Способ определения лизиса эритроцитов в иммунологических реакциях

 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Целью изобретения - повышение чувствительности иммунологических реакций - (например, реакций связывания комплемента и определения гемолиза), сопровождающихся лизисом эритроцитов барана. После проведения исследования в каждую лунку добавляют 0,5%-ную известь антительного эритроцитарного диагностикума к гемоглобину эритроцитов барана. Специфическую активность в иммунологических реакциях определяют по агглютинации диагностикума. Чувствительность реакции при этом возрастает по сравнению с прототипом в реакции угнетения связывания комплемента в 28 раз, а в реакциях прямого гемолиза в 35 раз.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)л G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

В зом, (21) 4670583/14 (22) 31,03.89 (46) 07,07.91. Бюл, N 25 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней (72) Ю.А .:;узьмин, Б.В.Каральник и Т.В,Кирющенк:, (53) 615.374(088,8) (56) ЛукьяноваК.П. Применение реакции угнетения связывания комплемента в диагностике, токсоплазмоза. — Авт.канд.дисс„г, Алма-Ата, 1969, с. 24. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИЗИСА

ЭРИТРОЦИТОВ В ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ

РЕАКЦИЯХ

Изобретение относится к медицине, а именно, к иммунологии.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа.

Способ осуществляют следующим обраВ иммунологических реакциях в качестве индикатора гемолиза используют антительный эритроцитарный диагностикум из сыворотки против гемоглобина, а степень гемолиза оценивают по интенсивности агглютинации диагностикума.

Пример 1. Определение гемолитической активности стафилококкового а-токсина. Последовательные разделения токсина готовят в 0,85%-ном растворе хлористого натрия в обьеме 0,5 мл. Затем добавляют в каждую пробирку 1 каплю (0,025 мл) взвеси 5%-ных нативных бараньих эритроцитов, Пробирки выдерживают при комнатной температуре в течение 2 ч и затем Ы 1661643 А1 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Цель изобретения— повышение ".óâñòâèòåëüíîñòè иммунологических реакций (например, реакций связывания комплемента и определения гемолиза), сопровождающихся лизисом эритроцитов барана. После проведения исследования в каждую лунку добавляют 0,5%-ную взвесь антител ьного эритроцитарного диагностикума к гемоглобину эритроцитов барана. Специфическую активность в иммунологических реакциях определяют по агглютинации диагностикума, Чувствительность реакции при этом возрастает по сравнению с прототипом в реакции угнетения связывания комплемента в

28 раз, а в реакциях прямого гемолиза в 35 раз. центрифугируют при 100 об/мин в течение

20 мин, Дозатором берут по 0,05 MR надосадка и переносят в лунки планшета для иммунологических реакций, В эти и контрольную лунки вносят по 0,025 мл 0,5%-ной взвеси антительного эритроцитарного диагностикума к гемоглобину барана. Антительный эритроцитарный диагностикум к гемоглобину барана получен сенсибилизацией фиксированных эритроцитов иммунной сывороткой против гемоглобина при помощи амидола. Гемолитическую активность а-токсина характеризуют наибол ьшим его разведением, при котором в лунках зарегистрирована отчетливая (на 3-4 креста) агглютинация эритроцитарного диагностикума.

Пример 2. Определение неполных антител к Toxoplasma gondii в реакции угнетения связывания комплемента. Реакцию. ставят микрометодом B планшетах титрато1661643

Составитель В,Литовченко

Техред M.Моргентал Корректор О.Кравцова

Редактор Н.Яцола

Заказ 2119 Тираж 413 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, К-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 ра Такачи. К последовательным разведениям 0,025 мл исследуемых сывороток больных токсоплазмозом добавляют по 0,025 мл антигена токсоплазм в рабочем разведении, затем добавляют по 0,025 мл компле- 5 мента в рабочей дозе и по 0,025 мл иммунной сыворотки кролика к возбудителю токсоплазмоза в дозе 1-2 сывороточные единицы, которые определяют путем предварительного титрования последней с 2 10, единицами токсоплазменного антигена, . Пробы оставляют при 4 С в течение 18 — 20 ч.

После этого во все лунки вносят 0,5 мл гемолитической системы (1,5, -ная взвесь бараньих эритроцитов,сенсибилизированных 15 коммерческой гемолитической сывороткой).

Через 30 мин контакта при 37 С во все лунки вносят по 0,025 мл 0„5 g, взвеси эритроцитарного диагностикума, Реакцию учи тывали через 1,5-2 ч. За титр исследуемой 20 сыворотки принимают ее наибольшее разведение,. в котором наблюдают агглютинац..о диагностикума, При исследовании 9 сыворотках средний титр антител к возбудителю токсоплаз- 25 моза составлял 1:496,8+ 2,0.

Пример 3. Точность определения антител при помощи РУСК по известному и предлагаемому способам оценили по варьированию результатов тестирования — ко- 30 эффициенту варьирования, отражающему воспроизводимость метода, Исследовали одну и ту же пробу сыворотки крови больной токсоплазмозом 30 раз каждым способом.

Таким образом, чувствительность предлагаемого способа определения лизиса эритроцитов существенно выше, чем по известному, в реакциях прямого гемолиза увеличение чувствительности составило в 35 раз и угнетения связывания комплемента— в 28 раз, Точность предлагаемого способа не ниже, чем известного, а высокая специфичность обеспечивает надежность диагностического использования. 3Т0 открывает новые возможности определения агентов с небольшой гемолитической активностью и неполных(не связывающих комплемент) антител.

Формула изобретения

Способ определения лизиса эритроцитов в иммунологических реакциях путем добавления эритроцитов в опытную пробу с последующей регистрацией гемолиза, о т л ич а ю щ и и ся тем, что, с целью повышения чувствительности способа; после добавления эритроцитов в пробу вносят эритроцитарный антительный диагностикум к гемоглобину эритроцитов барана, а регистрацию гемолиза проводят по агглютинации диагн ости кума.