Способ иммуноферментного определения миоглобина

 

Изобретение относится к иммунодиагностике , в частности к иммуноферментным способам определения миоглобина. Цель изобретения - сокращение времени определения . Предварительно сенсибилизируют твердую подложку специфическими антителами в концентрации 2.5 - 5,0 мкг/мл, затем инкубируют одновременно с исследуемой пробой и меченым пероксидазой хрена миоглобином с последующей инкубацией в течение 10 мин. После чего добавляют субстрат и по величине оптической плотности определяют концентрацию в пробе миоглобина. По сравнению с прототипом уменьшается время определения миоглобина в 9 раз.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)ю G 01 N 33/535

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4737917/14 (22) 07.08.89 (46) 15.11.91. Бюл. hh 42 (71) Таджикский государственный университет им. В.И.Ленина, Институт сердечно-сосудистой хирургии им. А,Н.Бакулева и

Кооператив "Медсервис" (72) С,П.Смотров, И.Н.Шапирова, Д.Б,Сапрыгин и H,В.Авилов (53) 615.473 (088.8) (56) Ермолин Г.А„Диков M.Ì., Соловьев

А.В, — Вопросы медицинской химии, 1986, М 1, с.130 — 134. (54) СПОСОБ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО

ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИОГЛОБИНА

Изобретение относится к иммунодиагностике, в частности к иммуноферментным способам определения миоглобина в пробах крови.

Целью изобретения является сокращение времени анализа.

Способ осуществляют следующим образом.

Для реализации способа используют меченый пероксидазой миоглобин. Для его получения к 4 мг предварительно активированной перйодатом натрия пероксидазы в карбонатном буфере рН 9,5 добавляют 8 мг миоглобина и инкубируют при постоянном перемешивании в течение 2 ч при комнатной температуре. Для стабилизации связи пероксидаза-миоглобин используют раствор боргидрида натрия с концентрацией

4 мг/мл. Инкубацию реакционной смеси в присутствии этого раствора проводят в течение 2 ч при 4 С, Очистку препарата осуществляют методом гель-хроматографии.

„„Я „„1691755 А1 (57) Изобретение относится к иммунодиагностике, в частности к иммуноферментным способам определения миоглобина. Цель изобретения — сокращение времени определения. Предварительно сенсибилизируют твердую подложку специфическими антителами в концентрации 2,5 — 5,0 мкг/мл, затем инкубируют одновременно с исследуемой пробой и меченым пероксидазой хрена миоглобином с последующей инкубацией в течение 10 мин. После чего добавляют субстрат и по величине оптической плотности определяют концентрацию в пробе миоглобина. По сравнению с прототипом уменьшается время определения миоглобина в 9 раз.

Пример 1. Для анализа используют предварительно обработанный антителами к миоглобину в концентрации 2,5 мкгlмл и

1 -ной лошадиной сывороткой полистироловый планшет, хранящийся при температуре-15 С. В лунки планшета вносят по 25 мкл растворов миоглобина-стандарта (от 1,25 до

160 мг/мл), а затем — в те же лунки по 25 мкл меченого пероксидазой миоглобина в разведении 1;300. Одновременно в свободные лунки вносят анализируемую пробу сыво- ротки крови и меченный пероксидазой миоглобин в том же состоянии. Инкубацию смесей в планшете проводят в течение 10 мин при 37 С. После отмывки водой лунки обрабатывают раствором казеина с концентрацией 0,5 мгlмл в 0,01 М фосфатном буфере рН 7,2. Затем определяют активность пероксидазы по общепринятой методике в присутствии хромогена 0 — фенилендиамина при 492 нм, По результатам оптической плотности растворов-стандартов строят калибровочную кривую и по ней рассчитывают концентрацию миоглобина в испытуемой сыворотке крови. Ее значение составляет 47,0 "- 1,35 нг/мл.

Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет уменьшить время определения миоглобина в 9 раз по сравнению с временем определения по про5 тоти пу, В прототипе на определение миоглобина в пробе затрачивается 90 мин, а в предлагаемом способе только 10 мин, Формула изобретения

10 Способ иммуноферментного определения миоглобина, включающий сенсибилизацию твердой подложки антителами, . инкубацию ее с пробой, содержащей миоглобин, и меченым пероксидазой хрена ре15 агентом с последующим добавлением субстрата и по величине оптической плотности определяют концентрацию миоглобина

s соответствии с калибровочной кривой, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью сокраще20 ния времени определения, в качестве peiгента используют миоглобин, меченый пероксидазой хрена, причем подложку сенсибилизируют антителами в концентрации

2,5 — 5,0 мкг/мл и инкубируют одновремен25 но с меченым миоглобином и исследуемой пробой в течение 10 мин.

Пример 2, Для анализа используют предварительно обработанный антителами к миоглобину в концентрации 3,75 мкгlмл и

1%-ной лошадиной сывороткой полистириловый планшет, хранящийся при температуре — 15 С. В дальнейшем определение миоглобина производят согласно примеру

1. Значение концентрации миоглобина в той же самой испытуемой пробе сыворотки крбви составляет 46,3 и 1,44 мг/мл.

Пример 3. Для анализа используют предварительно обработанный антителами к миоглобину в концентрации 5,0 мкг/мл и

1 g -ной лошадиной сывороткой полистироловый планшет, хранящийся при температуре-15 С. Затем определение миоглобина производят согласно примеру 1. Значение концентрации миоглобина в той же самой испытуемой пробе сыворотки крови составляет47,2 1,12 нг/мл, Составитель В,Литовченко

Техред M.Mîðãåíòàë Корректор И,Муска

Редактор lO.Cåpåäà

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101

Заказ 3924 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, К-35, Раушская наб., 4/5