Способ определения субпопуляций лимфоцитов на мазке

 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Целью является повышение точности способа за счет раздельного определения Т-хелперов, Т-супрессоров и нулевых лимфоцитов. Мазки инкубируют в среде для окраски на кислую фосфатазу. Инкубацию проводят при 37°С в течение 1,5 - 2 ч. При наличии в лимфоцитах 1 - 4 гранул фермента определяют Т-хелперы, при равномерном распределении фермента по цитоплазме - Т-супрессоры, а при 5 и более гранулах нулевые лимфоциты. Способ быстро и точно может определить иммунный статус организма.

C(К1S (ОПГТ(.КИХ (:ОГ ГИЛГГИС:ГИ IF CI(VIX

Рl (:11УЬ Г1ИК (ГГПУ G 01 N 1/28, 33/18

l ОСУДЛГ ГГПГ:FII IblVI КОМИГГ Г

ПО ИЗОЬРF TF-ГГИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ГIРИ Г K I I Г CCCF

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4424913/14 (22) 12.05.88 (46) 23.08.91. Бюл. N. 31 (71) Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии и Научно-исследовательский институт гигиены труда и профзаболеваний AMH СССР (72) T. P. Захарова и Л, А. Иванова (53) 616-0.89.9(088..8) (56) Хаит С. Е., Кузьмина Е. Г. "— Нафтилбутиратэстераза как маркер иммунологических вариантов. — Лабораторное дело, 1987. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУБПОПУЛЯЦИЙ ЛИМФОЦИТОВ НА МАЗКЕ

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, Целью изобретения является повышение точности способа за счет раздельного выявления T-хелперов, Т-супрессоров и нулевых лимфоцитов.

Способ осуществляют следующим образом.

Иэ пальца набирают кровь, готовят мазки, которые окрашивают красителем, содержащем нафтол ASBS, парарозанилин и уксуснокислый натрий. Краситель двухкомпонентный и готовится сначала маточный насыщенный раствор парарозанилина в горячей 2NHCI.

Далее готовится раствор А, содержащий 20 мг нафтол ASBS фосфата, 0,5 мл диметилформамида. 40 мл 0,1N уксуснокислого натрия. Затем 8 капель 4%-ного раствора азотнокислого натрия смешивают с 8 каплями 4%-ного раствора парарозанилина. Растворы А и В смешивают, фильтруют и

„., 5U „„1672268 А1 (57) Изобретение относится к медицине. а именно к иммунологии. Целью является повышение точности способа за счет раздельного определения Т-хелперов, T-супрессоров и нулевых лимфоцитов. Мазки инкубируют в среде для окраски на кислую фосфатазу. Инкубацию проводят при 37 С в течение 1,5 — 2 ч. При наличии в лимфоцитах

1-4 гранул фермента определяют Т-хелперы, при равномерном распределении фермента по цитоплазме — Т-супрессоры, а при

5 и более гранулах — нулевые лимфоциты.

Способ быстро и точно может определить иммунный статус организма. устанавливают рН 5,2-5,4. Мазки в этой инкубационной среде выдерживают в течение

1,5-2 ч при 37 С. Затем мазки промывают и сушат. В лимфоцитах под микроскопом определяют распределение фермента кислая фосфатаза по цитоплазме клетки.

Л имфоциты по расп ределению фермента в клетке относили к тем или другим популяциям.

Так, клетки, в которых был фермент в виде 1-4 гранул в цитоплазме, были отнесены к T-хелперам; клетки, в которых было до

5 и более гранул — к нулевым лимфоцитам.

Клетки, которые содержали фермент в виде равномерного распределения по всей цитоплазме отнесены к Т-супрессорам. Эти данные нашли полностью подтверждение при контрольных иммунологических исследованиях.

Пример 1. Ребенок 4 лет. Сделана прививка живой коревой вакциной.

1672268 и раздельного определения всех субпопуляций лимфоцитов.

Составитель Л,Стебаева

Редактор А,Шандор Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор Т.Колб

Заказ 2832 Тираж 387 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. ужгород, ул.Гагарина, 101

До вакцинации общее количество лимфоцитов в 1 мкл — 6930. На мазках выявлено следующее количество субпопуляций в лимфоцитах:

Т-хелперов 13 (, (2980 в 1 мкл);

T-супрессоров 16 (1109 в 1 мкл);

B-лимфоцитов 39 (2701 в 1 мкл); нулевых лимфоцитов 2 (139 в 1 мкл).

B процессе поствакцинации содержание T-xennepoe снизилось 0.035 ф, В-лимфоцитов 0,0632, напротив, T-супрессоры возросли до 24;ь и нулевые лимфоциты увеличились до 90, что дало возможность оценить состояние иммунизации в период вакцинации как положительное, Титр противокоревых антител был равен 1:64.

Способ позволяет точно определить иммунный статус организма за счет быстрого

Формула изобретения

5 Способ определения субпопуляций лимфоцитов на мазке путем их инкубации в среде, содержащей нафтол ASBS фосфат, парарозанилин и азотистокислый натрий и выявлении фермента кислой фосфатаэы в

10 клетках, отличающийся тем, что с целью повышения точности способа эа счет раздельного выявления T-хелперов, T-супрессоров и нулевых лимфоцитов, инкубацию проводят в течение 1,5 — 2 ч и при наличии до

15 1-4 гранул. фермента в клетке определяют

T-хелперы, при диффузном распределении фермента — T-супрессоры, а при 5 и более гранулах фермента — нулевые лимфоциты,