Способ спектрофотометрического количественного определения но-шпы, выделенной из биологического материала

 

Способ относится к медицине, точнее к химико-токсикологическому анализу. Цель - повышение специфичности. Способ осуществляется путем добавления к 10,0 мл спиртового раствора но-шпы 0,1 мл 1% раствора гидроксида аммония / образование непротонированной формы но-шпы/ и измерения величины оптической плотности раствора при длине волны 360 нм, затем к раствору добавляют 0,1 мл концентрированного раствора соляной кислоты/ образование протонированной формы но-шпы/ и повторно измеряют величину оптической плотности раствора при указанной длине волны. Для количественного определения но-шпы, выделенной из биологического материала, используют разность при вычислении оптической плотности непротонированной формы из величины оптической плотности протонированной формы но-шпы при длине волны 360 нм. Табл.1,2.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЯИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АВ ГОРСКОМУ СЮЩЕТЕЛЬСТВУ

М

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

llPH ГКНТ GCCP. (21) 4324411/30- Ф4 (22) 03.11.87 (46) 23.09.90. Бюл. и 35 (71) АлтаВский государственный медяцанский. институт им. Ленинского камеомола (72) В.А. Карташов и В.А. Кнауб (И) 642055(088.8) (56) Судебно-медицинская экспертиза, 19 82 с. 50 51. (54) CIAO& СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО

NNNKCTBKHHOrO ОПРЕДЛНИЯ И -Шы

ВМДЕЛЕННОИ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕ-.

ИИЛА (57) Способ относится к медицине, точнее к химико-токсикологическому анализу. Цель - повышение специфичности. Способ осуществляется путем доИзобретение относится к фармации, точнее к химико-токсикологическому анализу, а именно к количественному определению но-шпы, выделенной из биологического материала.

Целью изобретения является повышение специфичности способа.

Способ осуществляют путем последовательного добавления к 10,0 мл спиртового раствора но-шпы, выделенной из биологического материала,0,1 мл 1Х-ного раствора гидроксида аммония и;

0,1 мл концентрированной соляной кислоты, снятия спектров но-шпы в протонированной и непротонированной формах.

При добавлении 0,1 мл 17.-ного гидроксида натрия но-шпа переходит в не„,80„„15 4427 А1 (51)5 G 01 М 33/48 21/78 33/52

2 бавления к 10,0 мл спиртового раствора но-шпы 0,1 мл 1Х-ного раствора гидроксида аммония (образование непротонированной формы но-шпы) и измерения величины оптической плотности раствора при длине волны 360 нм, затем к раствору добавляют О, 1 мл концентрированного раствора соляной кислоты (образование протонированной формы но-шпы) и повторно измеряют величину оптической плотности раствора при указанной длине волны. Для количественного определения но-шпы, выде-. ленной из биологического материала, используют разность при вычислении оптической плотности непротонированной формы из величины оптической плотнос- Е ти протонированной формы но-шпы при длине волны 360 нм. 2 табл.

С: протонированную форму, которая не . имеет поглощения при длине волны

360 нм. В этом случае величина измеренной относительно растворителя оптической плотности равняется оптической плотности примесей (Дя ygo) . При добавлении к 10,0 мл раствора но-шпы

0,1 мл концентрированного раствора соляной кислоты но шпа переходит в протонированную форму с максимумом поглощения в области длин волн 350360 нм. Измеренная относительно растворителя при длине волны 360 нм оп- тическая плотность (Л,) складывается из оптической плотйости но-шпы (Д„з ) и оптической плотности примесей (Л „). .Зная последнюю величину д 3са находят оптическую плотность но-шпы (Л 3 ) 1594427

Н д60 Дзб0 ДпЛбо

Оптические плотности спиртовых растворов примесей при последовательном добавлении 0,1 мл 1%-ного раствора аммония гидроксида и 0,1 мл концентрированного раствора соляной кислоты не изменяются.

Количественное содержание но-шпы (Тх) в исследуемых растворах (в мкг) 10 определяют по стандартному раствору, Содержащему определенное количество цо-шпы (Т ) по формуле

Д н ICE Т ст

Х Д

У

"ger s6>

15 где Д и Д„, — оптические плотности спиртовых растворов но-шпы соответственно в опытной и стандартной пробах при длине волны 360 нм. Подчйняемость закону Бугера наблюдается в интервале концентрации 5-50 мкг/мл.

Пример 1 ° К 10,0 мл мочи добавляли 0,2 мл 0,1000 -ного раствора но-шпы в 0,01 н.растворе соляной кислоты, 2,0 мл 0,1 н.раствора соляной кислоты, 10,0 мл гексана, встряхивали в течение 5 мин, центрифугировалн:

5 мин при 2,5 тыс. об/мин. Гексановую фазу отделяли, водную фазу п дще- З0 лачивали 1 н.раствором гидроксида натрия до рН 10-11 по универсальному иНдикатору, прибавляли 10,0 мл гексана, встряхивали в течение 5 мин, цантрифугировали при 2,5 тыс.сб/мин. 35

GqoA органического растворителя отделяли, добавляли к нему 1 каплю 1 н ° спиртового раствора соляной кислоты, перемешивали и испаряли под током воздуха при 60 С. Сухой остаток раст- 40 воряли в 10,0 мл спирта. Параллельно с опытными пробами проводили холостые пробы с мочой, не содержащей но-шпы.

Стандартные пробы готовили путем испарения 0,2 мл О, 1000 -ного раствора 45 но-шпы и растворения сухого остатка . в-10,0 мл спирта. Для сравнения известного способа с предлагаемым сначала измеряли оптические плотности спиртовых растворов нри длине волны 50

305 нм с помощью спектрофотометра

СФ-26 в односантиметровых кюветах

I (Д З ), далее проводили исследования по предлагаемому способу, для этого добавляли ко всему объему спиртового 55 раствора 0,1 мл раствора гидроксида аммония, перемешивали и измеряли оптическую плотность при длине волны

360 нм (Д Эд),- затем добавляли ко всему объему раствора 0,1 мл концентрированного раствора соляной кислоты и вновь измеряли оптическую плотность при длине волны 360 нм (Д ).

Результаты количественного определения но-шпы, выделенной из мочи, приведены в табл. 1.

Как видно иэ табл. t известный способ по сравнению с предлагаемьм дает завышенные результаты (в среднем на 18 ) за счет влияния примесей на, результаты количественного определения.

Пример 2. К 5,0 гизмельченной на мясорубке трупной печени добавляли 0,5 мл 0,1000 -ного раствора но-шпы в 0,01 н. растворе соляной кислоты, тщательно перемешивался и оставляли на 2 ч при комнатной температуре. После этого получали щелочные хлороформные,извлечения по методу

Васильевой А.А. (объем реактивов уменьшали пропорционально навеске биологического материала). Для подщелачивания использовали 1 н. раствора гидроксида натрия. К щелочному хлороформному извлечению добавляли 1 кап-. лю 1 н. спиртового раствора соляной кислоты и органйческий растворитель испаряли под током воздуха при 60 С.

Сухой остаток растворяли в l0,0 мл спирта. Параллельно с опытными пробами проводили холостые пробы с трупной печенью, не содержащей но-шпы.

Стандартные пробы готовились путем испарения 0,1 мл 0,1000%-ного раствора но-шпы в 0,01 н. растворе соляной кислоты и растворения сухого остатка в 10,0 мл спирта. Далее поступали, -как.описано в примере 1.

Результаты количественного определения но-шпы, выделенной из ткани трупной печени по методу А.А, Васильевой, приведены в табл. 2, Из табл. 2 видно, что известный способ по сравнению с предлагаемым рает завышенные результаты {в среднем на 65 ) эа счет влияния примесей.

Формула изобретения

Способ спектрофотометрического ко-. личественного определения но-шпы, выделенной из биологического материала, включающий УФ-спектрофотометрическое

1594427 6 величину дифференциальной оптической ппотности путем регистрации разности абсорбции растворов но-шпы в протонированной и непротонированной формах при длине волны,360 нм. измерение экстракта биологического материала с последующим расчетом по калибровочной кривой, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения специфичности способа, измеряют

Т аб лица

Опытные пробы

0,020 0,438 0,420 181

0,018 0,444 0,426 183

0,027 0,444 0,417 179

0,015 0,432 0,417 179

181+3

Стандартные пробы

0,000

0,000

0,000

0,000

200,0

200,0

Таблица 2

Известный способ Предлагаемый

I способ

Опыт

Г

ll îå T„ " IB„1аа Ttý„j ll„„àj>„

Опытные

163

174

182

187

177+17

Стандартные пробы

0,208

0,204

0,211

0,215

0 210 100 0

100,0

Составитель Т. Малютина

Редактор С. Пекарь Техред М.Ходанич Корректор .П:. Пагай

Заказ 2825 Тираж 538 Подписное .

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

2

4

Х+ х

2

4

Ср.

2

4

Х+ х

2

4

Ср.

0,438

0,450

0,444

0,432

0,420

0,414

0,426

0,414

0,419

0,342

О, 36.6

0,392 ,0,382

211

217

214

209

213+6 пробы

0,063 0 301

0,055 0,310

0,048 0,297

0,063 0,297

0,000 0,225

0,000 0,229

0,000 0,237

0,000 0,233

0,468

0,462

0,462

0,468

0,465

0,238

0,255

0,249

0,234

0,255

0,229

0,237

О, 233

0,231

103

108

106

107+5