Способ определения мутагенного действия химических веществ

 

Изобретение относится к медицине, а именно к токсикологии. Цель изобретения - повышение точности способа. С этой целью за 48-72 ч до введения исследуемого вещества у экспериментального животного осуществляют забор крови в количестве 0,5-1,0% от массы тела. Через 22-24 ч после введения препарата исследуют костный мозг и в случае, если количество абберантных клеток составляет 2,9% и более от общего числа клеток, определяют мутагенное действие вещества. Применение способа позволяет увеличить точность определения мутагенного действия химических веществ на 100% по сравнению с известным способом.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)з А 61 В 5/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4754897/14 . (22) 12.07.89 (46) 15.11.91. Бюл. hk 42 (71) Донецкий медицинский институт им. М.Горького (72) Ю.Н.Талакин, В.Г.Курилова, Л.А,Иванова и M.В.Савченко (53) 615,475 (088.8) (56) Определение мутагенных и бластомогенкых свойств веществ, Метод, Рекоменда-. ции. M„1983, с. 22. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МУТАГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ

Изобретение относится к медицине, а именно к токсикологии.

Способ осуществляют следующим обрй-зом.

У здоровой крысы из подьяэычной вены берут кровь в количестве 0,1-1.0% от массы тела, затем через 48 — 72 ч с памащьо зонда в желудок вводят изучаемое . вещество, В исследуемую группу отбирают самцов одного возраста с приблизительно одинаковой массой (180 — 210 г). Количество животных в каждой группе 11 — 12.

Через 22-24 ч после введения изучаемых веществ готовят препараты., Внутрибрюшинно вводят 0,05%-ный водный раствор колхицина из расчета

0,01 мл/г массы тела крыс. Через 2 ч забивают крысу методом растяжения спинного мозга. Выделяют бедренную кость, очищают от мышц, спинной мозг вымывают свежеприготовленным 0,55%-ным раствором

Ъ хлористого калия, подогретым до 37 C. о

„„ Ы„„1690672 А1 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к токсикологии. Цель изобретения— повышение точности способа. С этой целью эа 48 — 72 ч до введения исследуемого вещества у экспериментального животного осуществляют забор крови в количестве

0,5-1.0% от массы тела. Через 22 — 24 ч после введения препарата исследуют костный мозг и в случае, если количество абберантных клеток составляет 2,9% и более от общего числа клеток, определяют мутагенное действие вещества, Применение способа позволяет увеличить точность определения мутагенного действия химических веществ на 100% по сравнению с известным способом. Тщательно ресуспендируют костный мозг в растворе хлористого калия при

37 С. Инкубация в термостате (+37 С) осуществляется в течен .е 20 мин с момента взаимодействия хлористым калием. Центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, отбирают надос едок.

К клеточному осадку добавляют 2 мл охлажденного фиксатора, состоящего из охлажденного метилового спирта и ледяной уксусной кислоты (3:1), 30 мин выдерживают в холодил ь нике. Дважды меняют фиксатор с интервалом в 1 ч, клетки все время держат на холоде.

Препараты готовят путем нанесения на обезжиренное мокрое стекло клеточной взвеси в охлажденном фиксаторе с расстоянием 15 — 20 см. После высушивания маркируют препараты, окраска по Романовскому.

Изучают препараты под микроскопом в иммерсионной системе. При учете аберра1690672

Формула изобретения

Способ определения мутагенного действия химических веществ, включающий введение исследуемого вещества экспериментальному животному и выявление аберрантных клеток в костном мозге, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, за 48 — 72 ч до введения вещества у животного берут кровь в количестве 0,5-1,0 от массы тела, через 22-24 ч после введения препарата исследуют костный мозг и в случае, если количество абберантных клеток составляет 2,9 и более от общего числа клеток, определяют мутагенное действие вещества.

Составитель А, Бобров

Редактор M. Петрова Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор И. Муска

Заказ 3871 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул,Гагарина, 101 ций используют Денверскую номенклатуру.

Учитывают метафазы, содержащие 44й2 хромосомы, из структурных аномалий различают разрывы {с парными и одиночными фрагментами). Симметричные и асимметричные хромосомные и хроматидные транслокации не отмечают.

Пример 1. У здоровой крысы из подъязычной вены берут кровь в количестве

0,5 от массы тела, Через 48 ч с помощью зонда в желудок вводят изучаемое вещество. Через 24 ч после введения изучаемых веществ готовят препараты по следующей методике.

Бнутрибрюшинно вводят 0,05 -ный воднь4 Й pGcTBOp колхици.!а из расчета

0,01 мл/г массы тела крыс. Через 2 ч забивают крыс методом растяжения спинного мозга, выделяют берден ную кость, очищают от мышц, спинной мозг вымываютсвежеприготовленным 0,55 /-ным раствором хлористого калия, подогретым до 37ОС. Тщательно ресуспендируют костный мозг в растворе хлористого калич.

Инкубация в термостате (+37"С) осуществляется в течение 20 л ин с момента взаимодействия хлористым калием, цент. рифугируют 5 мин при 1000 об/мин, отбирают надосадок, К клеточному ос дку добавляют 2 мл охлажденного фиксатора, состоящего из охлажденного метилового спирта и ледяной уксусной кислоты (3:1), 30 мин выдержива-, ют в холодильнике, Дважды меняют фиксатор с интервалом в 1 ч, Клетки все время держат на холоде.

Препараты готовят путем нанесения на обез>киренное мокрое стекло клеточной взвеси в охлажденном фиксаторе с расстоянием 15-20 см. После высушивания маркируют препараты, окраска по Романовскому, Изучают препараты под микроскопом в иммерсионной системе; При учете аберраций пользуются Денверской номенклатурой, Учитывают метафазы, содер>кащие

44+ 2 хромосомы, из структурных аномалий различают разрывы (с парными и одиночны5

30 ми фрагментами). Симметричные и асимметричные хромосомные и хроматидные

Tp8HcëÎê8öèé не Отме -иют.

При анализе полу iенных препаратов на

100 метафазных пластинок выявлена 1 аберрантная метафаза. СделGH вывод об отсутствии мутагенного эффекта у исследуемого вещества, Пример 2. У здоровой крысы из подьязычной вены берут кровь в количестве

1,0о от массы тела. Через 72 ч с помощью зонда в желудок вводят исследуемое вещество, Через 22 ч после введения препарата внутрибрюшинно вводят 0,05. . -ный раствор колхицина. Затем крысу забивают, выделяют бедренную кость, вымывают костный мозг, тщательно его ресуспендируют.

Инкубацию в термостате (37 С) осуществляют в течение 20 мин, центрифугируют

5 мин при 1000 об/мин, отбирают надосадок, фиксируют препарат. Наносят на стекло клеточную взвесь. Маркируют препараты, окрасками>по Романовскому.

Изучают препараты под микроскопом.

При анализе препаратов выявлено 3,0 аберрантных клеток, Сделан вывод о наличии мутагенного эффекта у исследуемого препарата, Предлагаемый способ позволяет по сравнению с известным повысить точность определения мутагенного действия химических веществ на 100 .