Способ определения активности антибиотиков и антисептиков

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и микробиологической промышленности. Цель изобретения - ускорение способа. В способе в качестве тест-культуры микроорганизма используют штамм BACILLUS THERMONONLIQUEYACIENS ЦМПМ NB-2945. Исследуемый образец и культуру разводят в физиологическом растворе. Определение проводят традиционным методом диффузии в агар. Инкубирование посевов осуществляют при температуре 60-65°С и учитывают результаты по зонам угнетения роста тест-культуры через 4-6 ч инкубации. Чувствительность способа на уровне стандартных методов. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК цр С 12 g 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4197825/28-13 (22) 23.02.87 (46) 30.09.89, Бюл, 1" 36 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов и Бердский химический завод (72) О.А.Андреев, Н.А.Климов, В.И.Батарин, P.И.франк, Н.И.Иашкина и Т.А,Блинова (53) 615.779.90 (088.8) (56) Андреев О.А, и др. Характеристика термофильных бактерий, выделенных иэ термальных источников Камчатки.

Микробиология, Т 52, 1983, 1" 3, с ° 496-504.

Егоров H.Ñ. Микробы-антагонисты и биологические методы определения антибиотической активности. М,! Высшая школа, 1965, с.120-130.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и микробиологической промышленности, в частности к произ- . водству антибактериальных препаратов.

Цель изобретения - ускорение способа.

Способ осуществляют следуюцим образом.

Культуру штамма ДУ-9 ЦМПМ Ь В-?945, храняцуюся на косяках с МПА под ваэелиновым маслом, высевают на чашки с

МПА с доЬавлением 0,53 мелассы либо в колбы с ПМБ и культивируют 18 ч при 55-670 С. Выращенную культуру можно хранить в течение двух недель при

„,SU» 1511274 А 1

2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

АНТИБИОТИКОВ И АНТИСЕПТИКОВ (57) Изобретение относится к медицинской микроЬиологии и микробиологической промышленности. Цель изобретенияускорение способа. В способе в качестве тест-культуры микроорганизма используют штамм Bacillus thermononliquefaciens ЦМПМ Y В-2945. Исследуемый образец и культуру разводят в физиологическом растворе. Определение проводят традиционным методом диффузии в агар. Инкубирование посевов осуществляют при температуре 6065 С и учитывают результаты по зонам угнетения роста тест-культуры через

4-6 ч инкубации. Чувствительность способа на уровне стандартных методов. табл.

4 С. Для выполнения анализа используют смыв в физиологическом растворе со свежего (ночного) высева на МПА.

При этом питательный агар на чашки

Петри разливают в два слоя. Первый слой (20 мл стерильного агара) подсушивают при комнатной температуре в течение 2 ч, а затем разливают второй слой (5 мл агара, содержащего

1 х 10 клеток тест-культуры) при температуре не выше 55 С.

В застывшем агаре делают лунки диаметром 8 мм и в них закапывают по 0,1 мл растворов стандартных пре паратов и испытуемого образца. Чашки

Результаты определения концентраций антибиотиков и антисептиков

"М

При- Введено растмер (воров, мкг/л

Условия инкубации по предлагаемому способу

Концентрация препарата, мкг/мл, по способу предлагаемому извест ному

3 Канамицина сульфат "25

65 С

60 (650 с

65о„

60 С

65 С

/ 0 ОС

4 ч, 6ч, ч

6 и, Ц

/ о ч

4 ч„ и>

128 + 3,1

26 + 0.55

6,7 + 0,12

29,5 -: 0,7

121

122 +

25,5 +

26 +

6,92 +

6,96 +

30,5 +

29,4 +

3,5

0,65

0,61

0,008

0,11

0,8

0,9

Ч Мертиолат 25

Перекись водорода 6,8

Тетрациклин

П р и м е ч а н и е. Условия инкубации по известному способу: 37 С, 18 ч.

3 151127 инкубируют при 60-65 C в течение 16 ч, после чего определяют диаметр эон угнетения роста. Расчет проводят по предварительно построенной калиб5 ровочной кривой.

П р и и е р t. Определение бацитрацина в ветеринарном препарате бациллихин-30. Исходный препарат растворяют в физиологическом раство- 10 ре и готовят серию разведений.

Полученные растворы закапывают в лунки питательного агара, зараженного Bacillus thermononliquefaciens

ЦМПМ В-2945. Чашки инкубируют 6 ч 15 при 65 С, затем определяют диаметр зон задержки роста и рассчитывают концентрацию препарата по калибровоч-( ной кривой, построенной при использовании стандартных растворов с концен- 20 трацией 5-100 мкг/мл.

Пример 2. Определение бацитрацина в культуральной жидкости, Культуральну(о жидкость центрифугируют для отделения клеток продуцента 25 (В.licbeni formis). Центрифугат разводят физиологическим раствором и затем проводят определение по примеру 1.

Биологическая активность культуральной жидкости составляет 5200 мкг/ З0

/мл ((о известному спссобу определег:о 5250 Й((г! мл)

1,о и и е р ь(3 -6. В I,од(о (oûëeê ные чашки закаг(ываит pac TBGpbl „. содержащие различные концентрации антибио- З; тиков (канамицина сульфат, тетрациклин) или антисептиков (мертиолат, перекис.ь водорода), по 0,1 мл на лунку.

После инкубации чашек при 60 C в течение 6 ч или при 65 С в течение (ч измеряют диаметры ингибирования зон роста бактерий, после чего с помощью калибровочных кривых определяют концентрацию антибиотика или антисептика. Параллельно определяют концентрацию антибиотиков и антисептиков известным способом. Результаты представлены в таблице, Таким образом, предлагаемый способ позволяет уменьшить время, необходимое для определения биологической активности или концентрации антибиотика или антисептика, в 3-ч раза, беэ ухудшения точности определения по сравнению с известным способом. ! формула изобретения

Способ определения активности антибиотиков и антисептиков методом диф" фузии в агар, включающий инкубирование исследуемых препаратов в присутствии тест-культуры микроорганизма с использованием агаровой среды с последующим учетом результатов по наличию и размерам зон угнетения роста тесткультуры, отличающийся тем, что, с целью усксрения способа, в качестве тест-культуры используют ш-.àìì термофильных бактерий Bacillus

thermononliquefaciens ЦМПМ t!" В-29((5, а инкубирование проводят при 60-65ОС.