Способ получения слюны иксодовых клещей

 

Изобретение относится к медицинской паразитологии, в частности к вопросам изучения процессов слюноотделения у переносчиков болезней /клещей/, осуществляющих передачу вирусов со слюной при укусе человека. Целью изобретения является отдельное получение двух фракций слюны. Для достижения цели проводят инъекцию секретотропных веществ и сбор слюны, причем используют голодных клещей, в качестве секретотропных веществ применяют 10 мм раствор допамина и 10%-ный раствор пилокарпина, которые вводят соответственно в количестве 0,2-0,6 и 0,2-0,4 мл на особь.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

С 12 q 1/04.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМ,К СВИДЕТЕЛЬС ГВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4323902/28-14 (22) 03. 11.87 (46) 23 ° 09.89. Бюп. У 35 (71) Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов АИН СССР (72) А.Н.Алексеев и С.П.Чунихин (53) 612.05 (088.8) (56) Kaufman M.Â. Атп I.Physiol., . 1978, 205, Р 1, р. 76-81. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЛЮНЫ ИКСОДОВЫХ КЛЕММОЙ (57) Из.обретение .относится к медицинской паразитологии, в частности к

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к медицинской паразитологии и энтомологии, к способам управления слюноотделением у переносчиков болезней человека и животных, осуществляющих передачу возбудителей со слюной при укусе.

Целью изобретения является получение двух фракций слюны клещей.

Указанная цель достигается тем, что используют живых голодных иксодовых клещей, гипостом которых вводят в последовательно сменяемые сухие капилляры после перентерального введения секретотропных веществ.

Для получения разных фракций клещу с гипостомом, вставленным в капилляр, вводят адренэнергетик — допамин

10 мИ раствор в количестве 0,2-0,6 мп на особь и получают жидкую слюну, затем капилляр заменяют и вводят холинэнергетик — пилокарпин 10Х-ный раствор в количестве 0,2-0,4 мл на

„„SU„, 3589403 А1

2 вопросам изучения процессов слюноотделения у переносчиков болезней (клещей), осуществляющих передачу вирусов со слюной при укусе человека. Целью изобретения является отдельное получение двух фракций слюны.

Для достижения цели проводят инъекцию секретотропных веществ и сбор слюны, причем используют .голодных клещей, в качестве секретотропных веществ применяют 10 мМ раствор допамина и

10Х-ный раствор пилокарпина, которые вводят соответственно z количестве

0,2-0,6 и 0,2-0,4 мп на особь. особь - получают цемент. Каждую из фракций исследуют на наличие вируса путем титрования на. сосунках белых мышей.

Пример 1. Получение фракций слюны от клещей Hgalomma anatolicum.

Самок клещей Hgalonma anatolicum, полученных из неочаговой по клещевому энцефалиту территории в виде нимф, заражают парентерально вирусом клещевого энцефалита и затем содержат в, термостате при 37 С в течение 7 дней, через 7-8 дней содержания при комнатной температуре фиксируют на спине на стержне, конец которого обернут липким пластырем. Параллельно телу клеща наносят две капли парафина для фиксации конечностей. Затем под контролем бинокуляра гипостом вводйт в сухой капилляр (оттянутую пасте- . ровскую пипетку) с внутренним диаметром, равным диаметру гипостома самки.

3 150940

В сочленение вертлуга и коксы IV пары конечностей стеклянной микроиглой, изготовленной на микрокузнице аппарата Фонбрюна и закрепленной на металлической игле микродозатора на 10 мкл, вводят 0,2-0,4 мл 10 мМ раствора допамина, и после начала слюноотделения или через 5-10 мин еще 0,2-0,4 мл . 100 М раствора гам- 10 ма-аминомасляной кислоты — синергиста допамина.

Сменив капилляр, вводят 0,20,4 мл 10 -ного раствора пилокарпина. 15

Полученную в капилляр порцию слюны вместе с кончиком капилляра растирают в ступке с 0,8 мл стерильного физиологического раствора, отцентрифугированную от стекла надосадочную 20 жидкость вводят по общепринятой методике в мозг сосункам белых мышей для определения наличия и титра возбудителя, в данном случае — вируса клещевого энцефалита, в разных порциях слюны. t

Пример 2. Получение слюны и определение вируса в ней от клещей Dermacentor marginatus.

Полученных из природы неэаражен- 30 ных самок Dermacentor marginatus 2-3 и 3-ro физиологического возраста заражают парентерально вирусом. Через

20 дней каждой самке описанным способом вводят 0,4-0,6 мл допамина.

Во всех случаях как в опыте (13 самок), так и в контроле (9 самок) получают слюну, среднее количество которой составляет 0,17 мп. В 5 случаях из 10 исследованных проб выде- 40 ляют Вирус с титром 0 1 lg LD50 в

0,03 мп.

Проведенные опыты показывают, что под влиянием допамина и гаммааминомасляной кислоты голодными кле4э щами выделяется жидкая фракция слюны, в которой затем устанавливают наличие вируса клещевого энцефалита (показано на клещах Xxodes persulcatus u Dermacentor marginatus — самках и Ixodes г . cinus - самцах). Под

50 влиянием введения гамма-аминомасляной кислоты также получают жидкую слюну от Hgalomma anatolicum, кото" рая так же, как и спонтанно выделяемая под влиянием механичес- кого раздражения капилляром жидкая слюна, вируса в обнаруживаемых количествах в большинстве случаев не со.— держит. Под влиянием пилокарпина получают выделение цементной фракции слюны, твердеющей на воздухе и в капле дистиллированной воды. В цементной фракции слюны у всех оказавшихся зараженными самок клещей

Hgalomma anatolicum содержится вирус клещевого энцефалита, причем в максимальных — по сравнению с другими экспериментами — до 2,2 lg LD+o в

0,03 мп. В некоторых опытах у одной и той же особи Н. anatolicum в жид- . кой спонтанно выделившейся порции слюны, вирус обнаружить не удается, тогда как в цементной фракции он присутствует

Таким образом, показано, что уже первые порции слюны, вводимые в самом начале питания как в кровь и лимфу позвоночного (жидкая фракция слюны), так и контактирующие с живым слоем кожи (цементная пробка), могут содержать вирус в достаточных для начала репродукции количествах и потому представляющих опасность для начала заболевания.

Предлагаемый способ позволяет получить различные фракции слюны голодных клещей.

Получение фракций слюны позволяет не только обнаруживать наличие возбудителя в них, но и осветить ряд неясных эпидемиологических и эпизоотологических явлений, связанных с диспропорцией между числом обнаруживаемых присосавшихся клещей и уровнем иммунной прослойки у людей и животных. В первом случае это связано с неучитываемым количеством кратковременно присасывающихся самцов иксодид, в жидкой слюне которых в значительном количестве присутствует вирус, во втором с тем, что грызуны, уничтожающие (скусывающие, счесывающие) присосавшихся клещей (личинок и нимф), оставляют в коже цементные

"пробки", которые, как показано, могут содержать вирус. То же явление может наблюдаться и у людей даже при извлечении присосавшихся клещей.

Формула изобретения.

Способ получения слюны иксодовых клещей, включающий иньекцию секретотропных веществ и сбор слюны, о, тл и ч а ю шийся тем, что, с

5 1509403 6 целью отдельного получения двух фрак- мина и 10Х-ный раствор пилокарпина, ций слюны, используют голодных кле- которые вводят соответственйо в кощей, в качестве секретотропных ве- личестве 0,2-6,6 и 0,2-0,4 мл на ществ применяют 10 мМ раствор допа- особь.

Составитель А;Макаров

Редактор Н.Гунько Техред М.Ходанич Корректор С,Шекмар

Заказ 5765/22 Тираж 501 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открьггиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат ™Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101.