Штамм бактерий sтарнylососсus aureus, используемый для изготовления стафилококковых диагностикумов

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для приготовления диагностических тест-систем, предназначенных для тестирования антител к антигенам микробной клетки стафилококка. Целью изобретения является новый штамм STAPHY-LOCOCCUS AUREUS N 1986, не содержащий протеин А и тем самым повышающий специфичность и чувствительность препаратов для диагностики стафилококковой инфекции. Штамм ST.AUREUS N 1986 депонирован в коллекции ГНИИСК им.Л.А.Тарасевича под номером 182. При иммунохимическом сравнительном изучении сывороток, полученных к данному штамму и к известному А-дефицитному штамму ST.AUREUS WOOD - 46, только в последних выявлены в небольшом количестве антитела к протеину А. Приготовленные на основе штамма эритроцитарные диагностикумы и тест-системы отличаются большей специфичностью, чем аналогичные препараты, приготовленные из штамма WOOD-46. 2 табл.

соез соВЕтсних соцИАлистичесних

РЕСПУБЛИН

А1

„.Я0„„157 1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ пО изОБРетениям и ОТИРытиям

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4480718/30-13 (22) 06.09.88 (46) 15.07.90. Бюл . ¹ 26 (7i) Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (72) Н.Б.Егорова, В.Н.Ефремова, Н.Л.Шагам и Н.П.Ванеева (53) 579.861.2 (088.8) (56) Акатов А.К., Зуева В.С. Стафилококки. M.: Медицина, 1983, с. 125. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ STAPHYLOCOCCUS

AUREUS,ÈCÏOËÜ3ÓÅÌÛÉ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ

СТАФИЛОКОККОВЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для приготовления диагностических тест-систем, предназначенных для тестирования антител к антигенам микробной клетки стафилококка. Целью

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при приготовлении препаратов, предназначенных для детекции антител к антиrенам микробной клетки.

Цель изобретения — новый штамм

Staphylococcus aureus № 1986, не содержащий протеин А и тем самым повышаюший специфичность и чувствительность препаратов для диагностики стафилококковой инфекции.

Штамм S. aureus № .1986 выделен от больного хронической пневмонией и депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института, стандартизации и контро(S3)S С 12 Б 1/20, А 61 К 39/085

2 изобретения является новый штамм Staphylococcus aureus № 1986, не содержащий протеин А и тем самым повышающий специфичность и чувствительность препаратов для диагностики стафилококковой инфекции. Штамм St. аигеиз № 1986 депонирован в коллекции

ГНИИСК им. Л.А.Тарасевича под номером 182. При иммунохимическом срав: *êreëüHoì изучении сывороток, полученнь.х к данному штампу и к известному A-дефицитному штамму St. aureus

Viood-46, только в последних выявлены в небольшом количестве антитела к пратеину А. Приготовленные на основе штамма эритроцитарные диагностикумы и тест-системы отличаются большей специфичностью, чем аналогичные препараты, приготовленные из штамма

Vood-46. 2 табл. С:

3 ля медицинских оиологических препаратов им. Л.А.Тарасевича под № 182.

Штамм Б.aureus ГИСК № 182 имеет следующие морфологические и культуральные свойства: при выращивании на мясопептонном агаре образует непрозрачные, желтоватого цвета коло-.нии с ровными краями, размером 2—

4 мм в диаметре, окрашивается положительно по Граму. Штамм обладает коагулаэпой и гемолптической активностью, ферментирует маннит в аэроб-. ных и анаэробных условиях, обладает .: опьеобразующим фактором, лецитов s чазной активностью. Чувстви1578190

40 тЕлен к левомицину, монсмицину, неомицину, канамицину.

Биологические свойства. Штамм вирулентен для белых мышей. При внут рнбрюшинном введении мышам массой

1 2-14 г в О, 4 -ном агаре lD>> его составляет 18 10 + 6 10. млрд. мик7 у робных клеток. Штамм иммуногенен, обладает слабой аллергенной активностью.

Отличительной особенностью штамма является то, что он не содержит оДного из антигенов клеточной стенки сгафилококка-протеина А.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Определение активности протеина А в штамме производят в реакции диффузии в геле в сравнении с другими штаммами S.aureus, Для этого получают гипериммунные антимикробные кроличьи сыворотки к штаммам Р 1986, Mood-46 и другим штаммам

S.aureus и ставят реакцию против очищенного протеина А. Сыворотки к штамму У 1986 не взаимодействуют с протеином А, сыворотки к штамму

jlood-46 образуют слабые преципитаты, с сыворотками к другим штаммам ста@илококка, например ФР 1991 и 5 реакция выражена очень сильно. ВозможНо определение в сыворотках антител к протеину А и в других серологических реакциях, например, в ИФА иммуно35 ферментном анализе (ИФА) ..

Пример 2. Штамм S. aureus

ГИСК и 182 использован для получения антигенных препаратов наряду со штаммом Wood-46.

Используя методику, предусматривающую депротеинизацию препаратов, ыз биомассы обоих штаммов выделяют капсульные полисахариды {ПС) и тейхоевые кислоты клеточной стенки (ТК). 45

Выход ТК иэ биомассы обоих штаммов одинаков (70 мг из 50 г сырой микробной массы), выход ПС иэ штамма ГИСК

Ф 182 вьппе, чем аналогичного препарата из штамма Wood-46 (350 мг против

200 мг).

Использование выделенных препаратов в ракетном электрофорезе показало, что активность кроличьих сывороток к штамму 1986 (ГИСК У 182) в отношении

TK и ПС обоих штаммов в 4-8 раз вьппе, 55 чем сывороток к штамму Mood-46 (анализ проводят по величине, пиков, об-. разованных преципитатами) °

Выделенные антигенные препараты используют в реакции торможения иммуноферментного анализа (ИФА). Результаты ингибирования показывают, что 507-ное торможение ИФА (в системе с ТК) вызывают ТК Mood-46 в концентрации 0,6 мкг/мл, а ТК из штамма

ГИСК 182 в концентрации 0,07 мкг/мл.

Аналогичное торможение ИФА (в системе с ПС) вызывают ПС Wood-46 в концентрации 0,3 мкг/мл, а ПС штамма ГИСК

В 182 — в концентрации 0,015 мкг/мл.

Полученные данные свидетельствуют о том, что антигенные препараты, выделенные из штамма ГИСК Р 182, обладают более высокой специфической серологической активностью.

Пример 3. Получение эритроцитарного диагностикума. Штамм Staphylococcus aureus ГИСК N - 182 выращивают в матрацах на плотной среде иэ триптического гидролизата казеина.

18-20-часовую культуру смывают дистиллированной водой, стандартизируют до содержания 40+10 млрд, микробных клеток в 1 мл и прибавляют солянокислый гидроксиламин из расчета 0,05 мг на

1 млрд. клеток. Ставят в термостат о при 37 С на 2 сут при помешивании

4-5 раэ в 1 сут.Затем лизат центрифугируют, центрифугат подвергают диализу против дистиллированной воды с

6-кратной сменой, затем разливают во флаконы и подвергают лиофильному высушиванию из замороженного состояния.

Сухим антигеном сенсибилизируют таннизированные формалинизированные эритроциты из расчета 10 мг антигена на

100 мл 57 эритроцитов. Готовый диагностикум разводят до 2,5Х содержания эритроцитов.

Эритроцитарный диагностикум использован в реакции пассивной гемагглютинации {РПГА) для определения стафилококковых антител в сыворотках вакцинированных кроликов и коров.

В табл. 1 и 2 представлены данные сравнительного изучения специфической активности диагностикумов из штаммов Моора-46 и ГИСК У 182.

Из данных табл. 1 и 2 видно, что в случае титрования сывороток крови после введения физиологического раствора животным (коровы, кролики) или до введения вакцины с диагностикумом из штамма Wood-46 имели место существенно более высокие титры антител по

5 1 сравнению с диагностикумом из штамма ,ГИСК !!2 182.

Полученные результаты свидетельст. вуют о том, что более специфические результаты получены при использовании диагностикума на основе штамма

ГИСК !!2 182.

578190 6 формула изобретения

Штамм бактерий Staphylococcus

aureus ГИСК Р 182, используемый для изготовления стафилококковых диагностикумов.

Таблица 1

Обратные титры антител в РПГА с диагностикумами на основе штаммов

Номер кроликов

ГИСК !!2 182 г

Mood-46

Г °

640 физиологичес

320

498

458

448

413

458

472

П р и м е ч а н и е. 1 — срок забора крови до иммунизации, 2 — после иммунизации кроликов стафилококковой вакциной.

Т а блица 2

Номер коров

Обратные титры антител в РПГА с диагностикумами на основе штаммов

ГИСК У 182 (2

3200.

758

781

792

794

793

796

561

1 280

160

408

469

417

484

492

433

499

453

424

При введении

80 !

160

40

20 (20 (20

40 20 (20 (20 с. 20 (20 20 кого раствора (20

40 с20 (20

° с20

320

Продолжение табл.2

Номер Обратные титры антител в РПГА с диагностикумами коров на основе штаммов

ГИСК Ф 182

Wood г

П р и и е ч а н и е. 1 — забор крови до иммунизации, 2 - забор крови после иммунизации (при этом коровы привиты стафилококковой вакциной, кролики — клебсиеллеэной вакциной).

Составитель В.Романова

Техред N.Õoäàíè÷ Корректор С.Черни

Редактор М.Недолуженко

i,3àêàç 189 1 Тираж 504 Подписное

3КИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР.

11303 5, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

573

576

160

320