Способ дифференциальной диагностики хронического пиелонефрита, хронического гломерулонефрита и мочекаменной болезни у больных с гематурией

 

Изобретение относится к медицине , а именно нефрологии„ Цель изобретения - повышение точности способа. Для этого у пациента с выявленной гематурией берут 9-10 мл крови, готовят 2 пробы суспензии эритроцитов, добавляют хлористый магний до конечной концентрации 6 мМ и 12 мМ соответственно , а затем определяют активность К, Na-АТфазы по приросту неорганического фосфата При активности фермента в первой пробе от 0,16 до 0,66 мкм-см -ч диагностируют хронический гломерулонефрит, от 1,16 до 1,65 - хронический пиелонефрит, а при активности фермента во второй пробе от 0,16 до 0,41 - мочекаменную болезнь При этом точность диагностики хронического гломерулонефрита составляет 93%, хронического пиелонефрита - 94%, а мочекаменной болезни - 89%. верхний слой эритроцитов, содержащий лейкоциты, удаляют Оставшиеся эритроциты 3 раза отмывают охлажденным 0,145 М раствором NaCl в 0,02 М трис- НС1 буфера (рН 7,6) с последующим каждый раз центрифугированием при 300 g в течение 10 мин. Отмытые эритроциты инкубируют при комнатной температуре в течение 40 мин с равным объемом 1%-ного раствора Твин-20 в 0,145 М NaCl в 0,02 М трис-HCl буфере (рН 7,6). Эритроциты разводят 0,145 М раствором NaCl в 0,02 М трисО 4 Ј О 00 1C

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

COUN

РЕСПУБЛИК (g1)g G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4493135/14 (22) 18.08.88 (46) 23, 04. 91. Бюл. Р 15 (71) Рижский медицинский институт

МЗ ЛатССР и Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И,М.Сеченова (72) И. P. Лазовские, M. Н. Маслова, А.М.Казеннов, Е.Д.Пономаренко, Г.P.Ýéäåìàí, Д.К.Крастыня и И.И.Михайлова (53) 616.07(088. 8) (56) Евнин Д.Н. с соавт. Новый иммунологический подход к клинико-лабораторной дифференциальной диагностике гломерулонефрита и пиелонефрита: определение циркулирующих иммунных комплексов и антиглобулиновых факторов — гомореактантов. — Иммунология, 1986, У 5, с. 66-67. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ПИЕЛОНЕФРИТА, ХРОНИЧЕСКОГО ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТА И МОЧЕИзобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и терапии.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

У больного с гематурией берут 910 мл крови из локтевой вены в,гепаринизированную пробирку (200 ед./мп).

Готовят суспензию эритроцитов °

Для этого кровь центрифугируют при

300 g в течение 10 мин, плазму и

„„SU„„1644032 А 1

КАМЕННОЙ БОЛЕЗНИ У БОЛЬНЫХ С ГЕМАТУРИЕЙ (57) Изобретение относится к медицине, а именно нефрологии. Цель изобретения — повьш ение точности способа.

Для этого у пациента с выявленной гематурией берут 9-10 мл крови, готовят 2 пробы суспензии эритроцитов, добавляют хлористый магний до конечной концентрации 6 мМ и 12 мМ соответственно, а затем определяют активность К, Na-АТфазы по приросту неорганического фосфата. При активности фермента в первой пробе от

О, 16 до 0,66 мкм см ч диагностируют

Л хронический гломерулонефрит, от 1,16 а до 1 65 — хронический пиелонефрит, а.при активности фермента во второй Q) пробе от 0,16 до 0,41 — мочекаменную болезнь. При этом точность диагности- С ки хронического гломерулонефрита составляет 937., хронического пиелонеф- 2 рита — 94X, а мочекаменной болезни—

89Х.

OO

4ь

4ь

1Р верхний слой эритроцитов, содержащий лейкоциты, удаляют. Оставшиеся эри- Я троциты 3 раза отмывают охлажденным

0,145 М раствором NaC1 в 0,02 М трисНС1 буфера (рН 7,6) с последующим каждый раз центрифугированием при

300 g в течение 10 мин. Отмытые эритроциты инкубируют при комнатной температуре в течение 40 мин с равным объемом 1Х-ного раствора Твин-20 в 0,145 M NaC1 в 0,02 М трис-НС1 буфере (рН 7,6). Эритроциты разводят

0,145 М раствором NaC1 в 0,02 М трис1644032

А-(Е„-Е,) К, где АЕ

Е активность Na, К-АТфазы мкмоль/мп/ч; экстинкция при 720 нм в бе без уабаина; экстинкция при 720 нм s бе с уабаином; коэФфициент пересчета:

50 пропроК55

K 0,23«З «1,5«5 «1,1 «10, I где 0 23 - коэффициент пересчета экстинкции, мкмоль буФере до концентрации 2e10 ч"2 Ф м 10«1 клеток/мл.

Готовят две инкубационные среды, содержащие в конечной концентрации, мИ: Na 125, К 10, ЭДТА 0,5, АТФ динатрневая соль 2; трис-НС1 буфер рН 7,6 50. Первая инкубационная среда содержит также 6 мИ MgC1>, вторая

12 мИ MgC1 10

Берут две суспензия эритроцитов по 0,1 мл (2 ° 10 -2 ° 10 кл/0,1 мп), к первой добавляют 0,3 мл первой инкубацирнной среды с 6 мИ MgC1, к второй - 0,3 мл второй инкубационной среды с 12 мИ ИяС1 . Обе пробы инкубируют в водяной бане при 44 С в течение 40 мие, Реакцию останавливают добавлением в пробы по 0,2 мл

I30%-ной трихлоруксусной кислоты.

Активность Na К-АТфазы в обеих пробах определяют по приросту неорганического фосфора (Фн), т.е. по разнице между активностью АТфазы в присутствии и в отсутствии 0,2 мМ уабаина. Пля этого к 1 8 мл дистиллированной воды приливают 0,2 мл супернатанта инкубационной среды после остановки ферментативноф реакции трихлоруксусной кислотой. Далее пробу смешивают с 1,6 мл реактива А (10N

HgSOg+F 0+5%-ный раствор (NHg) MoyO C 4Н©0 в ;. соотношении 1:2:1) и через 1-2 мин при непрерывном помешивании добавляют 0 4 мп реактива В (0,2%-ный раствор аскорбиновой кислоты в 0,2%-ный раствор ЯпС1 в концентрированной НС1). Через 15 мин окрашенную смесь анализируют спектрофотометрически при длине волны

720 нм. Активность Na, К-АТфазы определяют по разнице экстинкций в пробе без уабаина и в пробе с уабаином, выраженной в мкмоль/мл/ч.

Формула расчета активности Na« К- 45

АТФазы:

3 - пересчет на общий объем инкубационной смеси с 0,2 на 0,6 мл;

1,5 — пересчет времени инкуба ции на 1 ч;

5 - пересчет на конечное pasведение эритроцитов в

5 раз;

1,1 — коэффициент по гематокриту;

10 — пересчет активности фермента с 0 1 на 1 мл эритро- . цитов.

При активности Na, К-АТфазы в первой пробе суспензии эритроцитов с

6 мИ MgCl 0,16-0,66 мкмоль/мл/ч диагностируют хронический гломерулонефрит, а при активности фермента в первой пробе 1, 16-1,65 мкмоль/мл/ч диагностируют хронический пиелонефрит, а при активности фермента во второй пробе с 12 мМ MgC1 0,160,46 мкмоль/мп/ч диагностируют моче-, каменную болезнь.

Пример. У больного при исследовании активности фермента Na, КАТфазы в первой пробе с 6 мИ ИяС1 нашли, что разница экстинкций между пробой без уабаина и пробой с уабаином составила 0,003, откуда активность Na, К-АТфазы ; — 0,003«0 23«3»

«1,5«5 «1, 1<10=0 17 мкмоль/мл/ч, а во второй пробе с 12 мИ М8С1, разница экстинкций составила 0,025, откуда активность Na-К-АТфазы =0 025

«0,23«3 «1,5 «5 «1 ° 1 у10=1,42 мкмоль/мл/ч.

Поскольку в первой пробе с 6 мИ MgC1 выявлена активность Na К-АТфазы

О, 17 мкмоль/мл/ч данному больному ставится диагноз хронического гломерулонефрита.

Способ работоспособен только в указанных значениях количества эритроцитов и концентрациях хлористого магния.

Зависимость активности Na К-АТфазы от количества .эритроцитов в пробе приведена в табл. 1.

Зависимость, активности Na, КАТфазы в эритроцитах больного гломерулонефритом от концентрации MgCl приведена в табл, 2.

На основании представленных в табл. 1 видно, что для сохранения прямолинейности ферментативной реакции необходимо испольэовать концентрацию эритроцитов в пределах 2 10 16440

5

2 ° 10 клеток/мп, чтобы количество разрушеннОго Субстрата АТФ не превышало 20 . При последующем увеличении количества эритроцитов в пробе, в частности, 1 ° 10, 1,2 ° 10 возмож-! ( но искажение характера прямой, так как избыточное количество клеток будет разрушать большее количество субстрата, что снижает концентрацию последнего в пробе и соответственно приводит к уменьшению ферментативной активности, Результаты, представленные в табл. 2, свидетельствуют о том, что наиболее информативными концентрациями МяС1, являются 6 и 12 MM.

Пример 1. Больной М.П., 50 лет, поступил в клинику на обследование по поводу болей в спине, по- 20 вышения артериального давления (АД) до 200/120 мм рт.ст. максимально и выявленной гематурии. При объективном осмотре выявлена небольшая болезненность справа при поколачивании облас- 25 ти почек, повышение АД до 150/

/90 мм рт.ст. В моче: удельный вес

1021, 1,5 — 0,228Хо, в осадке: лейкоциты до 12 в поле зрения (п.зр.), эритроциты до 30 в п.зр. Описанная клиническая картина не позволила поставить диагноз причины гематурии.

Был предположен дифференциальный диагноз — хронический пиелонефрит, хронический гломерулонефрит и мочекаменная болезнь. При исследовании крови выявили: в первой пробе суспензии эритроцитов (2 101ц клеток/мл) с

6 мМ ИяС1 активность Na К-АТфазы, 0,16 мкмоль/мл/ч, что и позволило установить диагноз хронического гломерулонефрита, во второй пробе с

12 мМ MgC1 активность фермента составила 1,40 мкмоль/мл/ч.

Таким образом, больному был установлен диагноз хронического гломерулонефрита. Дальнейшее морфологическое исследование препарата почечной ткани после пункционной биопсии почки достоверно подтвердило наличие у больного хронического мезангиально-профилеративного гломерулонефрита.

Пример 2. Больной Ч.Я., 16 лет, поступил в клинику с жалобами на боли в спине. Заболел на 1,5 года до поступления с повторными макроге-, 55

1 матуриями, которые сопровождались повьппением температуры и дизурией.

В течение последующего года в ана-

32 лизах мочи сохранялась гематурия до

30 эритроцитов в п.эр. При поступлении объективно-незначительная болезненность справа при поколачивании области почек. В анализах мочи: уд. вес 1020, белок 0,167Хо, в осадке: до 12 лейкоцитов в п.зр. и до 30 свежих и выщелоченных эрйтроцитов в п.зр.

Таким образом, у больного возник дифференциальный диагноз между хроническим пиелонефритом, хроническим гломерулонефритом и мочекаменной болезнью. Проведенные цистоскопия и внутривенная урография также не дали возможности установить диагноз причины гематурии, При исследовании крови выявили: активность Na, К-АТфазы в первой пробе суспензии эритроцитов (2 ° 10 клеток/мл) с 6 мМ MgCl

Н составила 0,66 мкмоль/мп/ч, что и позволило поставить больному диагноз хронического гломерулонефрита. Одновременное исследование Фермента во второй пробе с 12 MM МяС1 выявило активность 1,16 мкмоль/мл/ч. Таким образом, по активности фермента Na, К-АТфазы в первой пробе был установлен диагноз хронического гломерулонефрита. Проведенная биопсия почки и гистологическое исследование препарата выявило наличие хронического мембранозно-пролиферативного гломерулонефрита, что достоверно подтвердило диагноз.

Пример 3. Больная Г.И., 27 лет, поступила в клинику с жалобами на тупые боли в пояснице, головные боли и пастозность лица по утрам, Такие жалобы появились у больной

5 лет тому назад, а в течение последнего года повышалось также АД до

150/100 мм рт.ст. При объективном осмотре: бледность, пастозность лица, небольшое повьппение АД до 140/

/80 мм рт.ст,, чувствительность при поколачивании в области обеих почек.

В моче: уд. вес 1022, лейкоциты до

45 в и. зр,, свежие эритроциты до 6 в п.зр., выщелоченные эритроциты до

15 в п.эр. На основании вьппеизложенного у больной были предположены следующие дифференциальные диагнозы: хронический пиелонефрит, хронический гломерулонефрит и мочекаменная болезнь. При исследовании крови выявили: активность фермента Na,. К-АТфазы в первой пробе суспензии эритроцитов

1644032 с 6 мИ MgC1 составила 1,16мкмоль/мп/ч что и позволило установить диагноз, хронического пиелонефрита. Активность фермента во второй пробе с 12 мИ

MgC1 также составила 1,16мкмоль/мл/ч при постановке диагноза не учитывалась, поскольку диагноз хронического пиелонефрита устанавливается при соответствующей активности фермента в первой пробе. Последующее проведение внутривенной пиелографии выявило расширение чашечек и лоханок, более выраженйое справа, что свидетельствовало о хроническом пиелонефрите.

Снижение гематурии после проведенной уроантисептической терапии также свидетельствовало о хроническом пиелонефрите.

Таким образом, исследование крови 20 больной предлагаемым способом позволило поставить достоверный диагноз хронического пиелонефрита до проведения рентгеноконтрастного исследования почек. 25

Пример 4. Больная И.А., 57 лет, поступила в клинику но поводу повторной макрогематурии за несколько дней до госпитализации. Жалобы на тянущие боли в пояснице с 30 иррадиацией в паховую область и в бедро, болезненное мочеиспускание, При объективном осмотре выявилась небольшая болезненность справа при поколачивании области почек, В анализах мочи: уд. вес 1017, белок

0,137Хо лейкоциты до 30 в п.зр., эритроциты до 60 в п.зр. У больной был предположен дифференциальный диагноз между хроническим гломеруло- 4р нефритом, хроническим пиелонефритом и мочекаменной болезнью. Исследование крови выявило: активность фермента Уа, К-АТфазы в первой пробе суспензии эритроцитов с 6 мИ NgCl сос тавила 1,65 мкмоль/мл/ч, во второй пробе с использованием 12 мИ концен-, трации MgC1 активность фермента была 1, 16 мкмоль/мп/ч, на основании выявленной в первой пробе активности фермента Иа, К-АТфазы 1,65 мкмоль/мл/ч

50 был поставлен диагноз хронического пиелонефрита.

Проведенное в дальнейшем параклиническое обследование больной †отрицательные данные цистоскопии, наличие расширенной гипотоничной лоханки справа на фоне нефроптоза, а также одновременное снижение эритроцитурии и лейкоцитурии после проведения уроантисептической терапии позволило достоверно подтвердить диагноз хронического пиелонефрита. Таким образом, исследование крови позволило до проведения цистоскопии и рентгеноконтрастного исследования почек достоверно поставить диагноз хронического пиелонефрита.

П р и м.е р 5. Больная M.А., 29 лет, поступила в клинику с жалобами на сильные боли в правой части живота, болезненное мочеиспускание, тошноту. Указанные жалобы появились впервые. При объективном осмотре выявлена болезненность справа при поколачивании области почек, болезненность средней точки мочеточника справа. В анализах мочи: уд. вес 1024, белок 1,26Хо, лейкоциты до 80 в п.зр, эритроциты до 30 в п.зр. С учетом изложенных данных были предложены следующие дифференциальные диагнозы:, хронический гломерулонефрит, обострение хронического пиелонефрита и мочекаменная болезнь. Исследование крови выявило: активность Na К-АТфазы в первой пробе суспензии эритроцитов с использованием 6 MM концентрации

ИдС1 составила 0,99 мкмоль/мл/ч, а во второй пробе суспензии эритроцитов с 12 мИ ИяС1 0,16 мкмоль/мл/ч, Выявление активности фермента

О, 16 мкмоль/мл/ч во второй пробе позволило поставить диагноз мочекаменной болезни. Проведенная затем цитоскопия выявила: мелкий уратный песок в мочевом пузыре и камень в отверстии правого мочеточника, что достоверно подтвердило диагноз мочекаменной болезни. Таким образом, исследование крови позволило еще до проведения цистоскопии поставить диагноз мочекаменной болезни.

Пример 6, Больной Г.А., 19 лет, поступил в клинику с жалобами на боли в правой половине живота, дизурию, повышение температуры тела до 37,6 С с ознобом. Объективный осмотр не выявил существенных отклонений от нормы. В анализах мочи: уд. вес 1020, лейкоциты до 60 в п.зр., эритроциты до 60 в п.зр. Учитывая клиническую картину и данные лабораторного исследования, возникло предположение о наличии у больного мочекаменной болезни с дифференциальным диагнозом — обострение хронического

1644032

10 пиелонефрита и хронический гломерулонефрит. Исследование крови выявило: активность фермента Na, К-АТфазы в первой пробе суспензии эритроцитов с 6 мМ MgC1 составила

1 40 мкмоль/мл/ч, а активность фермента во второй пробе суспензии эри;троцитов с использованием 12 мИ ИеС1 составила 0,41 мкмоль/мл/ч, а именно выявление активности фермента

0,41 мкмоль/мл/ч во второй пробе дало возможность поставить диагноз мочекаменной болезни. Таким образом, исследование крови позволило еще до появления таких выраженных проявлений болезни, как отхождение камня, поставить диагноз мочекаменной болезни.

У 27 больных (93 случаев) предлагаемым способом по активности Na, К-АТфазы в пробе эритроцитов с 6 мМ

MgC1 установлен диагноз хроническо2

ro гломерулонефрита. (ХГН) ° Активность фермента в пробе эритроцитов с добавлением 6 мИ МяС1 составила у этих больных 0,16-0,66 мкмоль/мл/ч.

Диагноз ХГН у всех 27 больных был в дальнейшем достоверно подтвержден: у 8 больных при морфологическом ис.следовании биоптата почек был установлен хронический мезангиальнопролиферативный гломерулонефрит, у

2 больных - хронический мембранознопролиферативный гломерулонефрит; у остальных больных диагноз ХГН бып установлен на основании типичной клинической картины — возникновение заболевания после перенесенных вирусных и бактериальных инфекций, стойкая эритроцитурия в течение не менее двух лет, а подробное лабораторное и инструментальное исследование не выявило других причин гематурии.

У 33 больных с гематурией по исследованию активности Na, К-АТфазы в пробе эритроцитов с 6 мМ МрС1 был установлен диагноз хронического пиелонефрита (94Z случаев). Активность фермента Na, К-АТфазы в пробе с 6 мМ

MgCl у этих больных составила 1,161 ° 65 мкмоль/мл/ч. В дальнейшем диагноз хронического пиелонефрита у этих больных бып достоверно подтвержден рентгенологическим исследованием почек с обнаружением органических изменений в чашечно-лоханочной системе.

У 7 больных диагноз хронического циелонефрита подтвердился и клиническими данными — исчезновением гематурии после проведенной уроантисептической терапии.

20 Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики хронического пиелонефрита, хронического гломерулонефрита и мочекаменной болезни у больных с гематурией путем исследования крови, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, готовят две пробы суспензии эритроцитов со0 И

1 держащие 2 ° 10 -2 10 клеток в 1 мл, добавляют магний хлористый в конечной концентрации Ь мИ и 12 мИ соответственно, и определяют активность К, Na — АТфазы и при активности фермента

35 в первой пробе от 0,16 до 0,66 мкМу мл ° ч диагностируют хронический гломерулонефрит, от 1, 16 до 1,65 — . хронический пиелонефрит, а при активности фермента во второй пробе от

40 0,16 до 0,41 — мочекаменную болезнь.

Таблица 1

4> Количество эритро цитов в пробе,кле

:.ток/мл ктивность Na

-АТфазы, мкмоль н/час на 1 мл/.

/клеток

2,23

2,72

3,22

3,71

4,22

4,70

4,89

2 ° 1040

4 ° 1030

55 8,,0

1,0 ° 10"

1,2 10

У 26 больных (897 случаев) по активности фермента Na, К-АТфазы в пробе эритроцитов с 12 мМ МяС1 был установлен диагноз мочекаменной болез10 ни. Активность Na, К-АТфазы в пробе с 12 мМ MgC1 у этих больных составила 0,16-0,41 мкмоль/мл/ч. Наличие мочекаменной болезни у всех больных было в дальнейшем достоверно подтверждено: рентгенологически у 21 больного, при ультрасонографии почек у 5 больных и клинически по отхождению камней мочеточника у 3 больных.

1644032!

Таблица 2

Концентрация MgC1, в инкубационной 3 среде, мИ

4 5

12

1,5 1,1 0,71 0,41 0,50 0,7 0,82 1,0 1,2 1,32

Составитель С. Федоров

Редактор Н„Гунько Техред Л.Олийнык Корректор Л. Бескид

Заказ 1237 Тираж 422 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Рауаская наб., д. 4/5

11 те

Производственно-издательский комбинат Патент, г.ужгород, ул. Гагарина, 101

Активность Na "

К-АТфазы, мкмоль

Фц /ч мл/клеток