Способ определения токсичности химических веществ

 

Изобретение относится к медицине, преимущественное применение найдет в биохимии и токсикологии при определении токсичности химических веществ Целью изобретения является ускорение способа и повышение его экономичности за счет снижения количества лабораторных животных Цель достигается тем, что в гомогенате ткани печени лабораторных животных определяют активность фермента ацилазы (Ы-ацил-Д1 -аминокислота-аминогидролаэы, К.Ф 3.5.1 14) через 2-4 ч после введения животным токсического вещества. О токсоч ости вещества гудят по достоверному снижению уровня активности фермента по сравнению с контролем Способ позволяет в два раза ускорить определение токсичности химических веществ

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5))л G 01 N 33/68

ГОСУДА Р СТ В Е ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4378767/14 (22) 12.02.88 (46) 23.10.91. Бюл, М 39 (71) Волгоградский государственный медицинский институт (72) В,И, Фролов, С.А, Жуков и В.В. Новочадов (53) 616.07 (088,8) (56) Авторское свидетельство СССР

N. 1163264, кл. G 01 N 33/48, 23,06,85. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ (57) Изобретение относится к медицине, преимущественное применение найдет в биохимии и токсикологии при определении

Изобретение относится к медицине, преимущественно применение найдет в биохимии и токсикологии, и может быть использовано для определения токсичности химических веществ.

Целью изобретения является ускорение способа и повышение его экономичности.

Способ осуществляют следующим образом.

Вводят токсический агент лабораторным животным, Делают экспозицию, обеспечивающую развитие токсического действия (2 — 4 ч). Забивают животных, извлекая печень и почки. Определяют активность фермента ацилазы (N-ацил-Дб-аминокислота-аминогидролазы, КФ 3.5.1.14) в тканях печени и почек. Ацилазу тканей определяют по следующей методике. К 0,9 мл 0,01 M раствора N-формил-Д -метионина в 0,1 M. Ы 1686376 А1 токсичности химических веществ. Целью изобретения является ускорение способа и повышение его экономичности за счет снижения количества лабораторных животных.

Цель достигается тем, что в гомогенате ткани печени лабораторных животных определяют активность фермента ацилазы (N-ацил-Д1-аминокислота-аминогидролаэы, К.Ф.3.5.1.14) через 2 — 4 ч после введения животным токсического вещества. О токсичности вещества судят по достоверному снижению уровня активности фермента по сравнению с контролем. Способ позволяет в два раза ускорить определение токсичности химических веществ. фосфатном буфере (рН 7,5) добавляют 0,1 мл экстракта ткани. Отбирают 0,2 мл из этой инкубационной смеси и добавляют их к 3,0 мл 0,1 M боратного буфера (рН 9,7) (конт- О рольная проба). Через 1 ч инкубации при Q0

37 С отбирают изинкубациь .ной смеси 0,2 ()Ь мл и добавляют к 3,0 мл Q,i М боратного (Д буфера (рН 9,7) (опытная проба). Затем к контрольной и опытной пробе добавляют по

0,5 мл красящей смеси, состоящей из 0,03 ного раствора о-фталевого альдегида и

0,01;ь-ного раствора Р -меркаптоэтанола в г"

0,1 М боратном буфере (рН 9,7) с последующей спектрофотометрией опытной и контрольной проб при длине волны 340 нм.

Пример 1. Группе беспородных белых мышей (самцов) массой 18 — 20 г внутрибрюшинно вводят эндотоксин, выделенный из

Salmonella typhimurium, в дозе 10 мг/кг веса. Контрольной группе параллельно вводят

1686376 t8п, после ввелення СС!, нл/экг

4 8 10 (глюкоза, 52-ныл раствор) Актнвность апнлазн, Энлотокснн„

Мт m реня1 ч Контрольная группа, Мял

Фернен

2, 1 - 0, 25 2, 07 - О, 31 1, 77 + 0, 22 1, 92 3 О, 28 3, 3 т О, 3

1,97 + 0,22

3,0 !: 0,29

AllHJIRSS 1 печенн

1,22 . 0,25 3,0 0,28

t 1 + 0,25

1,91 + 0,17

1,2 10,23 1,195 0,22

1,37550,26 1,4110,29

1,17 0,27

l,54 tC,С2

2,29т0,39

2,9т0 3

1,3510,13* 3,1- 0,25

t,94 0,43 3 "+0,26

2,140,36 3,1+0,21

3,3 ." 0,38

3,1!: 0,27

3,2 . 0,3

2,64+0,37 2,5510,31

2,4110,41

2,9 - 0,28

3 0 0,26 2,75 0,28 2,461-0 31 к

Разлнчне опыта н контроля постоверно, вероятность опнокп ня полее 0,05.

Составитель T.MàíþTèíà

Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор M. Êó÷åðÿâàÿ

Редактор И«Дербак

Заказ 3595 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, yn,Ãàãàðèíà, 101

s том же количестве физиологический раствор, Опытная группа состоит из 24 животных, а контрольная — из 30. Затем животных забивают через 2,4 и 6 ч соответственно. У них берут и приготавливают экстракт из печени, в котором затем определяют активность фермента ацилазы по предлагаемой методике. Полученные данные статистически обрабатывают методами вариационной статистики с учетом коэффициента Стьюдента.

Пример 2. Группе беспородных белых мышей (самцов) массой 22-24 г внутрибрюшинно вводят четыреххлористый углерод в растворе в дозах 1 и 4 мл/кг веса.

Контрольной группе вводят физиологический раствор, Опытная группа состоит из 21 животного на каждую дозировку вводимого вещества, Затем животных забивают, у них берут печень, готовят экстракт и определяют активность фермента ацилаэы.

В таблице показано достоверное уменьшение активности ацилазы через 2-4 ч после введения эндотоксина и четыреххлористого углерода.

Использование предлагаемого способа позволит в 2 раза ускорить определение

5 токсичности химических веществ по сравнению с известным, Формула изобретения

Способ определения токсичности хими10 ческих веществ, включающий введение лабораторным животным токсического агента, забой животных, приготовление гомогената ткани печени с последующим определением активности фермента, отличающийся

15 тем, что. с целью ускорения способа и повышения его экономичности эа счет снижения количества лабораторных животных, определяют активность фермента ацилазы (Nацил-Д =аминокислота-аминогидролазы) и

20 по снижению уровня активности фермента в течение 2-4 ч после введения вещества по сравнению с контролем судят о токсичности вещества..