Способ определения активности холинацетилтрансферазы в ткани сердца

Авторы патента:

G01N33/68 - с использованием протеинов, пептидов или аминокислот

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения активности холинацетилтрансферазы (ХАТ). Цель - повышение чувствительности и упощение способа. Сущность способа состоит в том, что при радиохимическом определении холинацетилтрансферазы образовавшийся ацетилхолин выделяют на микроколонках с Дауэксом 1 в ацетатной форме, элюируют дистиллированной водой непосредственно в сцинтилляционный флакон при соотношении объемов Дауэкс: вода = 1:1,2 - 1:5.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

А1 (19) (111 (51)5 G 01 N 33 68

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTGPCHGMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4334021/28-14 (22) 26.11.87 (46) 07,04.90. Бюл. Ф 13 (71) 1-й Иосковский медицинский институт им. И.М.Сеченова, Институт медико-биологических проблем и Научно-исследовательский институт мозга

Всесоюзного научного центра психического здоровья АИН СССР (72) С.В.Тришкин, К.Б ° Винницкая, В.А.Кузнецов и С,IO.Ïoíoìàðåâ (53) 612.015(088.8) (56) J.Physiol 1982, v. 322, р.53-69, Изобретение относится к медицине а именно к способам определения активности холинацетилтрансферазы (ХАТ).

Цель изобретения вЂ” повышение чувствительности и упрощение способа путем замены экстракции на хромато14графическое выделение С-ацетилхолина (С-АХ), позволяющее более

14 ° гаолио выделить продукт реакции.

Пример. Цельное сердце крысы гомогенизируют в реде, содержащей

200 мИ NaC1, 40 мМ натрий-фосфатного буфера (рН 7,4), 10 мМ ИВС1, 0,2 мМ эзерин-салицилата и 0 5% Тритона

Х-100, в соотношении 1: 19 (м/v). Гомогенат инкубируют в среде, содержащей 280 мМ Na01, 24 мМ натрий-фосфатный буфер (рН 7,4), 6 мИ ИрС1

0 2 мМ ээерин-салицилата, 10 мИ хо;лин-хлорида, 0,2-0,25 мИ С-АсКоА

1Ф

2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ХОЛИНАЦЕТИЛТРАНСФЕРАЗЫ В ТКАНИ СЕРДЦА (57) Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения активности холинацетилтрансферазы.

Цель вЂ” повышение чувствительности и упрощение способа. Сущность способа состоит в том, что при радиохимическом определении холинацетилтрансферазы образовавшийся ацетилхолин выделяют на микроколонках с Дауэксом I в ацетатной форме, алюируют дистиллированной водой непосредственно в сцинтилляционный флакон при соотношении объемов Дауэкс:вода=1: 1,2-1:5. (5 0,5 мг/мл бычьего сыво роточного альбумина и 0,3% Тритона

Х-100, Контрольные образцы, кроме того содержат 21((И Br-AX. Объем исследуемого гомогената 30 мкл, финальный объем инкубируемой смеси 50 мкл.

Гомогенаты проб инкубируют в течение

30 мин при 37 С.

Остановку ферментной реакции осуществляют добавлением 50 мкл 2 М уксусной кислоты.

Далее пробы наносят на микроколонки с 500 мкл Дауэкса 1х4 100-200 меш в ацетатной форме и элюируют 700 мкл дистиллированной воды непосредственно в сцинтилляционный флакон с диоксановым сцинтиллятором, содержащем на 1 л раствора: 4 r ППО, 0,2 r ПОПОП и 100 г нафталина. Количество радиоактивности измеряют на сцинтилляционном счетчике.

1555671

Формула изобретения

Способ определения активности холинацетилтрансферазы в ткани сердца

Составитель А.Сабурова

Техред М.Дидык Корректор M,Kó÷åðÿâàÿ

Редактор Н.Бобкова

Заказ 554 Тираж 510 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Рауаская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г Ужгород, ул. Гагарина, 101

Активность обусловленной ХАТ оценивают по разнице радиоактивности .между суммарным синтезом С-AX Ф (5677,6 расп./мин) и Br-АХ чувствительным синтезом С-АХ (3665,8 расп

/мин) и она равна 2011,8 расп./мин (1,829х10 моль; 1,016х10 моль/с и бх10 " кат/г ткани). путем гомогенизации, добавления холина и 1 " С)-ацетилкоэнзима А, инкубиг 1ф рования, остановки реакции, выделения продукта реакции, подсчета радиоактив./ ности, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, радиоактивный продукт реакции выделяют на

1р микроколонке с Дауэксом I в ацетатной форме, элюирование проводят дистиллированной водой непосредственно в сцинтилляционную жидкость при соотношении объемов Дауэкс:вода=1:0,6 вЂ” 1:S.

Способ определения активности холинацетилтрансферазы в ткани сердца

Изобретение относится к биохимии, в частности к способам определения концентрации белка в исследуемых жидкостях

Способ определения активности дегидрогеназ в лимфоцитах // 1553903

Способ диагностики гемолитической болезни новорожденного // 1553902

Изобретение относится к области медицины, в частности педиатрии

Способ определения степени активности воспалительного процесса при хронических бронхитах // 1543345

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения степени активности воспаления при хронических бронхитах

Способ определения содержания средних молекул в крови // 1538128

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения средних молекул в крови

Способ дифференциальной диагностики туберкулеза и неспецифических заболеваний легких // 1538127

Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии и пульмонологии

Способ оценки лечения хронического катарального бронхита // 1536316

Изобретение относится к медицине, в частности к терапии внутренних болезней

Способ диагностики мастита // 1529124

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для диагностики мастита

Способ диагностики стадий течения язвенной болезни // 1529123

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии

Способ определения атакуемости белка пепсином // 1508167

Изобретение относится к медицине , в частности, биологии, и может быть использовано в агропромышленном комплексе, а именно в пищевой промышленности, ветеринарии, зоотехнике и биотехнологии для определения атакуемости белка пепсином

Способ оценки эффективности замещения костного матрикса при трансплантации в ходе оперативного лечения костной опухоли // 2101708

Изобретение относится к медицине, а именно к ортопедии

Способ прогнозирования осложненного течения острого панкреатита // 2102764

Изобретение относится к области медицины, а именно к прогнозированию течения острого панкреатита

Способ дифференциальной диагностики клинических форм бруцеллеза у людей // 2103687

Изобретение относится к медицине, а, именно, к диагностике бруцеллеза цитохимическими методами

Способ оценки состояния больного // 2103692

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии и может быть использовано для диагностики и прогнозирования состояния больного в послеоперационном периоде и при развитии острого воспалительного процесса

Синтетические олигопептиды, специфически взаимодействующие с антителами к вирусу гепатита с, способы диагностики hcv- инфекции (варианты) // 2104284

Изобретение относится к медицине, молекулярной биологии и вирусологии и представляет собой биологически активные соединения - синтетические олигопептиды, соответствующие аминокислотным остаткам (а

Способ ранней диагностики послеродового эндометрита // 2104529

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для ранней доклинической диагностики послеродового эндометрита, одного из гнойносептических постгестационных заболеваний

Способ прогнозирования развития цилиохориоидальной отслойки после внутриглазной операции // 2104548

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может найти применение после внутриглазных операций для своевременного принятия профилактических мероприятий

Способ диагностики атрофического эндобронхита // 2104549

Способ определения эффективности иммуноцитотерапии у больных с опг-гестозами // 2105311

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству, и может найти применение в оценке эффективности терапии гестозов

Способ оценки завершенности формирования соединительнотканного рубца у больных, перенесших инфаркт миокарда // 2105983

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для установления завершенности патологического процесса при инфаркте миокарда (ИМ)