Способ получения растений-регенерантов озимой ржи

 

Изобретение относится к биотехнологии ,в частности, к селекции зерновых злаковых культур, и может быть использовано для ускоренного создания новых сортов. Целью изобретения является увеличение количества фертильных растений - регенератов. Способ состоит в том, что культивирование осуществляется в два этапа: получают каллус на каллусогенной среде и регенеранты на органогенной среде. Используется среда Мурасиге-Скуга, причем в органогенной среде содержание сахарозы снижено до 0,6% и добавлено 0,05 мг/л ИУК и 1,5-2 мг/л кинетина, 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

сооз сонетсних социАлистичесник

РЕСПУБЛИН (51) 4 С 1- М 5 00

ГОсудАРстВенный нОмитет по изовРетениям и отнРытиям

ПРИ ГННТ СССР (21) 4271008/30-13 (22) 11.05.87 (46) 23.0?.89. Бюл. Р 27 (71).Научно-исследовательский институт сельского хозяйства Северо-Ьосто,ка им. Н.В,Рудницкого (72) Е.А.Родин и Т.В.Худякова (53) 578.085.23 (088.8) (56) Суриков И.N., Киссель Н.И.

Межродовая гибридизация ячменя и nmeницы. — Генетика, 1986 т. XXII Р 1, с. 13.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к селекции зерновых злаковых культур, и может быть использовано для ускоренного создания новых.

Целью изобретения является увеличение количества фертильных растений и предохранение эксплантата от повреждающего действия стерилизукпцих агентов.

Способ состоит в том, что включает в себя стерилизацию в этанэле, разрезание соцветий на эксплантаты, культивирование эксплантатов на каллусогенной среде и регенерацию каллусов на органогенной среде, при этом в качестве органогенной среды исполь

2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОБ ОЗИ7ОЙ РЖИ .(5,) Изобретение относитея к биотехнологии. в частности к селекции зерновых злакокультур, и может GbITb использовано для ускоренного создания новых сортов. Целью изобретения является увеличение количества фертильных растений-регенерантов. Способ состоит в там, что культивирование осуществляется в два этапа: получают каллус i= à каллусогенной среде и регенеранты на органогенной среде.

Используется среда Мурасиге-Скуга, причем в органогенной среде содержание сахарозы снижено до 0,6Х и добавлено 0 05 мг/л ИУК и 1,5-2 мг/л кинетина. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

syroT срецу Яурасиге-и Скуга, модифицированную снижением сахарозы до 0,6Ж и добавлением 7,5-2 мг/л кинетина и

0,5 мг/л индолил-3-уксусной кислоты (йУК).

Причем, с целью предохранения тканей соцветий от повреждающего действия стерилизующих агентов, стерилизуют не молодое соцветие, а побег,,заключакяций в себе, с последующим извлечением молодого соцветия в асептических условиях.

Стерилизация молодых соцветий в

70%-ном этаноле не обеспечивает полного обеззараживания и зачастую при;водит к отмиранию поврежденных спир том тканей.

72 ловиях.

Таблица 1

0,05

0,4

О, ()5

0 5

24,6

32

0 05

1,5

0,6

30,3

0,6 2,,0

0,7 2,0

0,05

0 05

Чу-Вонга Р 6 (известная

3 14953

Пример 1. У отобранных растений озимой ржи (сорт Дымка) отрезают побеги, содержащие молодые соцветия длиной 2,5-3,5 см, и проводят их стерилизацию. Побеги моют мыльной . водой, помещают для обеззараживания на 2 ч в О, 1%-ный раствор КМпО и затем на 5 мин в 70%-ный этанол. Молодые соцветия извлекают из побегов и делят на эксплантаты в стерильных условиях (в ламинар-боксе). Эксплан таты соцветий, помещенные на каллусогенную среду,. культивируют в темноте при 25-26 С в течение 30-40 дней. 15

Полученную каллусогенную ткань переносят на органогенную среду Мурасиге и Скуга,.модифицированную снижением сахарозы до 0,6%., добавлением

1,5 мг/л кинетина и 0,05 мг/л индо- 20 лил-3-уксусной кислоты для регенерации растений. Через 15-20 дней йа4инается появление растений.

Аналогично выполняют остальные примеры, различие состоит в концент- 25 рациях сахарозы, кинетике и ИУК.

Результаты примеров, подтверждающих выбор оптимальной среды для получения регенерантов ржи, сведены в табл.1 и 2. 30

Как видно из табл.1 и 2, фертильные растения-регенеранты получены на среде Мурасиге и Скуга, модифицированной снижением сахарозы до 0,6%, добавлением 1,5-2 мг/л кинетина и

0,05 мг/л индолил-3-уксусной кислоты. На контрольной среде Чу-Вонга растения не образовались.

Использование предлагаемого способа регенерации зерновых злаковых 40 культур in vitro обеспечивает, по сравнению с прототипом, получение большого количества фертильных растений регенерантов озимой ржи (выход регенерантов из каллусов составляет

24,6-30,3%), снижение затрат за счет уменьшения количества сахарозы на приготовление питательных сред, стерелизацию побега, заключающего в себе соцветие, исключает отмирание тканей молодого соцветия, что увеличивает выход каллусной ткани из эксплантатов.

Формула и з о б р е т е н и я

1. Способ получения растений-регенерантов озимой ржи, включающий культивирование стерилизованных в этаноле эксплантатов, полученных иэ разрезанных соцветий на каллусогенной среде Мурасиге и Скуга, регенерацию иэ каллусов фертильных растений на Ьрганогенной среде Мурасиге и Скуга, отличающийся тем, что, с целью увеличения количества фертильных растений-регенерантов, в органогенной среде снижают сахараэу до 0,6% и вносят в нее 1,5-2 мг/л кинетина и 0 05 мг/л индолил-3-уксусной кислоты.

2. Способ по п.1, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью предохранения эксплантата от повреждающего действия стерилизующих агентов, стерилизуют побег, заключающий в себе молодое соцветие, с последующим извлечением его в асептических ус1495372

Таблица 2

Среда Мурасиге и Скуга

Высажено Получено растений каллусов озимой.Сахароза, Кинетин„ ИУК, мг/л

7. мг/л

О7 о лит.

0,6

1,4

0 05

0,6

2,1 е

0,05

0,049

0,049

0,051

0,6

1,5

0,6

2,0

2!

0,6

1,5

0,6

2,0

0 05

Составитель В.Демкин

Техред Я.Дидык

Корректор М.Шароши

Редактор Н.Гунько

Заказ 4216/25 Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного .комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101