Способ дифференциации возбудителя рака стеблей сои diароrтне рнаsеоlоruм var.caulivora от возбудителя ожога бобов и стеблей diароrтне рнаsеоlоruм var.sojae

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к способам диагностики возбудителей близких видов грибов-патогенов растений DIAPORTHE PHASEOLORUM VAR. CAULIVORA, DIAPORTHE PHASEOLORUM VAR. SOJAE. Целью изобретения является ускорение и упрощение дифференциании возбудителей рака стеблей сои от ожога бобов и стеблей. Способ заключается в том, что выделяют чистые культуры грибов (неидентифицированные возбудители рака стеблей сои или ожога бобов и стеблей), культивируют на кислом картофельно-глюкозном агаре одновременно при 24-27 и 30-33°С, при этом на 4-5 сут определяют отношение радиальных скоростей роста колоний, выросших при заданных температурах и визуально оценивают их культуральные свойства. При этом у возбудителя рака стеблей сои при 30-33°С по сравнению с 24-27°С происходит резкое замедление темпа роста и изменение культуральных признаков: текстуры, топографии, степени развития воздушного мицелия, в то время как у возбудителя ожога бобов и стеблей темп роста и культуральные признаки изменяются незначительно. Предлагаемый способ отличается простотой, быстротой, высокой производительностью. Применение данного способа сокращает время на анализ одного образца в 2-3 раза по сравнению с общепринятым культурально-морфологическим методом, что особенно важно при экспертизе семенного материала. 5 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5ц 4 С 12 Q 1/04.,ЧЕСЩ 1А

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21 ) 4390718/30-13 (22) 14.03.88 (46) 07.12.89. Бюл. У 45 (71 ) Всесоюзный научно-исследовательский институт карантина растений (72) О.В. Скрипка (53) 576.8(088.8) (56) Schmitthenner А.F.,Kmetz.Role

of phomopsis sp.in the soybean seed

rot problem. World Soybean Res Conp.

II, Corb. F.Т., ed Westvien Press, Boulder, СО., 1980, 355-366. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЯ1И ВОЗБУДИТЕЛЯ РАКА СТЕБЛЕЙ COP DIAPORTHE PHASEOLORUM VAR.CAULIVORA ОТ ВОЗБУДИТЕЛЯ

ОЖОГА БОБОВ И CTFKIIEA DIAPORTHE PHASEOLORUM VAR.SOJAE (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к способам диагностики возбудителей близких видов грибов-патогенов растений Diaporthe phaseolorum чаг .caul ivora,Diaporthe phaseolorum var.so)ae. Целью изобретения является ускорение и упрощение дифференциации возбудителей рака стеблей. сои от ожога бобов и стеблей. Способ заключается в том, что выИзобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к способам диагностики возбудителей близких видов грибов-патогенов растений Diaporthe

phaseolorum var.caulivora, Diaporhe

phaseolorum var. co ac.

Целью изобретения является ускорение и упрощение дифференциации воз.З0 152 2 2 А1

2 деляют чистые культуры грибов (неидентифицированные возбудители рака стеблей сои или ожога бобов и стеблей) культивируют на кислом картофельно° глюкозном агаре одновременно при температурах 24-27 и 30-33 С, при этом на 4-5 сут. определяют отношение радиальных скоростей роста колоний, выросших при заданных температурах, и эизуально оценивают их культуральные свойства. При этом у возбудителя а рака стеблей сои при 30-33 С по срава нению с 24-27 С происходит резкое замедление темпа роста и изменением культуральных признаков . текстуры, топографии, степени развития воздушного мицелия, в то время как у возбудителя ожога бобов и стеблей темп роста и культуральные признаки изменяются. Незначительно. Предлагаемый способ отличается простотой, быстротой, высокой производительностью.Применение данного способа сокращает время на анализ одного образца в 23 раза по сравнению с общепринятым

О культурально-морфологическим методом, что особенно важно при экспертизе семенного материала. 1 табл. будителя рака стеблей сои от возбудителя ожога бобов и стеблей.

Готовят питательные среды: 2Х-ный картофельно-глюкозный агар, агаризованную среду Чапека, сусло-агар.

После автоклавирования в стерильных условиях добавляют 0,17-ную лимонную

1527262 кислоту для подкисления сред до рН

4,5-5,8.

Предварительно выделяют возбудителей Diaporthe phaseolorum var.caulivora или Diaporthe phaseolorum so)ae из растительного материала в чистую культуру следующим образом. Семена или кусочки растений (0,3-0,5 см) после поверхностной стерилизации сулемой ():1000) или спиртом (96X) промывают несколько раэ стерильной дистиллированной водой, обсушивают и помещают в чашки Петри с питательной средой (на картофельно- глюкозный агар, сус- 15 ло-агар, агаризованную среду Чапека и др.) Чашки Петри термостатируют при 22-27 С. Выделение изучаемых грибов в чистую культуру (в пробирки с питательной средой) проводят визу- 20 ально.

Выделенную культуру возбудителя рака стеблей сои ипи ожога бобов и стеблей высевают уколом на кислый картофельно-гхпокоэный агар в центр 25 чашки Петри или небольшим кусочком мицелия 2-3 мм в диаметре и одновременно термостатируют в диапазонах температур 24-27 и 30-33 С.

На 4-5 сут. (а если исследуемая 30 культура находится в хорошем физиологическом состоянии, т.е. быстрорастущая, то измерения проводят на

4 еут. колония гриба практически достигает границ чашки Петри — 92 мм) измеряют диаметры колоний грибов, выросших при 24-27 и 30-33 С. Находят среднее значение диаметров, по которым вычисляют радиальную скорость роста колоний за это время в 40 каждом диапазоне температур, и отношение радиальных скоростей 27/30 и 27/33 С. Отношение радиальных скоростей для возбудителя рака стеблей сои больше 30 а для возбудителя ожо- 45 га бобов и стеблей близко ипи равно (отклонение в пределах ЗОХ) ).

Одновременно сравнивают изменение культуральных признаков колоний гри50 бов (текстуры, цвета, топографии ко, лоний, степени развития воздушного мицелия, окраски субстратного мицелия среды ), раз в ив ающихс я в ра э ных температурных диапазонах.

На основании расчета величины отношения радиальной скорости роста колоний гриба и культуральных признаков дифференцируют культуру до вида.

II р и м е р. Дпя определения зараженности возбудителями Diaporthe

phaseolorum- var .caulivora, Иарог1Ье рЬаseolorum var.зо,)ае было использовано 2 образца семян сои — сорта

Ходсон и Колхида. Семена после поверхностной стерилизации помещают на кислый картофельно-глюкоэный агар и теро мостатируют при 22-27, на 5 сут,.визуально по культуральным признакам выделяют 3 культуры, относящиеся к роду Phomopsis. Далее каждую вьщеленную культуру помещают на кислый картофельно-глюкоэный агар в центр чашки Петри и термостатируют при о

27 и 31 С. На 5 сут проводят измерение диаметров колоний и вычисляют радиальную скорость роста колоний о при 27 и 31 С и их отношение, а также на 5 сут определяют характер изменений культуральных признаков исследуемых колоний. Полученные данные представлены в таблице.

Иэ таблицы видно, что радиальная скорость роста культур 1 и 2, выделенных иэ семян сорта Кодсон, не менялась при разных температурах и составила 0,38 мм/ч. При этом колонии культур, выращенные при 31 С, по сраво нению с колониями, выращенными при о температуре 27 С, имели увеличенную плотность, пушистость воздушного мицелия, а у культуры 2 наблюдалось появление желтовато-зеленого оттенка мицелия, что указывает на принадлежность этих культур к виду Diaporthe

phaseolorum var.so)ac.

Радиальная скорость роста культуры 3, выделенной из семян сорта Колхида, при 31 С уменьшилась в 4,7 раза по сравнению с радиальной скороо стью роста этой культуры при 27 С.

При этом культуральные признаки колоний, выращенных при 31 С, по сравнению с колониями культуры 3, инкулио рованными при 27 С, менялись следующим образом: колонии становили приподнятыми, с плотным воздушным мицелием белого цвета в центре и слаборазвитым паутинным мицелием к периферии, края неровные, размытые, субстратный мицелий светло-желтого цвета. Среда не окрашена.

На основании расчета величины радиальной скорости роста колоний гриба при заданных температурах и величины их отношения, а также учитывая

5 152 изменения культуральных признаков, определяют культуру 3 как Diaporthe

phaseolorum var .caulivora .

Предлагаемый способ отличается простотой, быстротой, высокой производительностью. Применение способа сокращает время на анализ одного образца в 2-3 раза по сравнению с культурально-морфологическим методом, что особенно важно при экспертизе сменного материала.

Исследуемые культуры рода

Phoaop61в

Отноаение

Радиальная скорость роста хопоний,мм/ч, иа 5 сут,вь росаил при юС

Иэмеиенне характера роста ко& поний прн 31 С на 5 сут.по сравнению с ростом культур прн 27 С ст гриба ° мм сут. С р в д мал ь ныл скоростей

27 С!М С

27 З

92 0 ° 38 0,38 колонии плоские с плотнораввитым приватым мицелием белого цвета н пуаистым к пернйернн субстратшй мнцелнй светло-корнчйевого цвета (бевевый ), среда не окрааена.

То ке, в центре мнцелнй прноЬретает нелтовато-велеиый оттеаок.

Колонии в центре прнподнлты, с плотным вовдуаным ннцелнем Ьелого цвета в центре и слабораввнтым> стелнаимсл, паутиннстьве к периферии. крал колонии нероваюе; суЬстратный мицелнй светло-лелтого цвета, среда не окрааеиа.

92 0,36 0,38

l9,5 0,38 0,08

4,7

Составитель П. Иванов

Техред М.Дидык Корректор М.Васильева

Редактор О. Юрковецкая

Заказ 7481/34 Тираж 501 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r Ужгород, ул. Гагарина, 101

Формула изобретения

Способ дифференциации возбудителя рака стеблей сои Disporthe phaseoloгав чаг.caulivora от возбудителя ожога бобов и стеблей Diaporthe phaseolorum var. so)ae. включающий выделение чистых культур грибов на питательные среды, содержащие источники углерода, азота, минеральные соли и микроэлементы, отбор колоний, содержащих неидентифицированные возбудители рака стеблей сои нли ожога бобов и стеблей, от других родов грибов на 5-7 сут. по культуральным признакам. цвету, текстуре колоний, степени развития воздушного мицелия, пересев культур из отобранных колоний на кислый картофельно-глюкозный агар и культивирование при темпера7262 6 туре 24-27 С с последующей оценкой результатов, о тл ич ающийс я тем, что, с целью ускорения и

5 упрощения дифференциации возбудителей, отобранные культуры грибов дополнительно культивируют при 30-33 С, при этом на 4-5 сут. определяют отношение радиальных скоростей роста колоний, выросших при 24-27 С и 30о

33 С, и визуально оценивают их культуральные свойства, а оценку результатов осуществляют по соотношению скоростей роста грибов при разных

15 температурах, при этом при отношении больше 3 культуру относят к грибам вида Diaporthe phaseolorum var.caulivora, а при отношении близком ипи равном 1. — к грибам вида Diaporthe

20 phaseolorum var.so)Be, а также по изменению культуральных признаков, которые в диапазоне 30-33оС у Diaporthe phaceolorum var.cauiivora, приводят к образованию приподнятой

25 или слабобугристой колониис плотными воздушным мицелием белого цвета в центре и стелющимся паутинистым полупрозрачным мицелием к периферии, в то время, как у Diaporthe pha30 seolorum var.во.чае в центре плоские, с хорошо развитым мицелием неоднородной плотности белого цвета °