Способ реверсии l-форм микобактерий туберкулеза

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к диагностике туберкулеза. Цель изобретения - упрощение и ускорение способа. Исследуемый материал подращивают в полужидкой питательной среде для микобактерий, затем культуру пересевают на плотную яичную среду, например Левенштейна-Йенсена или Финна-П. Посев осуществляют однократно, локально в центр среды, количество посевного материала 0,1-0,2 мл. Ежедневно готовят окрашенные микроскопические препараты для выявления кислотоустойчивых форм микобактерий туберкулеза. При исследовании свежей культуры, начиная с 2-4 сут, происходит реверсия L-форм. На 6-7 сут процесс реверсии завершается. 1 з.п.ф-лы.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (112

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

llO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4628531/30-13 (22) 30.12.88 (46) 07.11.90. Бюл. Ф 41 (7i) Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза (72) И.P. Дорожкова и Г.М. Николаева (53) 516.8. 093. 31 (088 .8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 1247419, кл. С 12 N 1/00, 1984. (54) СПОСОБ PEBEPCHH LOOP# ННКОЕАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА ю (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к диагностике туберкулеза. Цель изобретения — упрощение и ускорение споИзобретение относится к медицин. ской микробиологии, в частности к диагностике туберкулеза.

Цель изобретения — упрощение и ускорение способа.

Способ заключается в следующем.

На чашке Петри с плотной личной средой Левенштейна-Йенсена или ФиннаII платиновой гетлей очерчивают окружность диаметром приблизительно

1,5 см. Стерильной пипеткой набирают культуру L-форм, выращенную из патологического материала на модифицированной среде Школьниковой, и наносят на очерченный круг в количестве

0,1-0,2 мп. Чашку Петри. помещают в плотно закрытый полиэтиленовый мешок или пластиковый контейнер во избежание высыхания среды и инкубируют при

37 С в течение 7 сут. Через каждые сутки с поверхности среды в участке (Д1)0 .С 12 N 1/00 С 12 0 1/02//

//(С 12 N 1/00, С 12 R I:32) 2 соба, Исследуемый материал подращивают в полужидкой питательной среде для микобактерий, затем культуру пересевают на плотную яичную среду, например Левенштейна- Йенсена или

Финна-II. Посев осуществляют однократно, локально в центр среды, количество посевного материала О, 10,2 мл. Ежедневно готовят окрашенные микроскопические препараты для выявления кислотоустойчивых форм микобактерий туберкулеза. При исследовании свежей культуры, начиная с

2-4 сут, происходит реверсия 1.- -форм.

На 6-7 сут процесс реверсии завершается. 1 з.п. ф-лы. посева, строго соблюдая правила асептики, берут мазок-отпечаток. Иазок окрашивают по. Цилю-Нильсену и микроскопируют с иммерсионным объективом (х 90) .

Начиная со 2 сут (иногда на 46 сут) на фоне некислотоустойчивых синих шаров Е-форм появляются кислотоустойчивые(зерна и палочковидные структуры. В некоторых случаях палочковидные формы сначала могут быть некислотоустойчивыми (синий цвет), затем в них появляются красные кислотоустойчивые зерна и происходит формирование кислотоустойчивых микобактерий

Для по.(учения культуры ревертанта после недели культивирования. на чашке

Петри соскоб с поверхности питательной среды в месте посева переносят в жидкую среду Ыкольниковой с 10Х.

1604841 сыворотки крупного рогатого скота или непосредственно на косяки с яичной средой Левенштейна-Йенсена или Финна-II.

Пример 1. Берут культуру

L-форм микобактерий, выделенную из мокроты больного. Культуру выращивают на полужидкой среде Школьнико.— вой в модификации Дорожковой. В мазке с исходной культуры при окраске по Пилю-Нильсену обнаружены зернистые шары L-форм микобактерий, пред. ставляющие округлые образования синего цвета размером около 5 мкм без ядра. Кислотоустойчивые микобактерии не обнаружены. Производят посев культуры на чашку Петри с яичной средой

Левенштейна-Йенсена. Через каждые сутки готовят мазки-отпечатки с места посева. Уже через 24 ч в единичных шарах обнаруживают зернистые кислотоустойчивые микобактерии.

Для проверки воспроизводимости результата способа опыт повторен через 2 мес: произведен повторно посев той же культуры, хранившейся в холодильнике, на чашку Петри со средой

Левенштейна-йенсена, Через 1 сут реверсии не наблюдалось, через 4 сут в зернистых шарах ?.-форм обнаружены кислотоустойчивые зерна, а через

6 сут и кислотоустойчивые палочки.

Этот пример демонстрирует воспроизводимость результатов способа с некоторым удлинением времени реверсии, что может быть обусловлено длительным хранением культуры L-форм, приведшим к снижению ее жизнеспособности

После пересева с чашки Петри на жидкую среду Школьниковой, а затем после недели культивирования — на косяки с плотной средой ЛевенштейнаЙенсена получена культура микобактерий, дающая рост в виде гладких, пигментированным, оранжевых колоний, которая была идентифицирована как скотохромогенная атипичная культура.

Одновременно иэ мокроты больного получен рост типичной культуры микро. бактерий туберкулеза. Полученные данные о наличии у больного смешанной культуры микобактерий туберкулеза и

L-форм микобактерий, реверсирующих в атипичные микобактерии, позволяют изменить тактику химиотерапии.

Пример 2. Культуру Ь-форм, микобактерий, выделенную иэ лимфатического узла ребенка, засевают на чашку Петри с плотной яичной средой

Финна-II. При изучении мазков-от-печатков, полученных через 1 и 2 сут, обнаружены лишь скопления синих некислотоустойчивых зернистых шаров.

Через 3 сут зернистость теряет четкость очертаний и распадается на си10 ние гомогенные облаковидные скопления, на фоне которых появляются кислотоустойчивые зерна. Через 4 сут в мазках выявляют кислотоустойчивые палочки. Через 20 дн.после пересева на косяки со средой Финна-II получен типичный рост микобактерий, идентифицированных как микобактерии туберкулеза человеческого вида.

При гистологическом исследовании лимфатического узла, иэ которого получен рост Е-форм микобактерий, реверсировавших затем в микобактерии туберкулеза, в нем обнаружены лишь казеозные массы без признаков актив25 ного туберкулеза.

Пример 3. Культуру L 4oðì, выделенную из экссудата больного (диагноз — плеврит неясной этиологии, ВК-), засевают на чашку Петри со средой Левенштейна-Йенсена. Последующей микроскопией мазков-отпечатков с чашки выявляют появление кислотоустойчивых зерен и зернистых форм микобактерий на 4 сут после за35 сева. После высека на яичные среды получен рост бактерий туберкулеза человеческого вида, Реверсия подтверждает специфическую этиологию процесса, позволяет уточнить диагноз

4> и химиотерапевтическую тактику, 1

По сравнению с известным способом, предусматривающим проведение пассажей на куриных эмбрионах, предлагаемый

45 способ более прост, не требует экспериментальных животных и позволяет в более ранние сроки идентифицировать

L-формы микобактерий, Формула изобретения

1. Способ реверсии L-форм микобактерий туберкулеза, включающий посев исследуемого материала в полужидкую питательную среду, пересев иинкубирова,55 !ние культуры,ежедневный бактериоскопиолеский контроль инкубируемой.культуры и определение наличия реверсии по появлению кислотоустойчивых форм, 1604841 6 культуру вносят в количестве 0,10,2 MII JIOKBJISHO °

2. Способ по п. 1, о т л и ч а5 ю шийся тем, что в качестве элективноь среды используют среду

Левенштейна-Йенсена или Финна-II., отличающийся тем,что, с целью упрощения и ускорения способа, пересев культуры осуществляют однократно на плотную элективную среду для микобактерий, при этом

Составитель Г. Смирнова

Техред M.Õoäàíè÷

1(орректор Л.Патай

Редактор Н.Яцола

Заказ 3434 Тираж 495 Подписное

ВНИИПИ Государстве нногс .митета по изобретениям и открытиям

113035,: ..<.ква, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно — издательс кий комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101