Способ определения липопротеида печени в циркулирующих иммунных комплексах в крови

 

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано при исследовании специфического липопротеида в циркулирующих иммунных комплексах (ЦИК) в крови больных с острыми и хроническими заболеваниями печени.Целью изобретения является повышение специфичности определения липопротеида, выделяемого при нарушении клеточной мембраны печени. Согласно способу, циркулирующие иммунные комплексы в крови связывают субкомпонентом комплемента CU и определяют оптическую плотность субстрактного реактива. Определение липопротеида в ЦИК производят по связыванию конъюгата щелочной фосфатазы с иммуноглобулином IgG сыворотки бараньей крови к специфическому лияопротеиду печени. Начиная с 0,3 ед. оптической плотности субстрактного реактива, диагностируют поражение клеточной и мембраны печени. Определение клеточного липопротеида позволяет диагностировать нарушение клеточных мембран при патологических процессах . а

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

А1

„„SU„„1651214 (51)g С 01 N 33/53

, 1 й4>

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Й AВТОРСЙОМУ СВОД;:ТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

Г1О ИЗОБРЕТЕНИЯМ И О ГНРЬГИЯЬ1

ПРИ П.ИТ СССР (21) 4602295/1 4 (22) 05.11.88 (46) 23.05.91. Бюл . У 19 (71) Тартуский государственный университет (72) Х.P.Нутт, Р.И.Уйбо

Т.Я.Прюкк и К.В.Кизанд (53) 615.375(088,8) (56) Авторское свидетельство СССР

В 1327005, кл. С 01 N 33/53, 1985. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИПОПРОТЕИДА . ПЕЧЕНИ В ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ИЯУННЫХ КОМПЛЕКСАХ В КРОВИ (57) Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано при исследовании специФического лигопротеида в циркулирующих иммунных комплексах (ЦИК) в крови больных с острыми и хроническими заболеваниями печени. Целью изобретения является

Изобретение относится к иммунологии, а именно к методам исследования специфического липопротеида в циркулирующих иммунных комплексах (ЦИК) в крови больных с острыми и хроническими заболеваниями печени.

Целью изобретения является повышение специфичности определения ликопротеида, выделяемого при разрушении клеток печени.

Способ осуществляется следующим образом.

В связанных С1 ЦИК производят определение липопротеида по связыванию конъюгата щелочной фосфатазы с

1 иммуиоглобулином бараньей сыворотки повышение специфичности опредепени;: липопратеида, выделяемого при нарулени:. клеточной мембраны печени.

Согласно способу, циркулирующие иммунные комплексы в крови связывают субкомпонентом комплемента С1 и опЧ ределяют оптическую тлотнасть субстрактнога реактива. Определение липапротеида в ЦИК производят по связыванию конъюгата щелочной фосфатаэы с иммунаглобулином 18Г сыворотки бараньей крови к специфическому липо- пратеиду печени Начиная с 0 3 e„ " оптической плотности субстрактнаго реактива, диагностируют поражение клеточной и мембраны гечени. Ог.редсление клеточного липопратеида позволя.— ет диагностировать нарушение клеточ--ных мембран при патологических процессах. к специфическому липапротеиду печеьи и начиная с 0,3 ед. оптической плотности субстратного реактива диагностируют поражение клеточной мембраны печени .

Пример. Печень от донора гомогениэируют в 0,25 И растворе сахарозы с рН 8,0. С помощью центрифуги выделяют супернатант, помещают в хроматографическую колонку с сефарозой

6В растворенной в барном буфере (pH 8,5). Выделяют первый пик хроматограммы, при этом получают специфический липопротеид печени, которым иммунизируют баранов с полным адъювантом Фреунда и добавлением коклюш1651214

Способ позволяет при остром и хроническом гепатите выявить в крови больного ЦИК, содержащие специфический липопротеид печени — антиген мембраны печеночной клетки, имеющий большое патогенетическое значение для развития аутоиммунных и вирусных гепатитов. формулаизобретения

Составитель И. Башкаав

Техред И.Моргентал Корректор Н.Ревская

Редактор Н.Бобкова

Заказ 1604 Тираж 419 Поднис ное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Pc .Ушская наб., и. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 ной вакцины. Из этой иммунной сыворотки к специфическому липопротеиду печени выделяют гамма-глобулин и иэ него IgG с помощью ионообменной хроматографии в ДЕАЕ-целлюлозы с фосфатным буфером (рН 8,0).

Выделенный иммуноглобулин IgG коньюгируют с помощью 4, 2 -ного раствора глютаральдегида со щелочной фосфатазой.

Субкомпонент комплемента С1 выделяют из свежей сыворотки свиньи двухзтапным преципитированием с 0,03 и

0,069 И ЭДТА. Выделенный С1, разбавля-15 ют в карбонатно-бикарбонатном буфере (рН 9,6) и связывают на полистирольном планшете..

C С1 связывают ЦИК кэ сыврроток

% обследуемых лиц. Содержание специфического липопротеида в ЦИК определяют с помощью конъюгата щелочной фосфатазы к специфическому липопротеиду пече п . Освобождение щелочной фосфатазы определяют по оптической плот- 25 ности субстратного реактива паранитрофенилфосфата. Оптическую плотность определяют при длине волны 405 нм счетчиком Oynatech.

При 0,3 ед. оптической плотности 30 реакционного продукта определяют поражение клеточной мембраны печени, Способ определения липопротеида печени в циркулирующих иммунных комплексах з крови, включающий связывание д ркулирующих иммунных комплексов субкомллементом комплемента С1 и определение оптической плотности . убстратного реактива., о " л и ч а юшийся тем, что., с целью повышения специфичности определения липопротеида, выделяемого при нарушении клеточных мембран, после связывания имгунных комплексов, добавляют раствор конъюгата иммуноглобулина IgG к специфическому липопротеиду печени с щелочной фосфатазой и при наличии

0,3 и более единиц оптической плотности определяют липопротеид, выделяеьый при нарушении клеточных мембран.