Штамм дрожжей caudida маlтоsа - продуцент 4,14- диметилэргоста-8,24(28)-диен-3 @ -ола

 

Изобретение относится к микробиологическому синтезу стеринов, в частности новому их продуценту. Цель изобретения - получение нового штамма дрожжей Candida maltosa ВКПМ У-827 - продуцента 4,14-диметилэргоста-8,24(28)-диен-3 -ола. Получен штамм дрожжей Candida maltosa, накапливающий 4,14-диметилэргоста- 8,24(28}-диен-3 /б-ол и способный расти на непищевом сырье. Выход продуцируемого стерина 60%. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4692979/13 (22) 22,05,89 (46) 15.10.91. Бюл.%38 (71) Ленинградский технологический институт им.Ленсовета (72) E.Н.Дурасова, 3.А.Жаковская, Н.П.Михайлова, К.А.Вьюнов и О.М.Коварская (53) 663.12. l4 (088,8) (56) R.À. Woods. Nystatin resistant mutants of

yeast. — д.Bacterlol., 1971, ч.108, М 1, р.69.

Сборник методик по генетике дрожжей — сахаромицетов. Л,: Наука, 1984, с.144. (54) ШТАММ ДРОЖЖЕЙ CANDIDA

MALT0SA — ПРОДУЦЕНТ 4, 14-ДИМЕТИЛЭРГОСТА-8,24 (28)-ДИЕН-Зф -ОЛА.

Изобретение относится к микробиологическому производству и представляет собой новый штамм дрожжей С.maltosa, .накапливающий 4,14-диметилэрогоста8,24(28)-диен-3 Р -ол (4,14-диметилфекостерин), который может найти применение в качестве стандарта для хроматографии стеринов в научно-исследовательских работах, а также в косметической промышленности как заменитель ланостерина.

Целью изобретения является получение нового штамма дрожжей Candida maltosa

ВКПМ У-827 продуцента 4,14-диметилэргоста-8,24(28)-диен-3 Р -ола.

Описываемый С.maltosa ВКПМ У-827, происходит от штамма С maltosa ВКПМ У241 и является мутантом, полученным под действием 6-¹rèäðoêñèëaìèíoïóðèíà (ГАП) и проявляющим более высокий уровень устойчивости по сравнению с исходным штаммом С maltosa ВСБ-569.

Обработку клеток исходного штамма

С.maltosa ВКПМ У-241 ГАП осуществляют на

„„ЯЛ „, 1684334 А1 (я)5 С 12 N 1/16, С 12 Р 33/00 (57) Изобретение относится к микробиологическому синтезу стеринов, в частности новому их продуценту. Цель изобретения— получение нового штамма дрожжей Candida

maltosa ВКПМ У-827 — продуцента 4,14-диметилэргоста-8,24(28)-диен-3ф -ола. Получен штамм дрожжей Candida maltosa, накапливающий 4,14-диметилэргоста8,24(28)-диен-3 р -ол и способный расти на непищевом сырье. Выход продуцируемого стерина 60%, 1 табл. плотной среде УАРД. С этой целью чашки

Петри с агариэованной средой УАРД засевают исходной культурой с концентрацией

4 8

10 — 10 кл/мл. В центр чашки помещают диск фильтровальной бумаги, на которой наносят 3 мкл раствора мутагена в диметил- в сульфоксиде (концентрация раствора 2 Ос, мг/мл). Чашки инкубируют 3 сут при 28 С и QQ переносят методом реплик на среду с нистатином. Через 3 cyt вокруг зоны действия мутагена вырастают нистатинустойчивые клоны, которые пересекают на среду с УАРД 4 и повторно проверяют на устойчивость к Ф нистатину. Далее иэ нистатинустойчивых штаммов выделяют стериновые фракции и . ф анализируют их физико-химическими мето- д дами. Среди прочих мутантов был выделен один штамм, накапливающий значительное количество 4,14-диметилфекостерина.

Штамм Candlda maltosa — продуцент

4,14-диметилзргоста-8,24(28)-диен-3 Р -ола депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов институ1684334 та "ВНИИГенетика", коллекционный номер

У-827, Штамм имеет следующие морфологокультуральные и физиолого-биохимические характеристики, Рост культуры на трех агаризованных стандартных средах:

a) среда УАРД, Величина клеток двухсуточной культуры (3,5 — 4,0)x(4,0 — 4,5) мкм.

Диаметр колонии 15-суточной культуры 1,1 см. Через месяц культура формирует кольцо, Штрих светло-кремовый, выпуклый, пастообразный, гладкий с ризоидным краем.

Пигмент в среду не выделяет; б) среда сусло-агар. Беличина клеток двухсуточной культуры (3,5 — 3,8)х(4,0 — 4,5) .мкм. Диаметр колонии 15-суточной культуры 0,8 см. Штрих светло-кремовый, выпуклый, пастообразный, гладкий с резоидным краем, Пигмент в среду не выделяет; в) среда минимальная. Величина клеток двухсуточной культуры (3,5 — 3,8)х(4,5 — 4,5) мкм. Диаметр колонии 15-суточной культуры 0,8 см, Штрих розовый, выпуклый, пастообраэный, гладкий с риэоидным краем.

Пигмент в среду не выделяет.

В тонком слое сред УАРД и сусло-агар образует характерный псевдомицелий, На среде Городковой и среде с ацетатом натрия спор не образует.

Оптимальные значения температуры выращивания 28,2ОС, рН 4,5.

Штамм С,maltosa ВКПМ У-827 усваивает глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, ксипозу, углеводороды, а также спирты — этанол, глицерин.

Источником азотного питания штамма являются аммонийные соли и аминокислоты. Нитраты и нитриты не усваивает.

Имеет окислительный тип метаболизма. Углеводы, аминокислоты, липиды и углеводороды окисляет до ацетил-КоА и далее через цикл трикарбоновых кислот до С02 и

Н20.

Устойчив к полиеновому антибиотику нистатину при концентрации его в среде 45 мкг/мл.

Штамм является устойчивым к нистатину мутантом.

Штамм хранится в холодильнике при

+4 С на .косяках с агаризованной средой следующего состава, г (на 1 л воды): агарагар 20; пептон 20; дрожжевой экстракт 5: глюкоза 20. Срок пересева 1 — 2 раза в год.

Штамм также может храниться в лиофильно-высушенном состоянии l3 запаянных ампулах на носителе "Файб".

Пример 1. Культивирование штамма

С.п айоз ВКПМ У-827 на среде УАРД соста5

55 ва (г/л): глюкоза 20, пептон 20; дрожжевой экстракт 5.

Культивирование дрожжей проводят в колбах Эрленмейера в 200 мл среды на качалке 200 об/мин при температуре 28,2 С.

Биомассу отделяют центрифугированием. С

1 л среды получено 12,2 — 0,2 г биомассы.

Выделение и анализ стериновой фракции проводят способом Бревина и Двадса в модификации Вудса. Получают 11,47 — 1,5 мг стеринов, иэ них 6,88 — 1,2 мг 4,14-диметилфекостерина (60 ). Эргостерин, являющийся примесью, отделяют двойной перекристаллизацией в ацетоне.

Пример 2. Культивирование штамма с С,maltosa ВКПМ У-827 на среде с углеводородами нефти (г/л): н-парафины 1 о (ч Н4)2504 3,57

NH4H2PO4 0,8

KCI 0.5

Mg SO4 0,25 .FeSO4,7Í2O 0,015

2nSO4.7Í2O 0,015

MnS04.5Н2О 0.015

NaCI 0,0063 при рН 5,5, Условия культивирования те же, что в примере 1, Выделение и анализ стеринов проводят аналогичным методом. С 1 л среды получают 9,5 — 0,2 r биомассы. Выделяют

9,68 — 1,5 мг стеринов. Количество 4,15-диметипфекостерина составляет 5,81 — 1,2 мг (60 )

Достоинством предлагаемого штамма является то, что он способен усваивать н-парафины.

Штамм У-827 предлагается использовать в качестве продуцента 4,14-диметилэргоста8,24(28)-диен-3 Р -ола (4,14-диметилфекостерина), который может быть использован в качестве стандарта для хроматографии, а также как заменитель ланостерина в косметической промышленности.

Из нижеследующей таблицы видно, что в отличие от исходного штамма, содержащего преимущественно эргостерин, получен- . ный штамм С.maltosa. ВКПМ У-827 накапливает значительное количество метилированных стеринов.

Состав стериновых фракций исходного и мутантного штаммов С maltosa приведен в таблице, Формула изобретения

Штамм дрожжей Candlda гпаИоэа ВКПМ

У-827 — продуцент 4;14-диМетилэргоста-8,24 (28)-диен-3 Р -ола.

1684334

Составитель О.Скородумова

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Т.Палий

Редактор Т.Клюкина

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина. 101

Заказ 3485 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5