Штамм бактерий sтrертососсus fаесiuм, используемый в качестве эталона для оценки активности микробов- антагонистов менингококка

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при отборе высокоактивных в отношении менингококка микробов - антагонистов. Цель изобретения - выявление штамма, обладающего выраженной стабильной способностью подавлять рост менингококка. Штамм выделен из слизи носоглотки бактерионосителя и депонирован под номером ГИСК N 183. Антименингококковую активность штамма проверяют методами отсроченного антагонизма и предельных разведений. Штамм обладает высокой антагонистической активностью, что отражается на скорости ингибиции роста менингококков.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

С 12 N 1/20, С 12 О 1/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPGHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (217 4628406/30-13 (22) 29.12.88 ,(46) Я7.11.90. Бюп. № 41 (71) Харьковский научно-исследовательский институт микробиологии, вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (72) Е.М. Бабич, И.Б. Васильева, С.А. Деркач, В.И. Белозерский и А.И. Дзюба. (53) 576.8.093. 1(088.8) (56) Журнал микробиологии, зпидемиологйи и иммунобиологии, 1981, № 10, с. 38-41. (54) БЦАММ БАКТЕРИЙ STPKPTOCOCCUS

FAECIUM ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ.

ЭТАЛОНА ДЛЯ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ МИКРОБО — АНТАГОНИСТОВ ИЕНИНГОКОККА

Изобретение относится к медицин- ской микробиологии и может быть использовано при отборе высокоактивных в отношении менингококка микробовантагонистов.

Цель изобретения — выявление штамма, обладающего выраженной стабильной способностью подавлять рост нейссерий.

Штамм;.Streptococcus faecium »j делен из смеси носоглотки бактерионосителя. Депонирован в коллекции

ГИСК им. А.А. Тарасевича под номером

183 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-формологические признаки. Полиморфные, грамположительные кокки,,располагаются попарно и небольшими скоплениями. На сы„„Я0„„1604846 А 1

2 (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при отборе высокоактивных в отношении менингококка микробов— антагонистов. Цель изобретения выявление штамма, обладающего выраженной стабильной способностью подавлять рост менингококка. ITBMH выделен из слизи носоглотки бактерионо» сителя и депонирован под номером

ГИСК ¹ 183. Антименингококковую активность штамма проверяют методами отсроченного антагонизма и предельных разведений. Штамм обладает высокой. антагонистической активностью, что отражается на скорости ингибиции роста менингококков. вороточном агаре с 1% глюкозы образует мелкие.и среднего размера белые плотные колонии, вокруг которых изменяется цвет среды (белесоватый оттенок). На кровяном 5х-ном агаре зона гемолиза отсутствует. На МПБ дает диффузное помутнение и неболь- © шой осадок ° Растет в 6,5%-ном солевом бульоне и на МПБ с 10% и 40% желчи.

На среде с 2,3,5-ТТХ при концентрации 0,01% вырастают бесцветные ко.лонии

На среде с теллуритом калия (0,02%) вырастают колонии серого цвета.

Физиолого-.биохимические свойства, Факультативный аэроб. Неподвижньп».

Сорбит не ферментирует. Метиленовый синий в молоке не обесцвечивает.

1604846

Антагонистическая активность—

15 задерживает рост менингококков при выращивании на плотной и в жидкой средах. В жидкой среде оказывает ингибирующее действие в течение 15 мин

5 при соотношении его к тест-культуре менингококка 1: 1-1: 100.

П р и м e р 1. штамм Р 183 засевают в виде полоски на сывороточный агар Хоттингера и инкубируют в течение 48 ч при 37 С. Затем подсевают от края чашки к антагонисту перпен. дикулярным штрихом менингококки серогрупп А, В, С (эталонные штаммы

N - 1096, N - 23247, Р 0638) и помещают в термостат. Через 24 ч измеряют зону отсутствия роста культуры менингококка (в мм) по нанесенному штриху.

П р и M e p 2 . Агар овую культуру штамма Р 183 и культуру менингококка сеют на скошенный 27-ный агар, приготовленный на переваре Хоттингера и содержащий 207 лошадиной сыворотки и 17 глюкозы. Через 24 ч выросшие 25 чистые культуры смывают физраствором, из суспензий готовят взвесь (1 млрд м.кл/мл) . Берут два ряда по 7 стерильных пробирок, в каждую иэ которых наливают по 0,9 мл бульона Хоттингера с 207. лошадиной сыворотки. Стандартизованную взвесь культуры штамма N 183 вносят в объеме 0,1 мл в первую пробирку, а затем последовательно делают ряд десятикратных разведений. Таким образом, получают кон-, центрацию микробных клеток штамма

N - 183 от 10 до 102 в 1 мл.

Аналогичным образом разводят и исследуемую взвесь культуры менингококка.

Из приготовленных разведений культур делают контрольные высевы по 0,1 мл на сывороточный агар Хоттингера с 17. глюкозы. Через 24 ч определяют YOE (из разведения 10 м., з кл, менингококка) .

После проведения контрольных посевов во все пробирки с тест-штам1 мом добавляют по 0,1 мл основной сус-. пензии культуры менингококка из расчета 10® м.кл./мл бульона, сме50 шанную культуру инкубируют при

37 С. В процессе инкубирования проводят высевы по 0,1 мл на три чашки с сывороточным агаром и 17. глюкозы через- 15 мин, 1 ч и 24 ч. Выросшие культуры микроскопируют и изучают биохимические свойства. Подсчет выросших колоний менингококка осуществляют с помощью оксидазного теста, Пример 3. Для сравнительной оценки антименингококковой активности свежевыделенных штаммов-антагонистов используют носоглоточную микрофлору, выделенную от 10 переболевших лиц. В первичных посевах отбирают колонии доминирующих культур и изучают их антагонистическую активность в отношении менингококка методом отсроченного антагонизма. Для этого используют один штамм менингококка серовара, свежевыделенный от

«»« o генерализованной формой менингококковой инфекции, и эталонный музейный штамм менингококка того же серовара (V- 75), Уровень чувствительности взятых штаммов к ингибирующему действию антагонистов предварительно проверяют с помощью штамма Р 183. Последний засевают в виде полоски на чашку с сывороточным агаром и культивируют в течение 48 ч при 37 С, после чего к выросшей культуре подсевают перпендикулярными штрихами вышеупомянутые культуры менингококков и вновь инкубируют в течение суток.

Учет результатов проводят по величине зон задержки роста менингококков, Из двух исследованных культур более чувствительной является свежевыделенная культура (средняя задержка роста 17+1,4 мм; средняя задержка роста штамма Р -75 — 10+2 мм) .

В жидкой питательной среде свежевыделенный штамм менингококка при совместном выращивании с S.faecium

N 183 погибает .в течение 15 мин, а N - 75 — через 1 ч.

Полученные параметры чувствительности используют как параметры сравнения при дальнейшем исследовании.

Из 10-ти изученных культур наличие антименингококковой активности выявлено у двух культур. Одна из них при проверке показала слабую антагонистическую активность в отношении менингококков — зоны задержки роста 1.1 мм и 5 мм для свежевыделенной культуры и Р 75 соответственно.

°

Другая оказалась высокоактивнойзоны задержки роста соответственно

16 мм и 8,5 мм, т ° е.. практически на уровне штамма Р 183.

Далее определяют скорость проявления ингибирующего действия отобранных

Составитель Г. Смирнова

Техред И.Ходанич Корр ектор А. Ос ауле нко

Редактор А. Шандор

Заказ 3434 Тираж 498 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, .осква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101

5 . 604846 б двух культур методом серийных разве- зовать его в качестве эталона при дений (пример 2) . проведении сравнительной оценки анВьивленная ранее высокоактивная тагонистической активности носоглокультура-антагонист по скорости подав- точной микрофлоры и отбора высоколения роста менингококков уступает

5 активных штаммов-антагонистов в отноэталонному и штамму Р 183: при раз- шенин менингококка. ведении 1:100 ингибирующий эффект к свежевыделенному штамму проявляет- Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я ся через 1 ч, а к штамму Р 75 — через

24 ч ° Другая вьивленная культура не Штамм бактерий Streptococcus

Использование штамма Р 183 со ста- микробов — антагонистов менингококка. бильными свойствами позволяет исполь