Штамм микроскопического гриба aspergillus теrrеus - продуцент фосфопротеин фосфатазы

 

Изобретение относится к ферментной отрасли биотехнологии и может быть использован для получения фермента фосфопротеин фосфатазы, применяемого в пищевой промышленности и как полуфабрикат в клинической и экспериментальной медицине и фармакологической промышленности, а также препаративной биохимии. Цель изобретения - выделение штамма микроскопического гриба, обладающего способностью к биосинтезу фосфопротеин фосфатазы в погруженной культуре и замена источников сырья животного происхождения на микробиологическое. Штамм ASPERGILLUS TERREUS ВКПМ F-394 получен путем рассева и является моноконидиальным вариантом исходной культуры. Штамм является облигатным аэробом, термотолерантом с короткой лаг-фазой, быстрым закислением культуральной жидкости (24 ч PH 3,5 при исходной PH среды 6,7), что предохраняет его при культивировании от бактериальной инфекции. Активность фосфопротеин фосфатазы в культуральной жидкости 620-690 ед/мл, удельная активность фермента в препарате 180-197 ед/мг белка.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

1 2 А1

119) (Н1 (51) 5 С 12 N 1/14 9 16

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4481951/30-13 (22) 30. 05. 88 (46) 23 ° 03. 90. Бюл. М- 11 (71) Научно-производственное объединение "ВНИИбиотехнология" (72) Т. Б. Чернягина, О. H. Быкова, Г. А. Громова и А. В ° Чернягин (53) 577. 15 (088. 8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 1182078, кл. С 12 N 9/00, 1984. (54) ШТМ&1 11ИКРОСКОПИЧВСКОГО ГРИБА

ASPERGILLUS TERREUS — ПРОДУЦЕНТ ФОСФОПРОТЕИН ФОСФАТАЗЫ (57) Изобретение относится к ферментной биотехнологии и может быть использовано для получения фермента фосфопротеин фосфатазы, применяемого в пищевой промышленности и как полуфабрикат в клинической и экспериментальной медицине и фармакологической промышленности, а также препаративной

Изобретение относится к фермент— ной микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм микроскопического гриба, который может быть использован для получения фермента фосфопротеин фосфатазы, применяемого в пищевой промышленности и как полуфабрикат в клинической и экспериментальной медицине и фармакологической промышленности, а также препаративной биохимии.

Целью изобретения является выделение штамма микроскопического гриба, обладающего способностью к биосинтезу фосфопротеин фосфатазы в погруженной культуре и замена источников сырья биохимии. Цель изобретения — выделение штамма микроскопического гриба, обладающего способностью к биосинте3у фосфопротеин фосфатазы в погруженной культуре и замена источников сырья животного происхождения на микробиологическое. Штамм Aspergillus

terreus ВКПИ F-394 получен путем рассева и является моноконидиальным вариантом исходной культуры. Штамм является облигатным аэробом, термотолерантом с короткой лаг-фазой, быстрым закислением культуральной жидкости (24 ч рН 3 5 при исходном рН среды 6,7), что предохраняет его при культивировании от бактериальной инфекции. Активность фосфопротеин фосфатазы в культуральной жидкости

620-690 ед/мл, удельная активность фермента в препарате 180-197 ед/мг белка. животного происхождения на микробиоло- Ql гиче ское. Ьюв

Штамм микроскопического гриба

Aspergillus terreus выделен из почв степного участка Приокского террасного заповедника. Предлагаемый штамм

Aspergillus terreus BKIIl F-394 получен путем рассева и является моноконидиальным вариантом исходной культуры.

Культивирование Aspergillus terreus шт.87- 19 проводили глубинным способом на питательной среде, содержащей углеводы, минеральный и органический азот и микроэлементы. Выращивание осуществляли в течение 66-72 ч при 35 С. Культуральную жидкость отде1551732 ляли от мицелия с помощью фильтрования. Фильтрат высушивали лиофильно.

3а единицу активности фосфопротеин фосфатазы принимали такое количество фермента, при действии которого на субстрат в стандартных условиях образуется 1 мкмоль фосфора.

Активность фосфопротеин фосфатазы в культуральной жидкости 620-690 ед/мл10 удельная активность фермента в препарате 180-197 ед/мг белка.

Морфологические признаки. Мицелий, выращенный на агаризованной среде

Чапека-аракса, имеет в диаметре 2-3 мкм,15 слабасептированный, мелкозернистый.

Конидиеносцы длинные ф 4,8-7,4 мкм, конидиальные головки большей частью не радиального строения, стеригмы двурядные, конидии в цепочках, на вершине конидиальной головки образуют хохолок. Головка конидиеносца в

17,6-12,4 мкм, конидии в 9 2,2-2,5 мкм, поверхность гладкая. Колония к 4-м суткам при 30 С быстро растет и да- !5 стигает в Ф 27-30 мм, приподнята над субстратом, бежевого цвета, кольцеобразно имеющего разные оттенки, сильная радиальная складчатость. С обратной стороны колония белая с лимонножелтой пигментацией, сильная радиальная складчатость. Интенсивное спороношение начинается на 4-5-е сутки раста.

Культуральные признаки. На синтетической агаризованной среде Чапека

35 культура при 30 С растет быстро, колонии через 24 ч роста имеют в диаметре 2-3 мм, Мицелий белый, пушистый.

Через 48 ч роста диаметр колонии достигает 20 мм. Мицелий сильно приподнят над субстратом. Центр колонии имеет кратерообразную вершину слабопалевого цвета. Остальная часть колонии белоснежная, края неровные, бес- 45 цветные. С обратной стороны колония складчатая, в центре светло-желтая, к краю бежевая, сам край бесцветный.

На 3-и сутки диаметр колонии достигает 27-30 мм. Центральная часть ко50 лонии сильно поднята над субстратом, морщинистая, светло-желтого цвета, напоминает "плато" диаметром 17 мм.

Вокруг "плато" кольцом белая, пушистая культура с зубчатымн краями, слегка морщинистая, шириной 3-4 мм, затем бесцветная полоса культуры шириной

2-3 мм с неровными краями. Обратная сторона колонии: центральная часть— складчато — морщинистая, желтого цвета, остальная часть — колонии слаба-бежевая, сильная складчатость. На 4-е сутки роста никаких культуральных изменений не произошло. о

При 40 С на той же среде через 24 ч роста колонии достигают в диаметре

5 мм. Белый, пушистый мицелий слегка приподнят над субстратом. Через 48 ч роста диаметр колонии достигает 5052 мм. Колония сильно приподнята над субстратом, ярко выраженная радиальная складчатость, вершина кратерообразная. Внутри кратера светло-желтая окраска, по краю кратер бежевый, остальная часть колонии белая или светло-палевая. С обратной стороны колония радиально крупноскладчатая в диаметре 10-12 мм с желтой пигментацией, па краям — палевая; края колонии неровные, колония плотная, войлочная.

На 3-и сутки роста диаметр колонии

37-38 мм, колония приподнята над субстратом; центральная часть светлобежевого цвета с обильным количеством конидий, затем идет эона шириной

2 мм светло-палевого цвета, переходящая в зону белого цвета, край бесцветный, неровный, сильная радиальная складчатость. Обратная сторона колонии более менее равномерного лимонного цвета с переходом в белый по краям колонии, сильная радиальная складчатость.

На е сутки роста диаметр колонии достигает 44-52 мм. Приподнятость колонии над субстратом исчезла. Радиальная складчатость еще более усилилась. Центр колонии темно-бежевый, Окраска колонии меняется кольцеобразно: центр диаметром 15 мм темно-бежевый, первое кольцо толщиной 7 мм равномерно светло-бежевое, второе кольцо толщиной 7 мм равномерно светло-бежевое, второе кольцо толщиной

3 мм желто-бежевое, третье кольцо толщиной 4 мм светло-бурого цвета, четвертое кольцо толщиной 3 мм белого цвета.

В последующие 10 сут характер колоний не изменился.

При углубленном культивировании на сусле 8 Б через 20-24 ч роста при температуре в интервале 30-40 С обнаружены клетки типа экзоспор, шаровидной формы с четкой оболочкой диаметром 3-6 мм, которые не исчезли в проформула изобретения

Штамм микроскопического гриба

3g Aspergillus terreus ВКПИ F-394 продуцент фосфопротеин фосфатазы.

Составитель И. Привалова

Техред Л.Сердюкова Корректор О. Кравцова

Редактор H. Рогулич

Подписное

Заказ 308

Тираж 493

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательскии комбинат "Патент", r.Óærîðoä, ул. Гагарина, 101

5 15 цессе культивирования. При глубинном культивировании культура склонна к образованию пиллет.

Отношение к углеродному питанию: ассимилирует крахмал, глюкозу, мальтоэу, сахароэу, лактозу, галактоэу.

Отношение к азотному питанию: растет на нитратах, аммонийных неорганических солях, органических источниках азота.

Отношение к кислороду: облигатный аэро б.

Отношение к температуре; термотолерант, температурный оптимум роста

30-40ьС.

Отношение к кислотности среды: растет при рН 3,0-7,0, рН оптимум

3,5-6, О.

Пример. В колбу емкостью

750 мл наливают 100 мл питательной среды следующего состава, 7.: крахмал кукурузный 3; ВВК О, 15; МАКО О, 1; Н 41103 )2 804

NaC1 О, 3; вода — остальное °

Затем засевают конидиалъной суспензией А. еггеиз шт.87-19. Культивироо вание проводят при 35 С, в условиях аэрации на качалке при 180 об/мин в течение 72 ч. Активность фермента фосфопротеин фосфатазы 689,8 ед/мл.

51732 6

Таким оораэом, выделенный штамм обладает способностью синтез :ровать фосфопротеин фосфатаэу (К.Ф.3.1.3.16), 5 образование которой ранее не отмечалось у микроорганизмов. Гриб А.terreus шт.87-19 представляет собой новую культуру со стойкими морфологическими и биохимйческими признаками и свойствами.

Использование предлагаемого штамма дает возможность получать новый фермент фосфопротеин фосфатазу для те нической микробиологии. Микроорганизм является облигатным аэробом, термотолерантом с короткой лаг-фазой, быстрым закислением культуральной жидкости (24 ч рН 3,5 при исходном рН среды 6,7), что предохраняет его

20 при культивировании от бактериальной инфекции. Склонность к образованию пиллет ускоряет процесс отделения биомасСы от культуральной жидкости.

Весь этот комплекс свойств делает

25 микроорганизм очень технологичньм.