Способ диагностики реконвалесцентного бактерионосительства при дизентерии

 

Изобретение относится к медицине , в частности, к инфекционным болезням. Целью изобретения является ранняя диагностика и повышение точности способа. Для этого в период разгара болезни определяют содержание лизоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки и антилизоцимную активность шигелл, выделенных у больного по методикам О.В. Бухарина. Результаты содержания лизоцимы выражают в мкг/г белка, а количественную антилизоцимную активность оценивают по максимальной концентрации лизоцима в среде, инактивированного культурой шигелл, и выражают в мкг. При значении первого показателя 4,96-7,94 мкг/г белка и второго 6,0-13,0 мкг диагностируют реконвалесцентное бактерионосительство. Использование способа позволяет с высокой точностью (91,6%) диагностировать реконвалесцентное бактерионосительство на ранних этапах развития заболевания. 2 табл.

СО103 СОВЕТСКИХ.

СО1.1ИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1500936 (51)4 С О1 И 33/48

6ЖИЮ36=:.3

ilA"EЙ7"" " - : 11Up

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ ление антилизоцимной активности выделенных шигелл.

Определение лизоцпма в биоптатах слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки, полученного с помощьв прибора для ректальной биопсии, производят по методике О.В. Бухарина.

Полученный биоптат помещают в гомогенизатор Потеря, в который добавляют 1,5-2 мл холодного физиологического раствора. Гомогенизацив производят на холоде. Гомогенат помещают в холодильник на 12-15 ч, после чего центрифугируют прп 6000 об/мин в течение 20 мин. Суперватапт собирают в

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4226422/28-14 (22) 08.04.87 (46) 15. 08. 89. Бвл. ¹ 30 (71) Оренбургский государственный медицинский институт (72) В. Ф. Прусс, В. Г. Герасимов, С. Д. Борисов, О. Л. Морщиков и О. В. Бухарин (53) 616.07(088.8) (56) Михайлов С. П. Антилизоцимная активность возбудителя и,ее значение в формировании бактерионосительства при сальмонеллезе. В кн. I съезд эпидемиологов, инфекционистов и гигиенистов Туркменистана. Тезисы докладов.

Ашхабад, 1986, с. 99. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РЕКОНВАЛЕСЦЕНТНОГО БАКТЕРИОНОСИТЕПЬСТВА ПРИ

ДИЗЕНТЕРИИ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к инфекционным болезням. Целью изобретения является ранИзобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической практике для прогнозирования реконвалесцентного бактерионосительства при дизентерии.

Целью изобретения является ранняя диагностика и повышение точности способа.

Способ осуществляется следувщим образом.

В период разгара болезни у больных обеих групп определяют содержание лизоцима в биоптатах слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки. Параллельно проводят опреденяя диагностика и повышение точности способа. Для этого в период разгара болезни определявт содержание лизоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки и антилизоцимнув активность шигелл, выделенных у больного по методикам

О. В. Бухарина ° Результаты содержания лизоцимы выражавт в мкг/г белка, а количественную антилизоцимную активность оценивавт по максимальной концентрации лизоцима в среде, инактивированного культурой шигелл, и выражают в мкг. При значении первого показателя 4,96 — 7,94 мкг/г белка и второго 6,0 — 13,0 мкг диагностируют реконвалесцентное бактерионосительство. Использование способа позволяет с высокой точностью (91,6Х) диагностировать реконвалесцентное бактерионосительство на ра|ших этапах развития заболевания. 1 табл.

3 150093 пробирку и ставят на холод на 12

15 ч. На 0,1 мл взвеси Micr ococcus

lysodeicticus, .приготовленного заранее на трисбеферном растворе (М-0,2; рН вЂ” 6,2), доведенном до оптической плотности 0,400 (ФЭК-И; кювета 9 2; .зеленый светофильтр). В контроле вместо исследуемого гомогента используют физиологический раствор. Через 30 мин Ip о инкубации в термостате при 37 С замеряют оптическую плотность контрольных и.опытных проб. Расчет производят по калибровочной таблице и выражают в мкг/мл. Одновременно определяют со- 15 держание белка по Лоури. Результаты выражают в мкг/1 r белка.

Определение антилизоцимной активности возбудителя проводится также по методике О.В. Бухарина. Суточную 20 агаровую культуру шигелл, выделенную у больного, иммледуют на 1,5Х-ном мясопептонпом агаре, содержащем лизоцим в концентрациях от 3 мкг/мл до

15 мкг/мл. Чашки со средой подсушива- 25 ют 10-15 мин в стерильном боксе, стандартной петлей (p — 3 мм) наносят культуру исследуемых шигелл и инкубируют 24 ч при 37 С. Выросшие микроколонии шигелл в течение 30 мин убивают парами хлороформа, после чего заливают вторым слоем 0,77.-ного питательного агара (3 мл), содержащего

0,1 мл одномиллиардной взвеси индика.торной на лизоцим культуры, и ипкубируют 24 ч в термостате нри 37 С.

Результаты учитываются по наличию роста Micxococcus lysodeictius вокруг культуры, инактивировавшей определенную концентрацию лизоцима, внесенного 40 в питат чьную среду.

Количественная оценка антилизоцимной ак ивности проводится по максимальной концентрации лизоцима в среде, инактированного данной культурой шигелл, и выражается в мк

Изучение данных TIo антилизоцимной активности шйгелл и лизоцима биоптатов слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки средствами теории вероятности, квантовой теории стационарных состояний и динамической теории регулирования позволило разработать модель связанной системы лизоцим хозяина — антилизоцитная актив- 5 ность возбудителя и предложить способ прогнозирования реконвалесцентного бактерионосительства при дизентерии но допустимым интервалам значений б 4 антилизоцимной активности возбудителя и лизоцима биоптатов слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки, В таблице представлены допустимые интервалы значений антилизационной активности возбудителя и содержание лизрцима дистального отдела толстой кишки, при которых прогнозируется реконвалесцентное бактерионосительства.

Интервалыы системы лизацима антилизоцима

Интервалы допустимых значений антилизоцимной активности шигелл и концентрации лизоцима в биоптатах слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки

Концентрация лизоцима больного, мкг/! г

Антилизоцимная активность воз-будителя, мкг

5,08 + 0,12

5,72 + О, 12

6,15 + 0,56

12,5 + 0,5

11,5 + 0,5

10,5 + 0,5

9,5+ 0,5

8,5 0 5

7,5 + 0,5

6,5 + 0,5

+ 0,81

6,65

0,72

6,75

7,50 + 0,12

/,66 + 0,28

Этими группами значений исчерпываются возможные области изменения антилизоцимной активности шигелл и ли." зоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки, при которых формируется реконвалесцентное бактерионосительство.

Если анализационная активность возбудителя и содержание лизоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки соответствует указанным интервалам, то прогнозируется реконвалесцентное бактерионосительство.

Пример 1. У больного Е., 50 лет, выделена из кала Sh. Nevcastle. Антилизоцимная активность возбудителя 10 мкг/мл. Содержание лизоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки

6.,!2 мкг/1 r.

Из приведенного примера. видно, что полученные значения лизоцима и анти00936

15

30

45

5 15 лизоцимной активности возбудителя входят в интервалы допустимых изменений лизоцима и антилиэоцимной активности, характеризующие формирование реконвалосцентного бактерионосительства. Данный прогноз подтвержден неоднократным выделением возбудителя при бактериологическом обследовании больного в период реконвалесценции.

Пример 2. У больной С., 20 лет, вьделена из кала Sh. Newcastle.

Антилизоцимная активность возбудителя

4 мкг/мл. Содержание лиэоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки 8,75 мкг/1 г. Из приведенного примера видно, что полученные значения антилизоцимной активности возбудителя и содержание лиэоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки не входят в указанные интервалы изменений антилиэоцимной активности возбудителя и лиэоцима биптатов, и, следовательно, прогнозируется выздоровление. При бактериологичес1 ком обследовании больного в период реконвалесценции возбудитель не выделен.

Пример 3. У больной Я., 23 лет, выделена из кала Sh. Flexneri.

Антилизоцимная активность возбудителя 8 мкг/мл. Содержание лиэоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки 7,01 мкг/1 г

Иэ приведенного примера видно, что полученные значения актилизоцимной активности возбудителя и содержание лизоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки входят в интервалы допустимых изменений лизоцима и антилизоцимной активности, характеризующие формирование реконвалесцентного бактерионосительства. Данный прогноз подтвержден неоднократным вьделением возбудителя при бактериологическом обследовании больного в период реконвалесценции, П р и и е р 4. У больной Р., 21 года, из кала выделена Sh. Flexneri 2-2а. Антилиэопимная активность

13 мкг/мп. Содержание лиэоцима в биоптате 4,82 мкг/г.

Из приведенного примера видно, что полученные значения антнлиэоцимной активности и лиэоцим» в биоптате слизистой дистального отдела толстой кишки не входят в укаэанные интервалы изменений антилиэоцимной активности возбудителя и лиэоцима биптатов, следовательно, прогнозируется выэдоров5 ление. Данный прогноз подтвержден . трехкратными отрицательными результатами бактериологического обследования через 3, 7, !2 дней после клинического выздоровления.

Пример 5. У больной И., 48 лет, выделена иэ кала Sh. Flexneт1 Антилизоцимная активность возбудителя 9 мкг/мп. Содержание лизоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки

7,13 мкг/1 r.

Из приведенного примера видно, что полученные значения антилизоцимной активности возбудителя и содержа20. ние лизоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки входят в интервалы допустимых изменений лизоцима и антилизоцимной активности, характеризующие Аормирование реконвалентного бактерионосительства. Данный прогноз подтвержден неоднократным вьделением возбудителя при бактериологическом обследовании больного в период реконвалесценции.

Пример 6. У больного К., 18 лет, из кала выделена Sh. Flexneri 1-1в, антилизоцимная активность возбудителя 13 мкг/мл. Содержание лизоцима в биоптате слизистой дистального отдела толстой кишки

4, 96 мкг/г.

Иэ приведенного примера видно, что полученные значения антилизоцимной активности и лиэоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки входят в указанные интервалы изменений антилизоцимной активности возбудителя,и лизоцима биоптатов, характеризуюшие Аормирование реконвалесцентного бактерионосительства. Данный прогноз подтвержден неоднократным выделением возбудителя при бактериологическом обследовании больного в периоде ре50 конвалесценции (через 6, 12 и 15 дн. после клинического выздоровления).

Пример 7. УбольногоВ., 32 года иэ кала выделена Sh. Flexneri 2-2а. Антилиэоцимная активность возбудителя 6 мкг/мл. Содержание лиэоцима в биоптате слизистой дистального отдела толстой кишки 7,94 мкг/г.

Из приведенного примера видно, что полученные значения входят в ука1500936

Формула и з обре т е н и я

Составитель Л. Шилина

Редактор Т, Парфенова Техред Л,Олийнык Корректор Э. Лончакова

Заказ 4859/39 тираж 789 Подписное

ВКИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина, 101 занные интервалы изменений антилизоцимной активности и лизоцима биоптатов, характеризующие формирование реконвалесцентного бактерионосительства. Данный прогноз подтвержден неод5 нократным выделением возбудителя при бактериологическом обследовании в период реконвалесценции (через 6, 12 и 15 дн. после клинического выэдоров- 10 ления).

Было обследовано 78 больных острой дизентерией, диагноз бып подтвержден клинически и бактериологически.

Реконналесцентное бактерионоси5 тельство было спрогнозировано у 11 больных. Фактически реконвалесцетное бак т ер ион о сит ель с тво сфо рми ров ало с ь у 12 больных, что подтверждено положительньмн результатами бактериологического исследования.

Таким образом, эффективность предлагаемого метода составляет 91,67.

Опыты на белых MbIUàõ позволили установить, что длительность выделения 25 шигелл зависит от, уровня антилизоцимной активности. Штаммы с высоким уровнем антилизоцимной активности (9 мкг/мл) выделялись из органов инфицированных мышей в среднем на 7

10 дн. больше, по сравнению со штаммами с низкой антилиэоцимной активностью (3 мкг/MJI), Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью (в

91,6Х. случаев) прогнозировать вероятность формирования реконвалесцентного бактерионосительства. Кроме того, предлагаемый способ позволяет эффективно прогнозировать реконвалесцентное бактерионосительство на ранних этапах развития заболевания, что позволяет осуществлять индивидуальный подход к лечению больных с целью сокращения числа бактерионосителей. Со-,. кращение числа бактерионосителей позволяет уменьшить опасность распространения инфекции среди людей.

Способ диагностики реконвалесцентного бактерионосительства при дизентерии путем определения антилиэоцимной активности шигелл, выделенных у больного, отличающийся тем, что, с целью ранней диагностики и повышения точности способа, дополнительно определяют содержание лизоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки и при значениях первого показателя. 6,013,0 мкг и второго — 4,96-7,94 мкг/1 r белка диагностируют реконвалесцентное бактерионосительство.