Способ получения бактериального лектина, специфичного к сиаловым кислотам
„„SU„„1622397 А 1
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
РЕСПУБЛИН
И1)5 С 12 Р 19/04//(С 12 Р 19/О4, С 12 R 1;125) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н А STOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУААРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР (21) 4471130/13 (22) 01.08.88 (46) 23,01.91. Бюл. Г 3 (71) Институт микробиологии и вирусо" логии им. II.К,Заболотного (72) В.С.Подгпрский, 3,A.Коваленко, И.А.Симоненко и R.È.Ëàõòèí (53) 547 9(088.8) (56) Лахтин В.М.Лектины в исследовании белков и углеводов./Итоги науки и техники, ВИНИТИ: Биотехнология, 1987, с.288.
Бондарчук А.А., Ах-.щкий T.I0. Характеристика фермеитативного комплекса иэ Вас.mesenter icus.-Микробиологический хурнал, 1981, 40, Р .6, с.687-690 ° (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЬАКТЕРИАЛЬНОГО
ЛЕКТИНА, СПЩИФИЧНОГО К СИАЛОВЬ М КИСЛОТАМ (57) Изобретение относится к микро» биологической промьилленности,я именно
Изобретение относится к микробиологической промынленнпсти, а именно к способу получения бактерияльного лектина, специфичного к сиялоиым кисло" там.
Пель изобретения — повышение выхода целевого продукта и упрощение способа.
В качестве источника сырья используется непятогенная культура Raccillus mesentericus ВКПМ В-?466, у которой обнарухеня способность к биосинтезу внеклеточных сиалоспецифичных лектинов ° Продуцент выращивается глубинным способом на среде, содер кащей в качестве биостимулятора пред2 к способу получения бактериального лек тина, специфичного к сиялпвым кислотам. Пель изобретения — упрочение спп соба получения бактерияльного сиялоспецифического лектиня, а тякхе увеличение выхода целевого продукта. Сущность изобретения заключается я том, что, в качестве источника сырья используют непатогенную культуру Raccillus mesentericus RKIN В-2466, способную синтезировать янеклеточные сиялпспецифичные лектины. Продуцент выращивают в течение 14-16 ч глубинным способом на полусинтетической среде с биостимулятором - яятплиэатом xs пивных дрохжей; Цепевой продукт с вы- с. ходом 46,8-60% получают псахдением культуральной хидкости сульфатом аммония при насыщении 60-70Х, диализом и хранят в зяморохенном состоянии при
-!О С. 1 з.п.ф-лы. почтительно автплизат иэ пивных дроххей, что сокращает время культивирования до 14-16 ч по сравнению с 21—
24 ч выращивания на среде, содерхащей автолизат из хлебопекярских дроххеа. Препарат вьв>еляют осахдением сериокислым яммпнием при насыщении
60-70Х и очисткой диализом, хранят в о эаморохеином состоянии при -1.0 С. Выход целевого прпдуктя 46,87. — 607..
Пример 1 ° Бактерии Bacilkus mesentericus ВКПМ В-2466 выращивают глубиниык способом ня качалках (160 пб./мин) в течение 21-24 ч прй 37 С в колбах Эрленмейеря со
100 мл питательной среды следующего
1622397
Составитель О.Скородумова
Техред П,Олийнык Корректор С.йевкун
Редактор Н.Яцола
Заказ 88 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям н открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,!01 состава, г/л: желатин 10,0, КНРО
1,6, М8$0 0,75, Еп$0 0,25, FeSO i
t 7HyO 0,02, NaCl 0,02, (NH<)z $0д
0,05, СаС1 0,08, мальтоза 1,0, автолиэат из хлебопекарских дрожжей
1,5. Бактериальную биомассу отделяют центрифугирояанием при 6000 g в течение 20 мнн. К культуральной жидкости (1 л) прибавляют 242,03 г 10 (NHg)g S0) (40X насыщения) и оставляют на ночь при 4 С. Выпавший хлопьевидный осадок отделя1от центрифугироваиием при 6000 8 в течение 25 мин, растворяют в 5 мл дистиллированной 15 воды и диализуют 6-8 ч против водопроводной воды при комнатной температуре, затем ночь — против дистиллированной воды при 4 С, осадок отделяют центрифугированием при ЯООО 8 20 в течение 15 мин, супернатант хранят в замороженном состоянии при -10 С.
Выход целевого продукта по активности 2,6Х.
Пример 2. Условия выращивания, питательная среда и выделение бактериального лектина аналогичны приведенным в примере 1, sa нсклю" чением сульфата аммония, используемого для осаждения препарата: на 1 л 30 культуральной жидкости (КЖ) 390,0 г (NH4) SOg (60X насыщения). Выход целевого продукта по активности 16,1Х.
Пример 3. Условия выращивания, питательная среда, вселение 35
I бактериального лектина такие же, как в примере 1, за искюпочением количества сульфата аммония, используеиого для осаждения лектина: на 1 л
КЖ добавляли 472,0 г (NH4) SOq (70X 40 насыщения). Выход целевого продукта по активности 33,0Х.
Пример 4. Условия культивирования продуцента и выделение лектина (40X насыщения сульфатом аммония) 45 аналогичны приведенным в примере 1, В питательной среде в качестве биостимулятора вместо автолиэата из хлебопекарскнх дрожжей испольэовали автолиэат из пивных дрожжей из такого же расчета. На 14-16 ч роста продуцента из культуральной жидкости (после отделения биомассы) проводили выделение сиалоспецифичного лектина, как описано в примере l. Выход целевого продукта по активности 2,2Х.
П р н и е р 5. Условия выращивания и питательная среда с автолизатом иэ пивных дрожжей аналогичны приведенным s примере 4. Лля осаждения препарата из 1 л КЖ испольэовали
390,0 r сернокнслого аммония (607, насыщения). Выход целевого продукта по активности 46,87.
Пример 6. Условия выращивания и питательная среда с автолизятом иэ пивных дрожжей такие же, как и в примере 4. Для осаждения сиалоспецифнчного бактерияльного лектнна иэ
1 л КЖ использовали 472,0 г сернокнслого аммония (707 насыщения). Выход целевого продукта по активности 60Х.
Дальнейшее уяеличение процента насыцения (ИН ) SOy не ведет к увеличению выхода целевого продукта, Формула изобретения
1, Способ получения бактериального лектина, специфичного к сналовым кислотам, включающий выращивание бактериальной культуры-продуцента глубинным методом на питательной среде с биостимуляторами, отделение биомассы, осаждение препарата сернокнслым аммонием и очистку диализом, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта н упрощения- способа, в качестве культуры-продуцента используют штамм бактерий Bacillus mesentericus ВКПМ В-2466 °
2. Способ по и. 1, отличающ н и с я тем, что при осаждении используют сернокислый аммоний при степени насыщения 60-70Х.
