Способ определения эндотоксемии при ожоговой болезни

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения эндотоксемии при ожоговой болезни. Цель изобретения - повышение точности. У больного с ожогами производят забор крови, выделяют сыворотку и лейкоциты и вычисляют индекс токсичности. При его значении больше 10% определяют эндотоксемию. По сравнению с прототипом на 30% снижается количество ложноположительных результатов и на 12% - ложноотрицательных.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУбЛИК (ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21} 4662773/14 (22) 14.03.89 (46) 15.11,91, Бюл. М 42 (71} Нижегородский научно-исследовательский институт травмотологии и ортопедии (72} Г.Я.Левин, С.Б.Кораблев, А.В.Неделяева и P.М.Кушнер (53) 615.375 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

t4 1018015, кл. G 01 и 33/48, 1983. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСЕМИИ ПРИ. ОЖОГОВОЙ БОЛЕЗНИ

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения токсичных свойств сыворотки крови при различных заболеваниях.

Целью изобретения является повышение точности способа, Способ осуществляют следующим образом.

Из испытуемой пробы крови выделяют лейкоциты и сыворотку. Полученную сыворопу (0,1 мл) разводят в 4 раза физиологическим раствором(0,3 мл} и фильтруют через владипоровый фильтр УАМ-100. При этом из сыворотки отфильтровываются белки с молекулярной массой выше 10 кД. В осадке остаются среднемолекулярные пептиды, обуславливающие токсические свойства сыворотки, Лейкоциты выделяют из гепаринизированной крови общепринятым методом вЂ” кровь отстаивают в термостате . при 37 С под углом 450 в течение 30 мин.

Отсасывают надосадочную плазму, обогащеннуюю лейкоцитами. Лейкоциты осаждают Ж 1691747 А1 (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения эндотоксемии при ожоговой болезни.

Цель изобретения вЂ” повышение точности. У больного с ожогами производят забор крови, выделяют сыворотку и лейкоциты и вычисляют индекс токсичности. При его значении больше 10 (определяют эндотоксемию. По сравнению с прототипом на

30 снижается количество ложноположительных результатов и на 12ф, вЂ” ложноотрицател ьн ы х. путем центрифугирования при 1000 об/мин и дважды отмывают физиологическим раствором.

К осадку отмытых лейкоцйтов добавляют физиологический раствор в таком количестве, чтобы довести концентрацию лейкоцитов примерно до 2х10 клеток (e среднем 0,4 мл физиологического раствора). Точную исходную концентрацию лейкоцитов подсчитывают в камере Горяева, предварительно добавив к 0.1 мл взвеси лейкоцитов 0.2 мл физиологического раствора и 1,6 мл 5ф>-ного раствора уксусной кислоты (исходная проба).

К 0,1 мл лейкоцитарной взвеси добавляют 0.2 мл физиологического раствора и помещают в термостат при 37 С на 90 мин (контрольная проба). К 0,1 мл лейкоцитарной взвеси добавляют 0,2 мл ультрафильтрата аутологичной сыворотки и помещают в термостат при 37 С на 90 мин (опытная прсба). После инкубации в каждую пробу добавляют 1,6 мл 5$-ного раствора уксусной кислоты и подсчитывают количество лейкоцитов в каждой пробе.

1691747

Степень токсичности испытуемой лю токсичности сыворотки (ПТС). сыворотки оценивают по показате

„„. количество лейкоцитов в конт ольной и обе -количество лейкоцитов в опыте исходное количество лейкоцитов

19 в опытной пробе

ПТС вЂ” Х 100% =9 %

ПТС вЂ” Х 100% =25%

Пример 1, Кровь интактной крысы собирают в 2 пробирки вЂ” пробирка с гепарином (50 ЕД на 1 мл крови) для получения лейкоцитарной взвеси и пробирка для консерванта для получения сыворотки.

После свертывания крови в пробирке без консерванта сгусток отделяют от стенок пробирки и центрифугируют при

1500 об/мин в течение 10 мин, Полученную сыворотку фильтруют через владипоровый фильтр УАМ вЂ” 100 с помощью мембранной установки под давлением 2 атм. 8 опыте используют ультрафильтрат аутологичной сыворотки.

Лейкоциты выделяют из гепариниэированной крови общепринятым методомвЂ” кровь отстаивают в термостате при 37 С под углом 45 в течение 30 мин. Отсасывают надосадочную плазму, обогащенную лейкоцитами, Лейкоциты осаждают путем центрифугирования при 1000 об/мин и дважды отмывают физиологическим раствором по 1 вЂ” 2 мин.

К осадку отмытых лейкоцитов добавляют физиологический раствор s таком ко личестве, чтобы довести концентрацию лейкоцитов примерно до 2х10 клеток (в

6 среднем 0,4 мл физиологического раствора). Точную исходную концентрацию лейкоцитов подсчитывают в камере Горяева, предварительно добавив к 0,1 мл взвеси лейкоцитов 0,2 мл физиологического раствора и 1,6 мл 5 -ного раствора уксусной кислоты (исходная проба). К контрольной пробе, состоящей из 0,1 мл лейкоцитарной взвеси, добавляют 0,2 мл физиологического раствора и помещаю в термостат при 37 С на 90 мин. К опытной пробе, состоящей из

0,1 мл лейкоцитарной взвеси, добавляют

0,2 мл ультрафильтрата аутологичной сыворотки и помещают в термостат при 37 С на 90 мин. После инкубации в каждую пробу добавляют 1,6 мл 5%-ного раствора уксусной кислоты и подсчитывают количество лейкоцитов в каждой пробе.

Получены следующие результаты;

Количество лейкоцитов в исходной пробе 23

Количество лейкоцитов в контрольной пробе 21

Количество лейкоцитов

Пример 3. Ожог крысе наносят контактным способом (площадь ожога 25% по10 верхности тела, И! Б степени), Через 3 дня после ожога кровь собирают в 2 пробирки и проводят анализ по методике, описанной в примере 1.

Получены следующие показатели.

15 Количество лейкоцитов в исходной пробе 71

Количество лейкоцитов в контрольной пробе

Количество лейкоцитов

20 в опытной пробе 48

25 Способ определения токсичности сыворотки крови позволяет проще и точнее оценить не изученное ранее действие токсинов на лейкоциты; дает возможность определить токсичность сыворотки крови эа 2,5вЂ”

30 3 ч; может быть использован не только для определения уровня токсемии при ожоговой болезни, но и для оценки эффективности проводимого лечения, Кроме того, предлагаемый способ может применяться

35 для определения токсичности крови и при других заболеваниях (поражениях печени, почек, острых отравлениях и пр.).

По сравнению с прототипом снижается количество ложноотрицательных результа40 тов на 30, а ложноположительных на 12%.

Формула изобретения

Способ определения эндотоксемии при ожоговой болезни, включающий забор крови больного, выделение сыворотки, инкуба45 цию с форменными элементами крови с последующим вычислением показателя токсичности, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, из крови дополнительно выделяют лейкоциты и

50 инкубируют их с сывороткой, при этом сыворотку предварительно подвергают ультрафильтрации, и при индексе токсичности более 10% определяют эндотоксемию.

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в диагностике респираторных вирусных инфекций у детей

Способ дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии у детей // 1691745

Изобретение относится к медицине, а именно х педиатрии, ревматологии, и может быть использовано в клинической практике для дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии у детей

Способ диагностики хронической инфекции // 1690691

Изобретение относится к медицине и биологии, а именно к способам иммунодиагностики хронических инфекционных заболеваний

Способ определения антигена // 1689858

Способ определения иммунологической реактивности организма // 1689857

Изобретение относится к способу определения иммунной реактивности организма и может быть использовано в области медицины , в частности физиологии и иммунологии

Способ диагностики аутоиммунного поражения печени // 1689856

Изобретение относится к медицине, конкретно к гепатологии

Способ иммунологического анализа // 1688164

Изобретение относится к иммунологии , в частности к методам определения антигенов с помощью иммунологических тестов

Способ получения антигенного препарата для определения антинуклеарного фактора // 1686933

Изобретение относится к медицине

Способ определения чувствительности организма к микроволновой резонансной терапии при язвенной болезни // 1686371

Способ определения содержания фибронектина в биологических жидкостях // 1686370

Способ диагностики ранних отклонений в иммунном статусе новорожденных детей // 2101707

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для диагностики ранних отклонений в иммунном статусе новорожденных

Способ выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам // 2102080

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к методам иммунохимического определения гаптенов (ксенобиотиков) в образцах биологического происхождения и объектах окружающей среды, и может быть использовано для выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам

Иммуногенная композиция против боррелиоза лайма, способ иммунизации млекопитающего против боррелиоза лайма, способ получения белка pc borrelia burgdorferi, диагностический агент для обнаружения b.burgdorferi и способ обнаружения антител к b.burgdorferi // 2102081

Изобретение относится к предотвращению болезни Лайма у млекопитающих

Устройства для автоматического проведения иммуноанализа за несколько последовательных этапов по меньшей мере одного биологического вещества из множества биологических образцов, способ и реактив для применения указанных устройств // 2102758

Изобретение относится к устройству для автоматического проведения иммуноанализа за несколько последовательных этапов по меньшей мере, одного биологического вещества из множества биологических образцов, а также к способу и реактивам для использования указанного прибора

Способ обнаружения или количественного определения аналита в образце // 2102759

Изобретение относится к анализам и, в частности к катализируемому осаждению репортера через активированный конъюгат для усиления детектируемого сигнала, вследствие чего улучшается детекция и/или количество аналита в образце

Способ обнаружения или количественного определения аналита в образце // 2102759

Способ определения биологически активных веществ в жидкостях и устройство для его осуществления // 2102760

Изобретение относится к области медицины, медицинской техники, ветеринарии, экологии и может быть использовано для определения биологически активных веществ в любых биологических жидкостях, окружающей среде, пищевых продуктах, в частности в диагностике вирусных, бактериальных, паразитарных и соматических заболеваний, а также для контроля эффективности лечения

Способ диагностики спаечной болезни брюшины у детей // 2103689

Изобретение относится к медицине, а именно к детской хирургии и клинической иммунологии, и может быть использовано для диагностики спаечной болезни брюшины у детей, оперированных по поводу острого аппендицита

Способ определения функциональной активности лейкоцитов при беременности // 2103690

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и может быть использовано для оценки состояния иммунной системы беременной женщины

Способ диагностики хронического простатита // 2103691

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики хронического простатита