Способ оценки степени тяжести вирусного гепатита

 

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфекционных болезней, и может использоваться в клинике для определения степени тяжести вирусного гепатита. Цель изобретения - ускорение способа при одновременном повышении его точности. Определяют антиокислительную активность мембраны эритроцитов в модели железоиндуцируемого окисления олеиновой кислоты по изменению быстрой вспышки хемилюминесценции. При величине антиокислительной активности более 27% степень тяжести вирусного гепатита оценивают как легкую, от 17 до 26% - как среднюю, менее 16% - как тяжелую. Способ позволяет повысить точность оценки на 14 - 24% и ускорить способ в 1,5 - 2 раза.

СОНЭЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

1673971 А1

lsl)s G О1 N 33/49

ГOCYQAP C 7 BI I II 1ЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4170307/14 (22) 29,12.86 (46) 30.08,91, Бюл. N. 32 (71) Гродненский государственный медицинский институт (72) В,С.Васильев, В.М.Цыркунов и Г.К.Новицкий (53) 612.015(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N 1050670. кл. А 61 8 10/00, 1983. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ

ВИРУСНОГО ГЕ11А1ИТА (57) Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфекционных болезИэобре1енио относится к медицине, в частности к диагностике инфекционных болезней. и может быть использовано в клиниKe,öëÿ определен,.я степени тяжести вирусного Г ег1ати ьа.

Целе изобретения — ускорение способа при одновременном повышении его точности.

Способ осуществляют следующим образом, Берут 5 мл венозной крови и выделяют иэ нее эритроциты ценгрифугированием при 300 g в течение 5 мин. при этом в качестве амтикоэгулянтэ используют гепарин (200 ед/мл). 11лазму и верхний слой эритроцитов, содержащий лейкоциты, удаляют.

Полученные зритроцить. отмывают, добавлю. четырехкратный обьем охлажденного физиологического раствора и осаждая клетки центрифугироаэнием при 300 g в течение

15 мин, Надлсэдочную жидкость вместе с верхним слоем opal T 1) >Illl I oB удаляют. ней, и может быть использовано в клинике для определения степени тяжести вирусного гепатита. Цель изобретения — ускорение способа при одновременном повышении его точности. Определяют антиокислительную активность мембраны эритроцитов в модели желеэоиндуцируемого окисления олеиновой кислоты по изменению быстрой вспышки хемилюминесценции. При величине антиокислительной активности более

27% степень тяжести вирусного гепатита оценивают как легкую, от 17 до 26% — кэк сред, эю. менее 16% — как тяжелую, С; особ позволяет повысить точность оценки на 1424% и ускорить способ в 1,5-2 раза.

Мембраны эритроцитов выде ют путем гипоосмптического гемолиза, используя а качество гемзлизирующей среды 5 мМ йэН2РОа, содержащей 1 MM ЭДТА. 1 мл осажденных эритроц, os быстро и энергично перемешивают с 20 мл охлажденной до 4 С гемолиэирующей среды и выдерживают при этой температуре, постоянно помешивая, в течение 5 мин. Гемолизэт центрифугируют при 20 000g в течение 10 мин.

Надосэдочную жи Koc1b удаляют, а осадок мембран эритроцитов отмывают 20 объемами 10 мМ трис-НС1-буфера (рН 7,4), осаждая мембраны центрифугированием при 20000 g в те е ие 10 мин. Осадок отмытых мембран зритроци ов переносят в мерные центрифужные проб ирки и доводят трис-НС!-буферо л (10 мм, рН 7,4) объем до 1 мл. Г1олу енну о суспенэию мембран эритроцитов обраба.ывгют Ультразвуком е течение 20 r. при частоте 44 кГц с выходной электрl1чегкой мощностью Iå1673971

10 минесценции В качестве контроля берут 2,015 нератора в рабочем диапазоне частоты на активной нагрузке 360 Вт. Обработка ультразвуком повышает доступность мембран эритроцитов для действия реагентов при определении антиокислительной активности (AOA).

0,1 мл озвученной суспензии мембран эритроцитов добавляют к 1,9 мл 0,14ф,-ного спиртового раствора окисленной олеиновой кислоты и после добавления 1.0 мл раствора сульфата двухвалентного железа (конечная концентрация в кювете 5 10 М) на хемилюминометре ХЛМ1Ц вЂ” 01 регистрируют высоту быстрой вспышки хемилюмл 0,14 -ного спиртового раствора окисленной олеиновой кислоты. Отношение разницы высот быстрой вспышки в контроле и опыте к высоте быстрой вспышки в контроле(умноженное на 100 ) и является показателем

АОА мембран эритроцитов.

Изучение АОА мембран эритроцитов у 18 практически здоровых доноров показало, что она равна 54,42 +-2,07ь.

У больных вирусным гепатитом обнаружено снижение АОА мембран эритроцитов, причем величина ее снижения зависит от степени тяжести вирусного гепатита. При

АОА более 27 ь степень тяжести гепатита оценивают как легкую, от 17 до 26;(, — как среднюю, менее 16ь — как тяжелую, fl р и м е р 1. Больная Г1., поступила в инфекционную больницу на 8-й день болезни с жалобами на боли в эпигастральной области, рвоту, снижение аппетита, темный цвет мочи, желтушную окраску склер.

При поступлении общее состояние удовлетворительное, Кожные покровы и склеры глаз с желтушным оттенком, В легких и сердце — без патологических изменений. Пульс 76 уд/мин, АД 110/60 мм рт,ст.

Язык влажный, чистый. Живот мягкий, безболезненный при пальпации. Печень выступает иэ-под правой реберной дуги на 1 см.

Моча темная.

Определяют в мембранах эритроцитов

АОА, У больной она равна 33,3 (определение заняло 53 мин). Данный уровень АОА позволяет диагностировать вирусный гепатит легкой степени тяжести. Кроме этого, концентрация общего билирубина крови равна 66,8 мкМ/л (норма 20,5), тимоловая проба 7 ед. (норма 4), АлАТ 6,7 мМ/л ч (норма 0,68).

В соответствии с установленной степенью тяжести вирусного гепатита больной проводят лечение, Пример 2. Больная Ж., поступила на

3-й день заболевания с жалобами на голо20

55 вную боль, недомогание, слабость, снижение апптита, темную мочу, желтушность кожи и склер, При поступлении состояние средней тяжести. Кожные покровы и склеры глаз желтушны. В легких везикулярное дыхание.

Тоны сердца чистые, ритмичные. Г1ульс

80 уд./мин, АД 100/70 мм рт,ст. Язык обложен белым налетом. Живот при пальпации мягкий, болезненный в эпигастральной области, Печень выступает иэ-под края правой реберной дуги на 2 см. Кал ахоличный, моча темная.

АОА мембран эритроцитов больной равна 21,0 („ что позволяет диагностировать среднюю степень тяжести вирусного гепатита (определение заняло 47 мин). Уровень общего билирубина крови равен 100,0 мкМ/л (норма 20,5), тимоловая проба 18 ед, (норма

4), АлАТ 7,0 мМ/л .ч (норма 0,68), B соответствии с установленной степенью тяжести вирусного гепатита больной назначают адекватное лечение, Пример 3. Больной А., поступил на

5-й день болезни с жалобами на желтушность кожи, слизистых, темный цвет мочи.

При поступлении общее состояние средней тяжести, Кожные покровы и склеры глаз интенсивно желтые. В легких везикулярное дыхание. Сердечные тоны ясные, чистые. Пульс 68 уд./мин, АД 120/70 мм рт,ст.

Язык обложен белым налетом. Живот мягки, безболезненный. Печень выступает из-под края правой реберной дуги на 4 см, Моча темная.

Определяют АОА мембран эритроцитов, которая равна 16,6;, что указывает на тяжелую степень тяжести вирусного гепатита у больного (определение АОА заняло 51 мин), Концентрация общего билирубина крови равна 196,6 мкМ/л (норма 20,5), тимоловая проба 17 ед, (норма 4), АпАТ

6,6 мМ/л ч (норма 0,68), С учетом выставленного диагноза больному проводят интенсивную дезинтоксикационную терап ию.

Пример 4. Больная В., поступила в инфекционную больницу с жалобами на слабость, тошноту, желтую окраску кожи и склер глаз.

При поступлении общее состояние удовлетворигельное, Кожные покровы и видимые слизистHp. умеренно желтушны.

В легких везикулярное дыхание. Пульс

68 уд./мин АД 100/70 мм рт.ст. Тоны сердца приглушены, Живот мягкий, болезненный в эпигастрии, Печень высгупает из-под края правой реберной дуги на 1 см.

Моча темная.

16 3971

Определяют в мембранах эритоциты

АОА. У больной она равна 27,1 (определение заняло 48 мин). Данный уровень АОА позволяет диагностировать вирусный гепатит легкой степени тяжести. Концентрация общего билирубина крови равна 51,3 мкМ/л (норма 20,5), тимоловая проба 8 ед. (норма

4), АлАТ 5,6 мМ/л ч (норма 0,68).

В соответствии с установленной степенью тяжести вирусного гепатита больной проводят лечение, Пример 5, Больная X., поступила в стационар на 5-й день болезни с жалобами на снижение аппетита и иктеричность склер.

При поступлении состояние удовлетворительное. Кожные покровы обычной окраски, склеры субиктеричны. В легких и сердце — без патологических изменений.

Пульс 86 уд /мин, ад 100/60 мм рт.ст. Живот мягкий, безболезнеHíûé. Печень пропальпировать не удалось. Моча со слов больной темного цвета.

Определяют АОА мембран эритроцитов у больной, которая равна 37,0, что указывает на легкую степень тяжести вирусного гепатита (определение АОА заняло 51 мин).

Концентрация общего билирубина крови равна 22,2 мкМ/л (норма 20,5), тимоловая проба 7 ед, (норма 4), АлАТ 6,44 мкМ/л ч (норма 0,68).

Больной проводят адекватную терапию.

Примеры, доказывающие возможность осуществления изобретения в граничных значениях AOA у больных вирусным гепатитом средней степени тяжести.

Пример б. Больная P., поступила е инфекционную больницу с жалобами на снижение аппетита, желтушную окраску кожи и склер глаз, слабость.

Общее состояние средней тяжести, Кожа и склеры глаз желтушны. В легких и ссрдце — без патологии, Живот мягкий. безболезненный. Печень выступает из-под правой реберной дуги на 2 см. Моча тем ная, кал светлый.

AOA мембран эритроцитов данной больной равна 17,900, определение заняло

50 мин. Выставляется диагноз: вирусный гепатит средней степени тяжести, Общий билирубин крови равен 115,4 мкМ/л, тимоловая проба 2,5 ед„АлАТ 6,7, мМ/n ч, Больной назначено соответствующее лечение.

Пример 7, Больной Ж., поступил в стационар с жалобами на тошноту, рвоту, снижение аппетита, потемнение мочи, 5

ЭО

При поступлении общее состояние средней тяжести. Кожа и видимые слизистые желтушны. Живот мягкий, безболезненный. Печень выступает иэ-под правой реберной дуги на 2 см. Моча темная.

Определяют АОА мембран эритроцитов, которая у больного равна 26,0 (определение заняло 47 мин). что позволяет выставить диагноз вирусного гепатита средней степени тяжести. Концентрация общего билирубина крови равна 96,6 мкМ/л, тимоловая проба 12 ед., ANAT 6,8 MM/ë ч, В соответствии с выставленным диагнозом проводят необходимое лечение.

Примеры, доказывающие возможность осуществления изобрегения в граничных значениях АОА у больных вирусным гепатитом тяжелой степени тяжести, Пример 8. Больной М., поступил в стационар с жалобами на отсутствие аппетита, тошноту, ноющие боли в правом подреберье, темную мочу, желтушность кожи и склер.

Общее состояние тяжелое. Кожные покровы и видимые слизистые интенсивно желтушны, B легких везикулярное дыхание.

Пульс 72 уд./мин, АД 115/60 мм рт,ст, Сердечные тоны приглушены. Живот мягкий, болезненный в эпигастрии, печень выступает из-под правой реберной дуги на 5 см.

Моча темная, АОА мембран эритроцитов у больного составила 9.5% (определение эанялс 49 м н), что указывает на вирусный гепатит тяжелой степени тяжести, Концентра,ия оощего билирубина крови равна 342,0 мкМ/л, имоловая проба 5,0 ед, АлАТ 7 26 мМ/л ч

Больному наэнача тся соответствующая терапия, Г! р и м е р 9, Больной Г„поступил с калобами на тошноту. рвоту. общую слабость, головную боль. желтушность кожи и склер глаз, снижение аппетита.

Г1ри поступлении общее состояние тяжелое. Кожа и склеры глаз желтушнь:. В легких и сердце — без патологических изменений. Живот мягкий, безболезненный при пальпации. Печень выступает иэ-под правого края реберной дуги на 4 см. Моча темная.

Определяют AGA мембран эритроцитое у больного, которая равна 16,6 (, (определение заняло 50 мин), что позволило выставить диагноз: вирусный гепатит тяжелой степени тяжести. Концентрация общего билирубина крови равна 188.1 мкМ/л, тимоловая проба 27 ед., АлАТ 6,72 мМ/л ч, В соответствии с выставленным диагнозом проводят адекватную терапию.

1673971

Составитель H. Гуляева

Техред M.Mîðãåíòàë Корректор О. Ципле

Редактор А. Огар

Заказ 2915 Тираж 389 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производств нно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина. 101

Предлагаемым способом произведено определение степени тяжести вирусного гепатита у 52 больных. Контролем служили показатели у 18 практически здоровых лиц.

Полученные результаты сравнивали с ре- 5 зультатами при использовании известного способа, Результаты представлены в таблице.

Повышение точности предлагаемого способа обусловлено тем, что соотношение 10 показателей между легкой и средней степени тяжести вирусного гепатита в предлагаемом способе на 14,4 превышает аналогичное соотношение в известном способе, а между средней и тяжелой сте- 15 пенями заболевания — на 23,67.

Достигается также сокращение времени определения степени тяжести вирусного гепатита: при использовании известного 20 требуется не менее 1,5-2 ч, в то время как по предлагаемому способу определяют степень тяжести вирусного гепатита в пределах 40 — 50 мин, т.е. в 1,5 — 2 раза скорее.

Таким образом, преимущества предлагаемого способа заключаются в том. что существенно ускоряется диагностика и повышается ее точность.

Благодаря быстрому и точному установлению степени тяжести вирусного гепатита по АОА мембран эритроцитов больным своевременно назначают необходимое лечение, Формула изобретения

Способ оценки степени тяжести вирусного гепатита, включающий исследование крови больных гепатитом, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения способа при одновременном повышении его точности, получают мембраны эритроцитов, определяют их антиокислительную активность в модели железоиндуцируемого окисления олеиновой кислоты по изменению быстрой вспышки хемилюминесценции и при величине антиокислительной активности более

27 степень тяжести вирусного гепатита оценивают как легкую, от 17 до 26 — как среднюю, менее 16 — как тяжелую.