коррозию изделия из алю- 45 миниевых сплавов при непосредственном контакте с ними. Наибольшая коррозионная активность проявляется при культивировании на среде БСА (1 ч

МПА + 1 ч СА) при 22 - 24О С.

Антагонистические свойства по отношению к другим культурам, выделенным в тех же условиях, отсутствуют.

Хранение штамма осуществляют в лиофильно-высушенном состоянии в стерильных ампулах. Непродолжительное время (до 4 мес. без пересева) может храниться в холодильнике в пробирках с агариэованной средой.

Культура не является патогенной.

Пример 1. Выделение штамма.

0,1 г измельченных в ступке продуктов коррозии алюминиевого сплава, содержащих споры штамма В. s ibt il is

ВКМВ-1647Д, переносят с соблюдением стерильности в чашку Петри с застывшим MIIA и тщательно растирают шпателем. Затем этим же шпателем протирают поверхность MIIA последовательно во

2-й, 3-й и 4-й чашках ° Чашки закрывают крышками и инкубируют в термостате при 30 С в течение 2 — 3 сут.

Обычно в первых двух чашках после инкубации наблюдают сплошной рост микроорганизмов, тогда йак в последующих — изолированные колонии, Для получения чистой культуры используют метод Коха. Часть бактериальной массы из изолированной колонии переносят микробиологической петлей на поверхность MIIA в чашке Петри, распределяют шпателем по поверхности

МПА во 2-й, 3-й и 4-й чашках, как это описано выше, и инкубируют при

30 С в течение 2 — 3 сут. Пересев повторяют 1-2 раза, Полученную культуру проверяют на чистоту путем визуальной оценки, микроскопирования и посевом на сусло-агар (CA) с последующей инкубацией при 30 С в течение 10-12 сут. (для выявления микологических загрязнений), Чистую культуру переносят в пробирку со скошенной средой МПА и инкубируют 23 сут при 30 С, Полученную культуру используют для заражения питательной среды при оценке бактериальной стойкости алюминиевых сплавов.

Пример 2. Оценка бактериальной стойкости алюминиевых сплавов.

Испытания проводят контактным методом, сущность которого состоит в выдерживании образцов металлов на поверхности агаризованной среды, инокулированной тест-культурой.

Расплавленную среду БСА разливают в чашки Петри и дают застыть.

Чашки со средой слегка подсушивают для удаления конденсационной воды.

На поверхность среды в каждую чашку помещают небольшое количество (1 микробиологическую петлю бактериальной массы В. subtilis BKMB-1647Д за 23-суточной культуры и растирают шпа. телем. Культуру инкубируют при 22—

24 С. Через 2 — 3 сут, когда в чаш14 79508

15

20 тест-культуры повышает достоверность оценки бактериальной стойкости алюминиевых сплавов.

Формула изобретения

Штамм бактерий Bacillus subtilis

BKNB-1647D как тест-культура для испытания алюминиевых сплавов на биостойкость.

Штамм

В.subtilis

BKMB-174 7D

ВКМВ-4 28

42,2 60,0 46,7 44,4 66,7 48,9 51,1

3332676724431,1200244

Составитель 3. Фалунина

Редактор М. Недолуженко Техред M.Ходанич Корректор И. Муска

Заказ 2504/25 Тираж 501 Подпис но е

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г.ужгород, ул. Гагарина,101 ках наблюдается сплошной рост бактерий, на их поверхность кладут образцы иэ алюминиевого сплава. размером

130х15х2 мм. Образцы предварительно обрабатывают следующим образом: двухкратно промывают в ацетоне, высушивают н» воздухе, затем протирают ватным тампоном, смоченным этиловым спиртом, и фламбируют (несколько раз обжигают над пламенем горелки). Количество образцов должно быть не менее 5 ч.

Контролем служат такие же образцы, помещенные на поверхность стерильной среды БСА.

Чашки помещают в эксикатор, в котором поддерживается влажность 96983 за счет налитой на дно эксикатора стерильной дистиллированной воды для предотвращения высыхания среды.

Продолжительность экспозиции опыт ных и контрольных образцов 60 сут, при 22 — 24 С. По окончании испытаний образцы извлекают из чашек Петри и дезинфицируют в 57-ном растворе фенола или формальдегида в течение

3 ч. Затем образцы с помощью скальпеля очищают от продуктов коррозии, промывают в этиловом спирте, высушивают и проводят исследование их поверхности на профилографе.

Бактериостойкость материала обратно пропорциональна площади пораженной поверхности образцов °

В таблице представлены в сравнении результаты испытаний на бактериостойкость образцов из алюминиевого сплава Д-16Т с использованием в качестве тест-культур штаммов В.subtilis ВКМВ1647Д и В.subtilis BKMB-428.

Испытания показали, что при использовании в качестве тест-культуры предлагаемого штамма площадь пораженной поверхности образцов за тот же промежуток времени возрастала в 2 раза и более, а первые очаги коррозии появлялись на 7 — 10 сут раньше, что подтверждает его большую активность.

Контрольные образцы коррозии не подвергались.

Использование активного штамма

В;subtilis ВКМВ-164 7D в качестве