Способ диагностики острых респираторных вирусных инфекций у детей первого года жизни

 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в диагностике респираторных вирусных инфекций у детей. Целью изобретения является повышение точности диагноза заболеваниями у ребенка с использованием клинико-лабораторных показателей. Для этого одновременно с обследованием ребенка проводят иммунофлюоресментное и серологическое обследования находящийся с ним в контакте матери. Полученные показатели матери и ребенка сравнивают. Диагноз ребенка ставят следующим образом - при сопоставлении показателей ребенка и матери и при положительной иммунофлюоресценции в мазках из носа и по нарастанию титра антител в крови матери в 8 и более раз к одному из вирусных агентов. Положительный эффект выражается в повышении точности диагностики на 25%. 4 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)э G 01 и 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4648090/14 (22) 02.01.89 (46) 15.11.91. Бюл, 1Ф 42 (71) Ленинградский научно-исследовательский институт детских инфекций (72) 3.А.Осипова, О.А.Аксенов, Г.П.Курбатова и В.В.Иванова (53) 615.373 (088.8) (56) Вирусология. Методы и/р. ЛИИХИ. M.:

Мир, 1988, с.263, 304 — 301. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОСТРЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У ДЕТЕЙ ПЕРВОГО ГОДА ЖИЗНИ (57) Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в диагностике респираторных вирусных инИзобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в диагностике респираторных вирусных инфекций у детей.

Целью изобретения является повышение точности диагностики, Для уточнения диагноза заболевания у ребенка до 1 года. у которого полностью или частично отсутствует свечение в мазках-отпечатках из носа, отсутствует диагностический прирост титра антител в крови класса

JgM u JgG производят иммунофлюоресцентное и серологическое обследование контактирующей с ним матери. Затем экспресс-диагностические и серологические показатели матери и ребенка сопоставляются и при положительной иммунофикоресценции и по нарастанию титра антител в крови матери в 8 и более раз к одному иэ,,5Q„„1691746 А1 фекций у детей. Целью изобретения является повышение точности диагноза заболеваниями у ребенка с использованием клинико-лабораторных показателей. Для этого одновременно с .обследованием ребенка проводят иммунофлюоресцентное и серологическое обследования находящийся с ним в контакте матери, Полученные показатели матери и ребенка сравнивают. Диагноз ребенка ставят следующим образом— при сопоставлении показателей ребенка и матери и при положительной иммунофлюоресценции в мазках иэ носа и по нарастанию титра антител в крови матери в 8 и более раз к одному из вирусных агентов.

Положительный эффект выражается в повышении точности диагностики на 25 . 4 табл. вирусных антигенов устанавливают диагноз у ребенка;

Нами впервые предложено для уточнения диагноза у ребенка обследовать дополнительно контактирующую с ним мать, поскольку она, особенно при естественном вскармливании, имеет больше контакта с ребенком и может инфицироваться от него и переносить аналогичную инфекцию (в острой и инаппарантной форме). Возможно и наоборот — мать более часто общаясь с окружающими людьми, является источником инфекции для ребенка. Как показали исследования, иммунный ответ матери характеризуется быстрой выработкой достаточного количества антител класса IgM u

JgG, которые в случае кормления ребенка переходят к нему в виде вновь синтезированного специфического JgA. Таким обра зом, маркирование общего инфекционного

1691746

35 процесса М0 иммунному {серологическому) ответу матери, находящейся в близком контакте с ребенком, более целесообразно, а степень иммунного ответа у матери более выражена, т,е. антитела более видны, чем у ребенка, и выявить их легче, Кроме того, иммунофлюоресцентное обследование матери путем забора материала из носа не представляет особенных трудностей, и ранее выявление свечения в мазках дает воэможность проводить своевременную профилактику.

Нами предложено также сопоставлять данные матери и ребенка для уточнения диагноза, причем увеличение титра антител в крови матери в 8 и более раз считаем более достоверным, так как у кормящей матери в течение дня может меняться концентрация различных защитных факторов и только значительное увеличение в 8 и более раз является диагностическим показателем нарастания титра антител, Положительной считается иммунофлюоресценция, когда в мазках из носа матери и ребенка наблюдается выраженное свечение (++) и более, Метод осуществляется следующим образом, При поступлении больного ребенка до 1 года в клинику ОРВИ вместе с матерью важно установить у него предварительный диагноз и соответственно выявить у матери не болела ли она в ближайшее время острой респираторной инфекцией. После этого произвести забор материала в первые часы поступления одновременно как у ребенка, так и у матери. Для иммунофлюоресцентной диагностики ОРВИ берут мазки. Перед взятием материала полость носа очищают тампоном от слизи, лейкоцитов и слущенных клеток. Для получения большего количества клеток цилиндрического эпителия сухими ватными тампонами берут мазки с нижней носовой раковины, а при необходимости дог!олнительно и с задней cTQHKM гортани.

Материал тотчас помещают в пробирки с 2 — 3 мл физиологического раствора (рН 7,2 — 7,4) и встряхивают в течение 1 — 3 мин. Затем тампоны удаляют и содержимое центрифугируют 6 — 8 мин при 3000 об/мин, После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, а из осадка на тщательно обезжиренные предметные стекла наносят

7 капель на 1 стекло, которые сушат под вентилятором при комнатной температуре и фиксируют в ацетоне при +40C. не менее

10 мин. Затем фиксированные мазки окрашивают флюоресцирующими сыворотками к различным антигенам: PC Ад, В. А, ПГi, ПГ2, Мк (на каждую каплю мазка 1 каплю

-"ooòâàòñòâóþùåé сыворотки в рабочем разведении). Мазки помещают в термостат на

+37 С на 30 мин, затем смывают буферным раствором коньюгаты и мазки высушивают под вентиля ором.

Микроскопия препаратов, приготовленных из эпителиальных клеток HocoBblx ходов больного ребенка и контактирующей с ним матери, является заключительной стадией иммунофлюоресцентного анализа, Специфической считают отчетливую флюоресценцию в виде гомогенного лли гранулярного свечения ядра, цитоплаэмы или какой-либо части ее в структурно сохранившейся клетке. Положительным результатом можно считать наличие достаточно убедительного свечения в структурных элементах не менее 2 — 3 клеток, при непременном отсутствии подобной картины в контрольных препаратах.

Контролями к каждому иэ препаратов служат полученные параллельно 2 — 3 препарата от тех же обследуемых, обработанные ФИТЦ-глобулинами против других антигенов. Для оценки интенсивности флюоресценции мы используем 2-х крестовую шкалу учета, при которой обозначения +. (плюс — минус) соответствуют

3 — 3 светящимися клетками (++) — от 5 до 7 светящихся клеток, +++,- — больше 7 хорошо светящихся клеток, Кроме того, у ребенка и контактирующей с ним матери подлежат исследованию парные сыворотки крсви, из которых первая взята в остром периоде (желательно в первые 3 дня) болезни, вторая — в периоде реконвалесценции (желательно не ранее 2 недель после первой).

Экспресс-диагностическим методом, основанным на выявлении антите класса ig

M в первой сыворотке обследуемых, можно уточнить иммунофлюоресцентный диагноз

OPB¹ Он проводится следующим образом.

Перед постановкой реакции торможения гемагглютинации (РТГА) готовится рабочее разведение сыворотки обследуемого (1;8) и прогревается в бане при +56 С 30 мин, затем делят обработанные сыворотки на 2 порции и к одной в расчете 1; 2 добавляют физиологический раствор, а к другой порции 0,15 м раствор цистеина. Пробы ставя на контакт при +4 Ñ на 24 ч, после чего с сыворотками ставят обычным способом

РТГА, т,е. к разведенным сывороткам 1/16;

1/32, 1/128; 1/236, 1/512 добавляют 4 АЕ соответствующего антигена и после . двухчасового контакта заливают 1%-ными кури-. ными эритроцитами. Положлтельным результатом считают снижение титра антител, обработанных цистеином, в 4 — 8 и более раз.

1691746

В дополнение к вышеуказанному проводят обследование парных сывороток крови ребенка и матери для выявления диагностической серноконверсии, т.е. прироста титра антител во второй сыворотке к первой в 4-8 раз и более. Для этого капельным методом ставят РСК с парными сыворотками обследуемых с антигенам РС, Ад, А, В, Ор, Мк и РТГА с антигенами А1,А, В, ПГ1,2,3 (серологические тесты РТГА и РСК ставят общеизвестным способом), Основным отличием предлагаемого способа .является установление диагноза заболевшего ребенка путем сопоставления его показателей с материнскими.

Пример 1. Ребенок поступает в клинику с явными проявлениями ОРВИ. ухаживающая за ним мать находится в клинике. При сборе анамнеза у ребенка устанавливают предположительную аденовирусную инфекцию. При опросе матери выясняется, что и она имеет легкое недомогание, Показатели иммунофлюоресцентного и серологического обследования и риведен ы в табл, 1 — 4.

При сопоставлении данных матери и ребенка выявлено свечение в иммунофлюоресценции к аденовирусному антигену.

Таким образом, при сомнительной иммунофлюоресценции у ребенка АД(1) удалось уточнить диагноз по иммунофлюоресцентному свечению в мазке матери Ад (+++).

В мазках ребенка к 2 антигенам — Ад и

PC выявлено свечение на (+). Диагноз можно уточнить серологическими .данными матери, В первой ее сыворотке обнаружено

8-кратное снижение. титра антител к Ад-вирусу при обработке цистеином, что говорит о наличии антител класса М. В связи с этим имеются основания установить ребенку аденовирусную инфекцию, В данном режиме у ребенка клинически устанавливается аденовирусная инфекция, хотя отсутствует положительная иммунофлюоресценция и серология. У матери выявлено четкое свечение в мазках иэ носа (+++) к Ад-вирусу и имеются антитела класса М к аденовирусу (в первой сыворотке после обработки цистеином снижение титра антител в 8 раз), Исходя из полученных данных, мы

35 считаем вправе поставить у ребенка аденовирусную инфекцию.

В представленном примере у ребенка имеется аденовирусная инфекция. поскольку у контактирующей с ним матери есть основные диагностические показатели этой инфекции - иммунофлюоресценция к Ад (+++), прирост титра антител к аденовирусу в 8 раз.

Таким образом, из представленных примеров видно, что диагностические показатели матери играют существенную роль в уточнении диагноза у ребенка и дают возможность в течение 2-х дней установить диагноз как у ребенка, так и у матери.

В связи с этим считаем, что предлагаемый способ имеет медико-социальMûé эффект, так как установление диагноза ребенка до одного года представляет определенные трудности. Однако, как показали наши исследования, дополнительное обследование матери дает возможность уточнить диагноз заболевания ребенка и правильно и своевременно провести лечебные мероприятия не только ребенка, но и матери, чем предотвратить распространение инфекции и углубление процесса.

Из 52-х обследованных нами детей до

1 года, больных ОРВИ, предложенным способом удалось уточнить диагноз в 25;4 случае, что дало определенный эффект, т,е. своевременно и правильно лечить ребенка и провести профилактические мероприятия у матери. Особенно это важно в плане предупреждения внутрибольничных инфекций.

Формула изобретения

Способ диагностики острых респираторных вирусных инфекций у детей первого года жизни путем выявления вирусов в слизистой носа и антител крови, о т л и ч а юшийся тем, что. с целью повышения точности диагностики при отрицательных показателях диагностики у ребенка дополнительно определяют у матери наличие вируса в слизистой носа и антитела к респираторным вирусам в сыворотке крови и при наличии у матери вируса в слизистой носа и нарастании ее антител на 7 — 8 день наблюдения в 8 и "îëåå раз диагностируют острую респираторную вирусную инфекцию.

1691746

Таблица 1 о

Таблица 2

Таблица 3

Таблица 4

Составитель П.Бонарцева

Редактор М.бокарева Техред М.Моргентал Корректор И.Муска

Заказ 3924 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям ври ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101