Способ получения ферритина

 

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для иммунохимического микроанализа ферритина в медицине, в клинической биохимии и биотехнологии. Цель изобретения - сохранение нативной структуры и иммунохимических свойств ферритина при его получении и повышение выхода целевого продукта. Для этого получают тканевый экстракт печени или селезенки человека, фракционируют экстракт сульфатом аммония, подвергают ультрацентрифугированию и хроматографируют. Для получения ферритина в препаративных количествах при хроматографии используют кальций-тартратный гель. 1 з.п.ф-лы.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU „„1588758 щ)5 С 12 Р 13/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ASTGPCHGMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4354177/30-13; 4354192/30-13 (22) 30,12.87 (46) 30,08.90. Бюл. Ф 32 (71) Институт биоорганической химии

AH БССР (72) В.Н.Денисов, С.П.Марцев, В. И. Василевский, И, И, Бовдей, А. П. Дрожденюк, П. А, Шиянов и B.Ë. Чащи н (53) 664. 38 (088. 8) (56) Page M., Lagueux I,, Ganthier С., А three step purification procedure

for human liver ferritin. — Cau, g.

Biochem., 1 980, v. 58, р. 494-498.

Crichton R.R., Miller I.À., Cumming R.L.С,,Bryu С.P. À. The organ

specificiety of ferritin in human

and horse liver апЛ spleen. — Biochem, J. 1 973, v ° 131, N 1, р,51-59, Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в медицине и биотехнологии при получении ферритина для количественного иммунохимического анализа, Цель изобретения — сохранение нативной структуры и иммунохимических свойств ферритина при его получении, а также повьппение выхода целевого продукт а. дпя этого получают экстракт печени или селезенки человека, фракционируют сульфатом аммония и очистку проводят сначапа ультрацентрифугированием, а затем гель-хроматографией на

TSK-геле HW-65, Сефакриле S-300 или кальций-тартратном геле.

2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРРИТИНА (57) Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для иммунохимического микроанализа ферритина в медицине, в клинической биохимии и биотехнологии, Цель изобретения — сохранение нативной структуры и иммунохимических свойств ферритина при его получении и повышение выхода целевого продукта, Для этого получают тканевый экстракт печени или селезенки человека, фракционируют экстракт сульфатом аммония,подвергают ультрацентрифугированию и хроматографируют. Для получения ферритина в препаративных количествах при хроматографировании используют кальций-тартратный гель. 1 3, п.ф-лы.

Пример l. Быстрозамороженную ткань печени или селезенки человека измельчают и гомогенизируют в течение 5 мин в охлажденном 0,05 М трисНС1 буфере, р 7,4. Неразрушенную ткань удаляют центрифугированием при

14000 g в,течение 20 мин.

Супернатант фракционируют сульфатом аммония до концентрации 30Х. Образующийся осадок удаляют центрифугированием.

В супернатант добавляют новую пор цию сульфата аммония до конечной концентрации 607. и перемешивают 30—

60 мин. Центрифугируют, супернатант отбрасывают, осадок растворяют в минимальном объеме буфера, повторно

15387 58

Формула изобретения

Составитель Н. Костюнина

Техред JI.Îëèéíûê Корректор О.Кравцова

Редактор Н. Киштулинец

Заказ 2516 Тираж 480 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

1.13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðîä, ул. Гагарина,101 центриАугируют при 14000 g в течение

20. мин.

Осветленный супернатант собирают и центрифугируют при 200000 g в тече5 ние 60 мин. Полученный осадок растворяют в буАере и повторно центриАУгируют. Осадок растворяют в минимальНоМ объеме 0,05 М трис-НС1 буАере, рН 7,4, содержащем 0,5 М NaC1, и центриАугируют при 37000 g в течение

20 мин, Полученный препарат частями хроматографируют на колонке 2,5 х 90 см с TSK-гелем HM-65, уравновешенной

0,01 И трис-НС1 буфером, рН 7,4, содержащем 0,5 М NaC1, Элюирование проводят этим же буАером, собирая фракции объемом 5-6 мл. Окрашенные Аракции объединяют.

Выход белка составляет 10-12 мг иэ

100 г. ткани печени и 15-19 мг из

100 r ткани селезенки.

Чистоту полученного препарата фер-. ритина контролируют электрофоретически. Анализ выявляет единственную зону ферритина при отсутствии апоАерритина и нримесных белков с меньшими 3р молекулярными массами, П р-и м е р 2. Все стадии способа выполняют как описано в примере 1 эа исключением того, что на стадии гель-хроматографии используют Сефакрип S-300.

Пример 3. Все стадии способа выполняют как описано в примере.

1 за исключением того, что стадию хроматографической очистки проводят на кальций-тертратном геле (КТГ),Для этого на хроматограАическую колонку размером 1,5 х 3,0 см, заполненную

5-6 см КТГ и уравновешенную 0,05 М трис-НС1 буфером, рН 7,4, содержащем

0,5 М NaC1 наносят 40 мг белкового материала в том же буфере, Элюируют этим же буфером (скорость элюирования 40-50 мп/ч) до прекращения поглощения при длине волны 280 нм.

Выход белка составляет 70-807. от ферритина, содержащегося в исходном белковом препарате.

1. Способ получения ферритина, включающий получение тканевого экстракта, фракционирование сульАатом аммония., ультрацентрифугирование и гельхроматографию, о т л и ч а ю— щ и и с. я тем, что, с целью сохранения нативной структуры и иммунохимических свойств, фракционированию подвергают непосредственно тканевый экстракт, 2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта,проводят хроматографию на кальций— тартратном геле.