Способ определения жизнеспособных протосколексов эхинококка в пробе in viтrо

 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано в исследованиях по экспериментальной терапии эхинококкозов, Цель - ускорение и повышение воспроизводимости способа. Для этого на каплю исследуемого материала наносят каплю глицерина, покрывают покровным стеклом и микроскопируют при малом увеличении. У живых протосколексов под влиянием глицерина наблюдается контрактура тела. При этом протосколексы уменьшаются в размере в 1,5 - 2 раза по сравнению с контролем, утрачивают округлую форму, известковые тельца становятся невидимыми. Указанные изменения наступают через 1 - 2 с и наблюдаются в течение 30 - 40 мин после добавления глицерина. Способ прост, быстро выполним, хорошо воспроизводим. k

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (s )s А 61 В 10/00

ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4414753/14 (22) 22,04.88 (46) 23.03.91. Бюл,N 11 (71) Институт медицинской паразитологии и тропической медицины им.Е.И.Марциновского и Всесоюзный научный центр хирургии АМН СССР (72) Ф.П,Коваленко, Г,А.Шатверян, П.С.Хакбердиев, С.М. Расулов, Т. Е. Буланова, О.П.Данько и Е.Г.Абдримов (53) 615.475 (088.8) (56) Acta Veterinaria Academiae Scientiarum

HungarIcae, 1970, vol.20, М3, р. 339 — 351. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ ПРОТОСКОЛЕКСОВ ЭХИНОКОККА В ПРОБЕ IN VITRO

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано в исследованиях по экспериментальной терапии эхинококкозов, Цель изобретения — ускорение и повышение воспроизводимости способа.

Способ осуществляется следующим образом.

На предметное стекло помещают две капли взвеси исследуемьix протосколексов в физиологическом растворе. Первая капляконтрольная, вторая — тестируемая, С помощью фильтровальной бумаги из второй капли удаляют физиологический раствор и наносят на протосколексы 1 каплю глицери., . Ж 1635961 А1 (57) Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано в исследованиях по экспериментальной терапии эхинококкозов, Цель — ускорение и повышение воспроизводимости способа. Для этого на каплю исследуемого материала наносят каплю глицерина, покрывают покровным стеклом и микроскопируют при малом увеличении. У живых протосколексов под влиянием глицерина наблюдается контрактура тела. При этом протосколексы уменьшаются в размере в 1,5 — 2 раза по сравнению с контролем, утрачивают округлую форму, известковые тельца становятся невидимыми.

Укаэанные изменения наступают через 1—

2 с и наблюдаются в течение 30 — 40 мин после добавления глицерина. Способ прост, быстро выполним, хорошо воспроизводим. на, Обе капли покрывают покровными стеклами и тотчас подвергают микроскопии при малом увеличении микроскопа. У живых протосколексов под влиянием глицерина наблюдается контрактура тела, При этом протосколексы уменьшаются в размере в

1,5 — 2 раза по сравнению с контролем, утрачивают округлую форму, приобретают неправильные очертания, паренхимы тела протосколексов просветляются, известковые тельца становятся невидимыми. По внешнему виду протосколексы напоминают ! кристаллы. Указанные изменения наступают через 1 — 2 с и наблюдаются в течение

30- 40 мин после добавления глицерина. У погибших протосколексов при добавлении

1635961

Формула изобретения

Способ определения жизнеспособных протосколексов эхинококка в пробе in vitlo. включающий обработку пробы химическим агентом, микроскопию, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения воспроизводимости способа, пробу обрэбэтывают глицерином и при наличии контрактуры тела протосколекса определяют его жизнес пособн ы м.

Составитель И. Литвиненко

Техред Э.Цаплюк Корректор Л.Алексеенко

Редактор И,Горная

Заказ 831/91 Тираж 445 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский vîìáèíàò "Патент", г Ужгород, ул.Гагарина, 101 глицерина указанные изменения при сравнении с контролем не наблюдаются, Пример. У больной Г., 57 лет, с диагнозом эхинококкоз печени, подтвержденный компьютерной томографией и серологическими исследованиями, проведена оценка эффективности интраоперационного обезвреживания зародышевых элементов эхинококка, Во время операции в 8-QM сегменте печени выявлена эхинококковая киста диаметром 8 см. Киста вскрыта, содержимое ее удалено, Остаточная полость обработана 2,-ным раствором формалина по Спасокукоцкому, Перед вскрытием эхинококковой кисты последнюю пунктировали и определяли наличие и жизнеспособность протосколексов эхинококка. B 20 мл пунктата после 5 мин отстаивания удаляли насадочную жидкость и заменяли ее физиологическим раствором, затем после 5 мин отстаивания собирэли шприцем осадок, из которого наносили

2 капли на предметное стекло: 1 каплю контрольную, вторую — тестируемую. В тестируемую каплюдобавляли глицерин и подвергали микроскопии.

В контрольной и тестируемой каплях при микроскопии выявлены протосколексы эхинококка. В тестируемой капле после добавления глицерина у всех 36 протосколексов отмечена выраженная контрэктура тела и другие морфологические изменения, что свидетельствовало о жизнеспособности llpoтосколексов в эхинококковой кисте перед удалением ее содержимого. Эффективность обезвреживания протосколексов раствором формалина в остаточной полости фибброзной капсулы определяли путем воздействия на протосколексы, выделенные в смыве физиологическим раствором из остаточной полости после удаления из последнеи раствора формалина. 100 мл смыва помещали в стеклянный стакан и после 10 мин отстаивания удаляли надосадочную жидкость, Заменяли ее свежим физиологическим раствором. Через 5 мин отстаивания забирали шприцем осадок, из которого 2 капли наносили на предметное стекло: одну каплю контрольную, вторую — тестируемую, В тестируемую каплю добавляли глицерин и подвергали обе капли микроскопии, В контрольной и тестируемой каплях

5 выявлено соответственно 8 и 14 протосколексов эхинококка. В тестируемой капле после добавления глицерина у протосколексов не обнаружены контрактура тела и другие морфологические изменения по сравнению с контролем, что свидетельствовало о их гибели и эффективности интраоперационного обезвреживания раствором формалина.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает повышение скорости, точности, упрощение и удобство метода определения жизнеспособности протосколексов эхинококка. Повышение скорости достигается быстрым появлением дифференцирующего признака — контрактуры тела паразита, наступающей через 1 — 2 с после добавления глицерина к живым протосколексам. Повышение точности достигается тем, что на результэ1ы тестирования не влияют наличие и степень окрашивания инкубационной среды и исходное состояние морфологической структуры протосколексов, а дифференциальный признак жизне30 способности паразита в течение 30 — 40 мин наблюдения, Упрощение метода достигается тем, что он основан на хорошо различимом критерии — контрактуре тела живого паразита с уменьшением его размера в 1,2 — 2 раза

35 по сравнению с исходным, что не требует специальной подготовки оператора.