Способ определения содержания тирозина в плазме крови

 

Изобретение относится к клинической биохимии и касается способа определения содержания тирозина в плазме крови. Целью изобретения является сокращение времени анализа и повышение чувствительности способа. Способ заключается в осаждении белков из плазмы крови раствором трихлоруксусной кислоты, их удалении центрифугированием, доведении PH насадочной жидкости до 6,8-7,2 фосфатным буфером и измерении интенсивности флуоресценции тирозина при длине волны флуоресценции 300 нм и длине волны возбуждения 270 нм. Чувствительность способа 0,1 нм.

СОЮЗ СО8ЕТСКИК

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) А1 (5l)5 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

Il0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЬГГИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 44857) 3/30-14 (22) 23 09.88 (46) 30„09.90, Бюл. Р 36 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт биотехнологии (72} И.M. Носова, C,В. Обух, Н.B. Филатова и С.Ф. Дрозд (53) 612.398.,192(088.8) (56) ЫепГriend S,, Cooper 1.R. The

chemical estimation of tyrosine and

turamine. J. B3nl. Chem. 1952, v. 196, )(1, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ

ТИРОЗИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ (57) Изобретение относится к клиниИзобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии, и касается способа определения содержания тироэина в плазме крови.

Целью изобретения является сокращение времени анализа и повышение чувствительности способа.

Пример. 0,1-0,5 мп плазмы крови смешивают с равным объемом

20%-ной трихлоруксусной кислоты и подвергают центрифугированию 10 мин при

300 o6/мин 0,1 мл супернатанта смешивают с 3 мл 1/)5 M фосфатного буфера рН 6,8-7,2 и измеряют интенсивность флуоресценции при длине волны 300 им, длина волны возбуждающего света

270 нм. -Параллельно измеряют интенсивность флуоресценции контрольного и стандартного образцов. Контрольная проба содержит 3,05 мп буфера и

0,05 мл 20%-ной трихлоруксусной кисло2 ческой биохимии и касается способа определения содержания тирозина в плазме крови. Целью изобретения является сокращение времени анализа и повышение чувствительности способа.

Способ заключается в осаждении белков из плазмы крови раствором трихлоруксусной кислоты, их удалении центрифугированием, доведении рН надосадочной жидкости до 6,8-7,2 фосфатным буфером и измерении интенсивности флуоресценции тирозина при длине волны флуоресценции 300 нм и длине волны возбуждения 270 нм. Чувствительность способа 0,1 нМ, ты, стандартная 3 мл буфера, 0,05 мп

20%-ной трихлоруксусной кислоты и

0,05 мл стандартного раствора тирозина 0,5 мкМ.

Содержание тирозина рассчитывают по формуле:

Т= 0,5 (мкМ), Т вЂ” концентрация тирозина в плазме крови;

Π— интенсивность флуоресцвнции опытного образца:

«!!!!!!!!» «!!!!!!!!!!!! контрольного образца; !! I! !! !! !! и !! !! !! !! стандартного образца ;

0, 5 — концентрация стандартного раствора тирозина (мкМ} .

Влияние рН фо сфатно го буфера на интенсивность флуор есценции (1 6, 2 70 нм, Л „ 300 нм) образца б еэ б ел4"

Диапазон Время линейной анализа, зависи- мнн мости нМ

Чувстви- Воспротельность, изводи-, нМ мость, %

Способ

Предлагаемый О,I 2

Прототип 30 3,5

0,1-500 1 2

30-800 65

Данные, приведенные в таблице, показывают, что чувствительность-способа повышается, время анализа сокращается, при этом воспроизводимость способа не снижается.

Составитель М. Матвеев

Редактор Н. Горват Техред М,дидык Корректор С Черни Заказ 2906 Тираж 511 Подпи с но е

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 ковой фракции плеве крови следующее рН I ф„

Зв5 бэ4

5,6 9,4

6,6 27,3

6,8 . 29,2

7,2 28,6

7,8 33,5 .

9,2 44 5

Пример. Клиническое применение способа.

При поступлении в клинику у больного А. из локтевой вены в гепаринизированную пробирку взяли 2 мл крови., 0,5 ìï отцентрифугированной плазмы перемещали с равным объемом 20%-ной трихлоруксусной кислоты. Центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин, 0,1 мл супернатанта смешивали в кварцевой- кювете с 3 мп фосфатного буфера рН 6,8. Контрольная кювета содержала 3 мп буфера и 0,05 мл 20%-ной

ТХУ, стандартная — 3 мп буфера, г5

0,05 мп 20%-ной ТХУ и 0,05 мп 0,5 мкМ раствора тирозина. Измерили интенсивность флуоресценции образцов на спектрофлуориметре MPI — 4 при Мваэк= 270 нм и М ф =300 нм. Она составила для контрольного 2, для стандартного

54, для опытного 1 7,относительных единиц флуоресценции. Содержание тирозина в плазме крови больного А. рассчитали по. формуле:

0" К 1 7-2

Т= †- 0 5 = — 0 5=0 15 мкМ

Ст-К 54-2

Сопоставление характеристик предлагаемого способа и прототипа представлено в таблице.

Формула изобретения

Способ определения содержания тирозииа в плазме крови, включающий осаждение белков раствором трихлоруксусной кислоты и удаление их центрифугированием, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени анализа и повышения чувствительности способа, безбелковую фракцию плазмы растворяют в фосфатном буфере с рН 6,8-7,2, а содержание тирозина измеряют по интенсивности его собственной флуоресценции при длине волны

300 нм и длине волны возбуждения

270 нм.